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标题: 【求助】关于SDS丙烯酰胺电泳的问题 [打印本页]

作者: 6327555 时间: 2014-7-8 15:01 标题: 【求助】关于SDS丙烯酰胺电泳的问题

各位前辈老师们，我是刚毕业的学生，现在在做SDS电泳，之前也不断的出现过许多问题，但是从丁香园的帖子里学到很多知识，把问题一个一个都解决了，可是最近出现了一个问题，我改变了几乎所有可以改变的条件后问题仍然没有得到解决，所以我来到这里，希望可以有前辈老师或者高人给我一些指导和意见，帮助我早日解决这一问题！我现在跑的电泳是浓缩胶50V 30分钟，分离胶120V至电泳结束，其它都是按书上要求的做的，现在问题是我跑完的胶只能看到25万的那条蛋白条带，18.4W的那条带就几乎正好和溴酚蓝重合了，几乎看不到，而我们最需要看到的14.4W的那条带就完全看不到了。其实以前我跑分离胶用的是150V的电压，现在改成120V了也还是看不到14.4的蛋白条带！下面我附上的图前面2张是之前在这里工作的师姐跑的电泳图，她跑的很漂亮14.4W那条可以很清楚地看见，而后面两张图是我最近跑的电泳图，就只可以看到18.4W的那条。希望前辈高人们可以给我点指导，提点意见!

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作者: 8princess8 时间: 2014-7-8 15:02

建议分离胶浓度加大一些，另外可以先用预染Marker走一次，只要相应的Marker条带跑开了，掌握好电压及时间再用你这个Marker跑一次，应当差不多了。

作者: DONT 时间: 2014-7-8 15:02

胶的浓度低了，下面的小分子量蛋白聚在一起，比较一下上下两块胶marker最下面的2条带即可看出来。
要增加胶的浓度。

作者: shenkunjie 时间: 2014-7-8 15:02

我的同学采用的是19:1的聚丙烯酰胺来跑低分子量的蛋白。他的蛋白大概是9KD！不知道这个信息对你是否有用。

作者: 6327555 时间: 2014-7-8 15:03

分离胶浓度提高，电泳时间不要过长。

作者: 6327555 时间: 2014-7-8 15:05

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原帖由 8princess8 于 2014-7-8 15:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

建议分离胶浓度加大一些，另外可以先用预染Marker走一次，只要相应的Marker条带跑开了，掌握好电压及时间再用你这个Marker跑一次，应当差不多了。

真的实在是太感谢你了等周一回去上班我就照您说的方法试试看谢谢您的帮助和指导！！

作者: 6327555 时间: 2014-7-8 15:06

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原帖由 DONT 于 2014-7-8 15:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

胶的浓度低了，下面的小分子量蛋白聚在一起，比较一下上下两块胶marker最下面的2条带即可看出来。
要增加胶的浓度。

首先真的很感谢你其次觉得您说的很有道理我会按您说的做适当改变的万分感谢

作者: 6327555 时间: 2014-7-8 15:06

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原帖由 shenkunjie 于 2014-7-8 15:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我的同学采用的是19:1的聚丙烯酰胺来跑低分子量的蛋白。他的蛋白大概是9KD！不知道这个信息对你是否有用。

谢谢您的意见我会按您说的把丙烯酰胺的浓度做适当改变试试看的您的信息对我很有用再次感谢

作者: 6327555 时间: 2014-7-8 15:07

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原帖由 6327555 于 2014-7-8 15:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

分离胶浓度提高，电泳时间不要过长。

恩恩好的感谢您我会按您的意见适当改变实验条件再重新做实验的很感谢您

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