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标题: 【求助】为什么细胞总也铺不匀？ [打印本页]

作者: xyw5 时间: 2014-10-11 11:18 标题: 【求助】为什么细胞总也铺不匀？

接种细胞到12或24孔板，细胞总是集中挤到孔的中央部分，怎么摇细胞也铺不匀，很苦恼，各位大侠有什么诀窍啊？多谢了。

作者: join 时间: 2014-10-11 11:19

我也碰到了这种情况，听别人介绍接种细胞前每个孔里先加少量培养液，接种后抖动培养板，效果好了一些，但问题还是没完全解决，还是有的地方没有细胞，不知道哪位大侠能介绍一下更好的方法啊？

作者: zzzz 时间: 2014-10-11 11:19

可能是否和细胞种类也有关系吧，我以前养MKN28，45也有这样，但现在cos－7很好，只要前后轻轻摇晃几下，在培养箱中再摇。

作者: uuooii 时间: 2014-10-11 11:20

我做MTT的时候用的96孔版也有这样的问题，24孔回好一些，不过我觉得对实验结果的影响不是很大。如果做转染，现在有用DULE LUCIFERASE系统做校正，所以结果还可以。如果做MTT可能多做几组会好一些，其他的俺就没作过。因为不管做什么实验，之前是不是都要有一个优化细胞数量的问题，你有没有作过？

作者: ha111 时间: 2014-10-11 11:20

经验之谈

细胞均匀度特别是对于转染来说是很重要的（很多人都为此苦恼），本人的做法你可以借鉴一下：首先常规接种后，切忌摇晃！！这一点很重要，举个例子来说，装一杯污水，轻轻一晃，什么乱七八糟的东西都聚到中间了，可能是向心力在做怪吧。本来种的较均匀的细胞越发聚到中间了，这是个误区！如不是很均匀，对于6孔板，因为培养基较多，用吸管轻轻吸吹几次，中间吸出，边缘打进，反复几次后盖盖后不要晃动，小心置培养箱，待贴壁后再观察，切忌反复拿动。对于12或24孔板就简单一些，培养基较少，吸出打进反复几次就可以了。这方面如有问题多联系！

作者: birdfish 时间: 2014-10-11 11:20

果然不错。不过我有疑问，为什么在24-well format中，细胞往往多集中于孔的边缘，而不是中间？

作者: junhun 时间: 2014-10-11 11:21

我是这样做的：先在培养孔里加少许培养液，然后接种细胞，震荡，就象楼上所说，是左右的抖动，我是用手轻敲板子的边缘，然后很重要的一步是在平整的操作台上室温放置10-15分钟，然后到培养箱中培养，到贴壁时再看，绝对没有不均匀的现象。另外，取放板子的过程都要轻轻的，避免晃动。可以试试。

作者: any333 时间: 2014-10-11 11:21

你说的情况是少数，只需用吸管吸出再打进连续3－5次即可。

作者: gogo 时间: 2014-10-11 11:22

细胞均匀度特别是对于转染来说是很重要的（很多人都为此苦恼），本人的做法你可以借鉴一下：首先常规接种后，切忌摇晃！！这一点很重要，举个例子来说，装一杯污水，轻轻一晃，什么乱七八糟的东西都聚到中间了，可能是向心力在做怪吧。本来种的较均匀的细胞越发聚到中间了，这是个误区！如不是很均匀，对于6孔板，因为培养基较多，用吸管轻轻吸吹几次，中间吸出，边缘打进，反复几次后盖盖后不要晃动，小心置培养箱，待贴壁后再观察，切忌反复拿动。对于12或24孔板就简单一些，培养基较少，吸出打进反复几次就可以了。这方面如有问题多联系！

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不错，多谢，我按你的方法做果然细胞很均匀！希望大家能多参加我们的论坛，介绍你们宝贵的经验，而这些经验在书本上是看不到的，但对于我们的试验又是很关键的！

作者: october7 时间: 2014-10-11 11:22

果然不错。不过我有疑问，为什么在24-well format中，细胞往往多集中于孔的边缘，而不是中间？

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你说的这种情况也很常见,前面我说过,在24孔板内的培养基较少,所以只需用吸管连续吸吹几次就可以了,吸的时候要连细胞一起吸完再打下去(动作不要过猛否则培养基会溅出). sorry,由于前几天本机子没装五笔所以打字很是困难,其实前面已发一贴是对你说的,只是忘了引用你的,不好意思!

作者: chuntian1983 时间: 2014-10-11 11:22

采用前后摇晃的方法和用吸管吹打都是很有用的经验。值得推广。

作者: rxcc33 时间: 2014-10-11 11:23

我用的摇动方法是8字摇动培养板，这样效果不错的，很均匀！

作者: tianmei001 时间: 2014-10-11 11:23

楼上建议不错,但有时细胞还会集中于孔的边缘,可能是由于吸管来回吹吸的原因吧.

