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标题: 【求助】考马斯亮蓝 [打印本页]

作者: sunnyB 时间: 2014-6-28 15:43 标题: 【求助】考马斯亮蓝

我的考马斯染色后很难脱色，不知道是不是浓度过高！
请高手们指教！

作者: glass 时间: 2014-6-28 15:44

告诉你一个很好的方法,而且还比较省钱,我们原来的实验室的老板娘很抠,不让我们用脱色液,用水脱的效果又不好,我们最后终于发现在水里面加NaCl的脱色效果很好,但是请楼主注意,要经常盯着看,这个方法很容易脱过了.

作者: ending 时间: 2014-6-28 15:45

这跟浓度过高应该没多大关系,考马斯染色一般只需30分钟左右就可以了,假如染色时间过长就很难脱下了,不过你也可以在脱色液中脱色,不过脱色温度要保持在50度左右,你可以放在烘箱里过夜脱色或至少脱色6小时,看看能不能脱掉吧!

作者: hyuu 时间: 2014-6-28 15:45

多换几次脱色液肯定可以脱掉的,当然温度高一点速度回更快一点

作者: windy+++ 时间: 2014-6-28 15:45

我有个方法自己试过的，很好用！如果的胶只是用来粗鉴定的话，你可以这样做：
1 染色：用考液没过胶面，加热10分钟。
2 脱色：用自来水没过胶面，煮到你能看清楚条带就行了
这个方法虽然快速但是也要看情况而定。不要脱色时间太长，否则条带扩散严重哦。
不知道适合你用吗？希望能帮到你！

作者: 7437654 时间: 2014-6-28 15:46

脱色液自己配很便宜啊．已酸100ml甲醇450ml加水至1000ml.我用考马斯亮蓝染了半小时，脱了三十分钟就很清晰了，每十分钟换一次脱色液．

作者: 831226 时间: 2014-6-28 15:48

对，用脱色液很方便的！

作者: vcve 时间: 2014-6-28 15:49

我也是考染．一般是考染过夜．第二天用自来水褪色．可每次低分子那块褪的还好．可高分子那块底色还是很浓．是不是和我用自来水褪色有关．楼上几位说用煮的，胶不会煮化了吧？况且蛋白会不会变性啊？

作者: yychen 时间: 2014-6-28 15:49

用水煮胶是一个很好的方法，我一般胶染完后都用水先煮10-15分钟，微波炉高火，就可以看见条带了。要往水里加盐也可以，听说效果更好，我用过最BT的方法是用脱色液煮，里面还加了很多的小海绵块以增加脱色效果。当然煮的时间就不能和水煮的时间一样，要短很多，只要3-5分钟左右。这样即使染了很久的胶很快也就能看见条带了，只是煮了以后乙酸会挥发味道很重，要注意不要吸入。
胶是不会煮化的，只是注意水要多加，不然会煮破的，关于蛋白变性的问题，你跑SDS-PAGE的时候蛋白就已经变性了，煮胶不会让它更变性。：）

作者: redbutterfly 时间: 2014-6-28 15:49

还有一种简便快捷的方法，染色后先用纯醋酸脱色7－10min，然后再用脱色液1h搞定

作者: ending 时间: 2014-6-28 15:50

脱色液中配方中甲醇可换成乙醇，效果同样很好，使用方法相同。因为甲醇毒性很大！！

作者: ending 时间: 2014-6-28 15:50

我也是染色过夜，然后用250ml乙醇＋80ml醋酸用蒸馏水定容至1000ml的脱色液进行脱色

作者: sunnyB 时间: 2014-6-28 15:51

,谢谢了。我下次换掉。

作者: jujuba 时间: 2014-6-28 15:51

《蛋白质与蛋白质组学实验指南（影印版）》介绍了一种快速的脱色方法，我一直都在用的，2h就能看到清晰的点，大约3h后，背景几乎没有了。不过这个方法比较烧钱的，老板要是连脱色液都舍不得用的话，那就别试了。煮的胶应放在通风厨冷却，要不然那个味道有你受的。

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