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标题: 【求助】细胞生物学实验的镜检标本制备必须取材新鲜... [打印本页]

作者: =菓子= 时间: 2014-10-10 16:36 标题: 【求助】细胞生物学实验的镜检标本制备必须取材新鲜...

细胞生物学实验的镜检标本制备必须取材新鲜且迅速固定，为什么？透射电镜观察的样品为什么必须事前进行脱水处理？

作者: nn255 时间: 2014-10-10 16:37

不光是细胞生物学，绝大多数生物学研究都需要尽快制备标本，以免细胞结构或成分发生变化。
不光是透射电镜样品需要脱水，石蜡切片也是一样的，否则无法包埋和切片，因为包埋剂一般是脂溶性的，只不过石蜡切片用石蜡包埋，电镜标本用树脂包埋。
扫描电镜样品也通常要进行脱水处理，否则无法镀膜，而且会变形。

作者: =菓子= 时间: 2014-10-10 16:37

QUOTE:

原帖由 nn255 于 2014-10-10 16:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不光是细胞生物学，绝大多数生物学研究都需要尽快制备标本，以免细胞结构或成分发生变化。
不光是透射电镜样品需要脱水，石蜡切片也是一样的，否则无法包埋和切片，因为包埋剂一般是脂溶性的，只不过石蜡切片用石蜡包埋，电镜标本 ...

问题是为什么要这样做呢？谢谢

作者: ladyhuahua 时间: 2014-10-10 16:37

细胞生物学实验的镜检标本制备必须取材新鲜且迅速固定
还有酶的原因。

作者: =菓子= 时间: 2014-10-10 16:38

这个是考研真题，系统的回答应该答上哪些要点呢？

作者: ladyhuahua 时间: 2014-10-10 16:38

我不是已经告诉你了？
再详细一点，电镜标本的制作过程是这样的：
戊二醛固定——PBS冲洗——锇酸固定——PBS冲洗——丙酮逐级脱水——树脂（如EPON812）+丙酮渗透——纯树脂渗透——包埋——聚合——修块——超薄切片——柠檬酸铅和醋酸双氧铀染色——电镜观察。
经历了由水相——油相——水相的过程，不脱水行吗？要善于思考，不要善于记忆知识点！！！
石蜡切片和这个过程大同小异。

作者: =菓子= 时间: 2014-10-10 16:38 标题: 回复 #6 ladyhuahua 的帖子

这个问题我问过我们老师了，老师的回答是这样的：
因为离体的细胞处在很低的大气压中，膜结构很不稳定，时间长了之后会导致膜结构破坏，整个细胞就支离破碎了。

作者: ladyhuahua 时间: 2014-10-10 16:39

你们老师的答案可能不正确，那离体培养的细胞就活不成了？

作者: =菓子= 时间: 2014-10-10 16:39

您所说的离体的细胞也是要有环境的吧，什么培养液之类的东西应该是要的吧，但是要镜检的话，在载玻片这些条件都是不存在的啊，所以要迅速固定啊！
您说呢？

作者: ladyhuahua 时间: 2014-10-10 16:39

正是因为细胞离体之后，失去了原来的生存环境（譬如能量得不到补充等），结构和成分会发生变化，甚至死亡破裂。

作者: TNT 时间: 2014-10-10 16:40

觉得ladyhuahua老师和楼主说的有些差开了。
这两个问题还是不同的。分开解释比较好。

作者: wiwi 时间: 2014-10-10 16:40

我觉得主要还是防止酶的自溶作用。
以前写试验方案时整理的关于固定的资料：
固定的目的：
更好的保持细胞原有的形态结构；
多数蛋白为水溶性，固定可使细胞内蛋白质凝固，防止抗原弥散；
终止或抑制外源性和内源性酶活性；
最大限度的保存细胞的抗原性。

作者: ladyhuahua 时间: 2014-10-10 16:41

QUOTE:

原帖由 wiwi 于 2014-10-10 16:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我觉得主要还是防止酶的自溶作用。
以前写试验方案时整理的关于固定的资料：
固定的目的：
更好的保持细胞原有的形态结构；
多数蛋白为水溶性，固定可使细胞内蛋白质凝固，防止抗原弥散；
终止或抑制外源性和内源性酶活性；
最大限 ...

是的，这个回答是很完整的

作者: =菓子= 时间: 2014-10-10 16:41

在老师给我们的课后联系题上也有这个题，是在第六章，内质网和高尔基那一章里，我想，难道这只是一个纯粹实验的问题吗？那为什么老师会在这一章的练习题中给出呢？

作者: 麦茶tea 时间: 2014-10-10 16:42

样品取材的基本要求
⑴　快　取材的动作要迅速，最好在材料离体后１min内就进入固定液；解剖器械要锋利，避免牵拉和挤压，尽量减少取材中的机械损伤。
⑵　准　取材要准确。①　器官要准确　②　部位要准确：如脑垂体的前叶和后叶要分清，其结构和功能各不相同。
⑶　冷　取材过程应尽量在低温下进行（０～４℃），以降低酶的活性，减少细胞内结构的损失。
⑷　小　所取材料体积要小，一般不超过１㎜3。因为固定剂的渗透力较弱，若组织块太大，块的内部将得不到良好的固定。

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