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标题: 【求助】DEPC处理后的灭菌水对Q-PCR以及PCR... [打印本页]

作者: PCR 时间: 2014-8-28 11:07 标题: 【求助】DEPC处理后的灭菌水对Q-PCR以及PCR...

0.1%的DEPC处理后的水，经过高压灭菌，对pcr以及Q-PCR结果会有什么影响？问这个问题，主要是实验室没有miliQ的水，若果有这种水，都不用灭菌直接可用

作者: ending 时间: 2014-8-28 11:07

首先回答你的问题：没有任何影响。其次，PCR以及Q-PCR根本不需要DEPC处理过的水，DEPC处理只要是针对RNA操作的。一般的双蒸水高压灭菌后就足够了。

作者: PCR 时间: 2014-8-28 11:09

谢谢你的答案。
我主要纠结的原因是我现在在做VIGS，实验室的两个人说做的结果很好，用病毒提取液直接做，但是我的结果就是非常烂，人家说检测的病毒毒力在10000以上，我最大的也不过100，所以我纠结啊

作者: zwsyrt 时间: 2014-8-28 11:09

你检测的病毒是RNA病毒还是DNA病毒，DNA病毒的话，没有必要DEPC水处理；如果是RNA病毒，那建议你用DEPC处理水。另外，0.1%DEPC本身对PCR没有影响

作者: zwsyrt 时间: 2014-8-28 11:10

要提高检测毒力的话，可以试试其它手段。比如增加单次反应引物探针量，退火温度优化，buffer优化等等

作者: PCR 时间: 2014-8-28 11:10

QUOTE:

原帖由 zwsyrt 于 2014-8-28 11:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

要提高检测毒力的话，可以试试其它手段。比如增加单次反应引物探针量，退火温度优化，buffer优化等等

我检测的是RNA病毒，用病毒提取液，我都检测过N次了都是稳定的一塌糊涂，不高不超过25，用反转录产物检测同样的样本毒力达到600000

作者: zwsyrt 时间: 2014-8-28 11:10

不清楚你扩增的体系是什么，反转录产物检测是要比直接检测RNA信号更高，用一步法real-time PCR就可以做到。可以对你的扩增程序优化，先反转录，后面的循环可以分出一部分富集产物，但不收集荧光

作者: 17685573913 时间: 2018-3-2 13:11

0.1%的DEPC处理后的水，经过高压灭菌，对定量pcr以及Q-PCR没有影响。0.1% DEPC水一般只在提取RNA的时候能用到，DEPC是RNA酶抑制剂。而一般做PCR和Q-PCR(实时定量PCR)用双蒸水就可以了。同时DEPC具有刺激性，对眼睛和气道粘膜有强刺激，DEPC也是一种潜在的致癌物质，所以一定要谨慎使用。

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