作者: =pkchen= 时间: 2014-10-11 11:23

我觉得和液体表面张力有关，孔越小越明显。另外，对培养器皿底部地处理也很重要.我觉得必要的摇晃还是应该的，关键看你摇晃地是不是对，只要不作产生涡流底旋转型动作就好。

作者: baidukk 时间: 2014-10-11 11:24

吸管来回吹吸，只是在孔中间进行操作，应该不会使细胞集中到孔的边缘吧。

作者: ha111 时间: 2014-10-11 11:24

我也曾为种六孔板不匀而大伤脑筋，重复做了好几次也没有很大的进展，很是郁闷，后来想了一些方法改进，现在做的要比以前好些了，有一些心得供大家参考：（1）像hblfj说的，种完后不要再显微镜下观察，这样可以增加晃动的机会，事实证明晃动可以使细胞集聚。（2）种的细胞时候细胞不要太多，最好在种之前计数，培养液最好多加一点，不要觉得使浪费。（3）细胞在孔中央吹打支持GUMP的观点，hblfj是细胞培养的专家，我们有什么搞不定的都问他的

作者: zwsyrt 时间: 2014-10-11 11:25

细胞均匀度特别是对于转染来说是很重要的（很多人都为此苦恼），本人的做法你可以借鉴一下：首先常规接种后，切忌摇晃！！这一点很重要，举个例子来说，装一杯污水，轻轻一晃，什么乱七八糟的东西都聚到中间了，可能是向心力在做怪吧。本来种的较均匀的细胞越发聚到中间了，这是个误区！如不是很均匀，对于6孔板，因为培养基较多，用吸管轻轻吸吹几次，中间吸出，边缘打进，反复几次后盖盖后不要晃动，小心置培养箱，待贴壁后再观察，切忌反复拿动。对于12或24孔板就简单一些，培养基较少，吸出打进反复几次就可以了。这方面如有问题多联系！

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谢谢,难怪我每次细胞总之长不均匀,尤其是细胞瓶的边缘和后方

作者: jujuba 时间: 2014-10-11 11:25

我是做MTT的，买了进口96板后smmc7721铺板时，细胞总是集中在中央。也就在前几天，突然突发奇想，我也没想上面说的那么正规，就随便的O型震荡，再上下震荡，最后再O型震动了一下，我看细胞分布都非常的均匀。
另外，希望跟我做的前辈能给我点建议

作者: nut6694 时间: 2014-10-11 11:25

不错，我的细胞在24孔培养板中也是边缘先张满，中间比较稀松，难道有边缘效应？

作者: qhyu 时间: 2014-10-11 11:25

我作MTT时没有出现分布不均。相反，24板却集中在中央，后来我先加500ul陪基，待细胞贴壁后在多加些，细胞分布就均匀了。我想，与板子的质量有关，可能是板子底部不平引起的。

作者: linlinstar 时间: 2014-10-11 11:26

上次我试验时,无意中将1ML的细胞悬液分成两次吸,每次0.5,发现铺得比什么时候都要均匀些,不知道大家的结果是不是一样的.还想试试看,
现在做转染老是失败,请教大家什么地方可以找到这方面的资料

作者: uuooii 时间: 2014-10-11 11:26

怎么不可以摇，我都是先上下再左右，最后转圈搖啊！

作者: 9妖9 时间: 2014-10-11 11:26

前后摇几下，左右摇几下，一定不要回旋晃动

作者: 04906 时间: 2014-10-11 11:27

7楼，向心力做的是离心运动啊

作者: 了了 时间: 2014-10-11 11:27

我用的方法是左右来回晃动可以力量稍微大一些放入培养箱时一定要小心不要再晃动了否则细胞又会聚在中间了

作者: panda王 时间: 2014-10-11 11:28

我的心肌细胞也是集聚在边缘？

作者: join 时间: 2014-10-11 11:28

各位分析的很有道理，但是我还想知道如果培养瓶里细胞不均匀应该怎么处理？也不能摇晃吗？

作者: qiangren789 时间: 2014-10-11 11:28

果然高手很多啊，学习经验！多谢~ 最好不要用离心力吧，对细胞比较不好

作者: birdfish 时间: 2014-10-11 11:29

加细胞液的时候不要一下子全进去，控制手上的力量，让枪头在孔板上走一圈，这样比较均匀

作者: 969 时间: 2014-10-11 11:29

我铺的96孔板，也有铺板不均的问题，谁能告诉我：铺板之前混匀，是怎样混匀？用移液枪吗？可不可以直接上下颠倒离心管？

作者: abc816 时间: 2014-10-11 11:30

边缘效应的问题，液体张力等

作者: wood533 时间: 2014-10-11 11:30

我想做转染，老是摇不匀！来回吹吸可以啊

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