分析测试百科

标题: 【求助】流式细胞仪检测细胞周期 [打印本页]

作者: jujuba 时间: 2014-8-2 18:07 标题: 【求助】流式细胞仪检测细胞周期

请帮忙分析一下第一张是未转染的第12代，第二章是转染后的第22代。能说明转染后的细胞增值能力强了吗，怎么看出来的。谢谢。希望能具体一点，我是个新手

图片附件: 25341777.snap.jpg (2014-8-2 18:07, 26.86 KB) / 该附件被下载次数 66
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=26178

作者: 89tongzijun 时间: 2014-8-2 18:07

横坐标是什么标定的？EI?

作者: jujuba 时间: 2014-8-2 18:17

DNA content

作者: jujuba 时间: 2014-8-2 18:17

G1 期不变，S期延长，说明什么问题？阻滞在S期吗？
G1 S G2 凋亡率
N12 79.24% 5.92% 14.84% 2.08%
TN22 80.31% 10.47% 9.21% 0.11%
这种周期算有明显变化吗？
此种结果应该怎样解释呢

作者: rxcc33 时间: 2014-8-2 18:18

横坐标指的是插入DNA的染料荧光强度，左边又瘦又高的峰指G1期，有一份DNA，即一份荧光染料插入。最右边的峰指S期，有两份DNA，即两份荧光染料插入。
从你的结果，我没有看出转然后细胞增值能力增强的结果，我的看法：
1：G1期的百分含量相差不多，即处于静止期的细胞数量相当
2：转然后虽然处于S期的细胞含量增加，但是处于G2的细胞减少，即处于增值期的细胞总量是不变的。
以上仅是我的观点，和你讨论一下

作者: gemei0115 时间: 2014-8-2 18:18

第一张图：增值率S（合成期）＋G2/M（合成后期/分裂期）：21.7％
第二张图：增值率S（合成期）＋G2/M（合成后期/分裂期）：19.6％
据此分析两者的增值没有明显的差别。虽然第二张图比第一张图的S期有所增高，但G2期下降了。
细胞周期是基于细胞处于不同分裂时期具有不同的DNA含量而分析细胞处于不同的时期的方法。确切的说结果中G1期的百分比实际上是G1＋G0期细胞的百分比。 G2的百分比实际上是G2＋M期细胞的百分比。

作者: toy 时间: 2014-8-2 18:19

要看增殖用Brdu吧。
支持楼上的说法！

作者: 二子 时间: 2014-8-2 18:20

图上最高的峰代表了G1期（也称2倍体峰），后面的代表G2期、S期（也称4倍体峰）。
细胞周期的概念：细胞由一次分裂结束到下一次分裂结束，都要经历相同的变化阶段(即G1→S→G2→M )周而复始地进行活动，细胞的这种生长、分裂循环即称为细胞周期(cell cyc1e)。一个细胞周期包括有丝分裂期(M)和分裂间期(G1、S、G2)。尽管在各种细胞中各期所占时间都不尽相同，但相对而言M期最短，S期却较长。
分裂间期：
1 、G1期，前一次有丝分裂完成到S期开始。各种与DNA复制有关的酶明显增多，线粒体、叶绿体、核糖体增多，内质网在更新扩大，高尔基体、溶酶体都增加，中心粒彼此分离、复制。
2、S期：DNA、组蛋白合成
3、G2期， S期结束后到有丝分裂开始。由上可以看出G2期、S期、M期反映了细胞的增殖活性，特别是G2期、S期（因M期较短）。因而，G2/M％+S％反映了细胞增殖能力。二者有无差别要进行统计检验。
细胞周期阻滞：对于生殖细胞及保持增殖能力的细胞(如干细胞)，由于细胞不断的增殖，细胞总是处于从G1 、S、G2 和M 期的连续的细胞周期中。在细胞周期的各阶段，细胞分别进行着DNA 复制、蛋白质合成及细胞分裂等重要的生理活动。每一阶段都是下一阶段的准备期, 真核细胞可以在启动下一个周期前监测与一个细胞周期顺利完成相关的生化事件，这包括各种体内外因素威胁下游事件进行时可逆地将细胞周期阻滞在特定的生理阶段的能力，而这种特定的生理阶段称为检定点(checkpoint) 。只有前一阶段的生理活动完成后，才能通过称为检定点的阶段，进入周期的下一步，一些突发事件引发的细胞反应能影响驱动细胞周期前进的因子，从而使细胞周期停滞在检定点，这被称为细胞周期阻滞(cell cycle arrest)。
比较相应的细胞G1 、S、G2 期差异有无统计学意义，才能说有无细胞周期阻滞。

