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标题: 【求助】如何克隆启动子 [打印本页]

作者: 粉色萤火虫 时间: 2014-10-26 21:58 标题: 【求助】如何克隆启动子

我克隆出来了一个基因的全长，想克隆基因的启动子，想问下有没有哪位大侠克隆过启动子的，大家交流一下，用试剂盒的也可以，不是用试剂盒也可以的。麻烦大家了！

作者: XYZQ 时间: 2014-10-26 21:58

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我克隆出来了一个基因的全长，想克隆基因的启动子，想问下有没有哪位大侠克隆过启动子的，大家交流一下，用试剂盒的也可以，不是用试剂盒也可以的。麻烦大家了！ ...

是植物还是动物？

作者: wzqzy 时间: 2014-10-26 21:59

有很多根据已知序列扩增上下游未知序列的方法，Tail PCR,SEFA PCR等等。

作者: 粉色萤火虫 时间: 2014-10-26 21:59

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是植物还是动物？

克隆盐藻的，是植物的

作者: 粉色萤火虫 时间: 2014-10-26 21:59

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原帖由 wzqzy 于 2014-10-26 21:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有很多根据已知序列扩增上下游未知序列的方法，Tail PCR,SEFA PCR等等。

我想用热不对称PCR，但是不知道那个随机简并引物（AD）如何来的

作者: XYZQ 时间: 2014-10-26 22:00

那个就用原作者论文或者别人已经发表的论文中的就可以。不过据说Tail PCR效果要差些

作者: 粉色萤火虫 时间: 2014-10-26 22:01 标题: 回复 #6 XYZQ 的帖子

我看到的文献都是说TAIL-PCR，效果如何好，简便灵敏度高，请问你克隆过启动子吗？

作者: XYZQ 时间: 2014-10-26 22:01

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我看到的文献都是说TAIL-PCR，效果如何好，简便灵敏度高，请问你克隆过启动子吗？

用SEFA PCR吧

作者: wanglaoshi 时间: 2014-10-26 22:02

直接在NCBI上查出该基因组promoter序列，提取genomic DNA，根据序列设计引物再做普通的PCR不就行了吗

作者: 粉色萤火虫 时间: 2014-10-26 22:03

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直接在NCBI上查出该基因组promoter序列，提取genomic DNA，根据序列设计引物再做普通的PCR不就行了吗

我是克隆未知启动子的

作者: ladyhuahua 时间: 2014-10-26 22:03

现在有全基因组序列信息的物种不多吧！

作者: yapuyapu 时间: 2014-10-26 22:04

哦，这个我不太清楚。因为最近我也要克隆启动子，恰好我的是人的，有全基因组序列咧。

作者: yapuyapu 时间: 2014-10-26 22:04

请问你这个基因是从全基因组DNA扩出来的吗？好扩不好扩？引物你有加酶切位点吗？

作者: 粉色萤火虫 时间: 2014-10-26 22:05

是要从全基因组DNA中扩的，所以要提取总RNA，最近按照刘光耀老师的一篇文献来做热不对称PCR，今天刚把引物发出去，还没有扩呢，期待啊

作者: 粉色萤火虫 时间: 2014-10-26 22:06

我按照站友的文献设计引物的，他的给定的引物中有NotI酶切位点的

作者: gogo 时间: 2014-10-26 22:07

宝生物有个步移试剂盒，用来做这个挺好用，前一段时间师姐用它克隆启动子，一下子就出来了

作者: eric930 时间: 2014-10-26 22:08

我也打算开始做启动子我使用LA--PCR in vitro cloning kit 可我不知道该怎么选择酶，你现在还在做启动子吗? 能不能传授下经验啊?

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