作者: kuohao17 时间: 2014-8-2 18:20

在G1期细胞百分数相差不明显的情况下,如果两组间G2期细胞数量有统计学差异是否就可以说,细胞周期被阻断在G2/M期?

作者: sunnyB 时间: 2014-8-2 18:20

S期细胞比例（S phase fraction，SPF）就足以说明细胞群落的增殖特性了。
没有必要引入G2/M比例。
具体参见H.M.Shapiro的Practical Flow Cytometry第四版p448-451
只不过一对样本的5%到10%的变化是不足以说明问题的。

作者: jujuba 时间: 2014-8-2 18:21

发表一点愚见：看了你的图结果发现你的结果中CV值好像大，这样不太好吧！？
评价仪器精度的重要指标是仪器的变异系数(CV)，对于校准样品，其CV值越小越好，CV值越小，说明仪器校正的精度越高。校准样品包括非生物样品(荧光微球)和生物细胞样品( 人淋巴细胞、鸡红细胞等) 。目前，非生物荧光微球已有商品试剂，CV一般<2％-3％。
附上一个关于细胞流式的文件。

作者: idea2011 时间: 2014-8-2 18:21

如果要进行DNA分析，应采用线性信号，此时对CV值要求较高，不是一般荧光检测的3%以内，而应该在laser alignment时严格校准在2%以内。
应用标准微球我一般要将CV值校准在1%左右才做DNA分析。

作者: 7437654 时间: 2014-8-2 18:21

一对样本的5%到10%的变化是不足以说明问题的。如果一百对样本都是5%到10%的变化就可以说明问题。
当然不是要你去做100次重复试验，而是说在少样本对照时如果差异足够大，那么样本数可以很少，但是如果像你这样的数值变化幅度，需要很大样本量才有说服力。这其实是统计学的基本原理。

作者: jujuba 时间: 2014-8-2 18:22

转染后比转染前凋亡率降低了，可以这么说吗？

作者: jujuba 时间: 2014-8-2 18:23

考虑不周全，试验设计问题。后悔晚矣

作者: leifengta 时间: 2014-8-2 18:23

发表一点愚见：看了你的图结果发现你的结果中CV值好像大，这样不太好吧！？
评价仪器精度的重要指标是仪器的变异系数(CV)，对于校准样品，其CV值越小越好，CV值越小，说明仪器校正的精度越高。校准样品包括非生物样品(荧光微球)和生物细胞样品( 人淋巴细胞、鸡红细胞等) 。目前，非生物荧光微球已有商品试剂，CV一般<2％-3％。
附上一个关于细胞流式的文件。
大家共同讨论！
......

==================================================================

测定DNA周期时，将CV值调整到需要的范围是件很难的事情，具体措施都是什么呢？

作者: jujuba 时间: 2014-8-2 18:24

复杂的东西，要是能有个专门的人辅导一下就好了

作者: zhenxin 时间: 2014-8-2 18:25

laser alignment就是照操作规程调整光路就是了，没有什么复杂的。要说困难，可能就是有时候光路偏移较大，要有耐心多花点时间就是了。
下面是今天晚上实验前校正光路的结果，耗时10分钟。

图片附件: 90504909.snap.jpg (2014-8-2 18:25, 45.31 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=26179

作者: junhun 时间: 2014-8-2 18:25

本人菜鸟一个！随便搭车问问高手，我近期检测细胞周期，发现对照组与试验组S,G1期的变化不显著，但G2期试验组比对照组显著增高，是说明阻滞在G2期了吗？还应该怎么解释呢？可以简单的理解为处理组的细胞增值抑制了吗？

作者: newway 时间: 2014-8-2 18:25

应该是阻滞在G2/M期。

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)