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标题: 【分享帖】细胞培养常见问题及回答 [打印本页]
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:38     标题: 【分享帖】细胞培养常见问题及回答


1.如何选用培养基？

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件：
细胞系        细胞类型        种        组织        推荐使用的培养基
293        成纤维细胞        人        胚胎肾        MEM, 10% 热灭活马血清
3T6        成纤维细胞        小鼠        胚胎        DMEM, 10% 胎牛血清
A549        上皮细胞        人        肺癌        F-12K, 10%胎牛血清
A9        成纤维细胞        小鼠        结缔组织        DMEM, 10%胎牛血清
AtT-20        上皮细胞        小鼠        垂体肿瘤        F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清
BALB/3T3        成纤维细胞        小鼠        胚胎        DMEM, 10% 胎牛血清
BHK-21        成纤维细胞        仓鼠        肾        GMEM, 10% 胎牛血清 或MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA
BHL-100        上皮细胞        人        乳房        McCoy'5A, 10% 胎牛血清
BT        成纤维细胞        牛        鼻甲骨细胞        MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA
Caco-2        上皮细胞        人        结肠腺癌        MEM, 20% 胎牛血清 和NEAA
Chang        上皮细胞        人        肝脏        BME, 10% 小牛血清
CHO-K1        上皮细胞        仓鼠        卵巢        F-12, 10% 胎牛血清
Clone 9        上皮细胞        大鼠        肝脏        F-12K, 10% 胎牛血清
Clone M-3        上皮细胞        小鼠        黑素瘤        F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清
COS-1        成纤维细胞        猴        肾        DMEM, 10% 胎牛血清
COS-3        成纤维细胞        猴        肾        DMEM, 10% 胎牛血清
COS-7        成纤维细胞        猴        肾        DMEM, 10% 胎牛血清
CRFK        上皮细胞        猫        肾        MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA
CV-1        成纤维细胞        猴        肾        MEM, 10% 胎牛血清
D-17        上皮细胞        狗        骨肉瘤        MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA
Daudi        成淋巴细胞        人        淋巴瘤病人血液        RPMI-1640, 10% 胎牛血清
GH1        上皮细胞        大鼠        垂体肿瘤        F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清
GH3        上皮细胞        大鼠        垂体肿瘤        F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清
H9        成淋巴细胞        人        T细胞淋巴瘤        RPMI-1640, 20% 胎牛血清
HaK        上皮细胞        仓鼠        肾        BME, 10% 小牛血清
HCT-15        上皮细胞        人        结肠直肠腺癌        RPMI-1640, 10% 胎牛血清
HeLa        上皮细胞        人        子宫颈癌        MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA (in suspension, S-MEM)
HEp-2        上皮细胞        人        喉 癌        MEM, 10% 胎牛血清
HL-60        成淋巴细胞        人        早幼粒细胞白血病        RPMI-1640, 20% 胎牛血清
HT-1080        上皮细胞        人        纤维肉瘤        MEM, 10% HI 胎牛血清 和NEAA
HT-29        上皮细胞        人        结肠腺癌        McCoy's 5A, 10% 胎牛血清
HUVEC        内皮细胞        人        脐带        F-12K, 10% 胎牛血清 和 肝素盐 100 ug/ ml
I-10        上皮细胞        小鼠        睾丸癌        F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清
IM-9        成淋巴细胞        人        骨髓瘤病人骨髓        RPMI-1640, 10% 胎牛血清
JEG-2        上皮细胞        人        绒毛膜癌        MEM, 10% 胎牛血清
Jensen        成纤维细胞        大鼠        肉瘤        McCoy's 5A, 5% 胎牛血清
Jurkat        成淋巴细胞        人        淋巴瘤        RPMI-1640, 10% 胎牛血清
K-562        成淋巴细胞        人        骨髓性的白血病        RPMI-1640, 10% 胎牛血清
KB        上皮细胞        人        口腔癌        MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA
KG-1        骨髓白细胞        人        红白血病病人骨髓        IMDM, 20% 胎牛血清
L2        上皮细胞        大鼠        肺        F-12K, 10%胎牛血清
L6                大鼠        骨骼肌成肌细胞        DMEM, 10% 胎牛血清
LLC-WRC 256        上皮细胞        大鼠        癌        Medium 199, 5% 马血清
McCoy        成纤维细胞        小鼠        未知        MEM, 10% 胎牛血清
MCF7        上皮细胞        人        乳腺癌        MEM, 10% 胎牛血清 NEAA, 10ug/ml 胰岛素
WEHI-3b        类巨噬细胞        小鼠        骨髓单核细胞白血病        DMEM, 10% 胎牛血清
WI-38        上皮细胞        人        胚胎肺        BME, 10% 胎牛血清
WISH        上皮细胞        人        羊膜        BME, 10% 胎牛血清
WS1                人        胚胎皮肤        MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA
XC        上皮细胞        大鼠        肉瘤        MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA
Y-1        上皮细胞        小鼠        肾上腺瘤        F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:38

2.为什么要热灭活血清？

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:38

3.L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？

L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:39

4.GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？

GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的α－氨基用L－丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L－谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L－谷氨酰胺几乎完全降解。
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:39

5.为什么培养基中可以省去加酚红？

酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:39

6.如何用台盼兰计数活细胞？

用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:40

7.如何消除组织培养的污染？

当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。 高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。 1 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。 2 分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。 3 每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。 4 确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2－3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2－3代。 5 在无抗生素的培养基中培养细胞一代。 6 重复步骤4。 7 在无抗生素的培养基中培养4－6代，确定污染是否以已被消除。
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:40

8.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:40

9.为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀？

GIBICO的胎牛血清 没有预老化，储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在－20℃储存胎牛血清，避免反复冻融
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:41

10.目录上说，Hank’s 平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？ Hank’s 平衡盐溶液（HBS）和Earle’s平衡盐溶液（EBS）有什么本质的功能差别？

HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，碳酸氢钠的含量在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:41

11.Qualified和 Certified 胎牛血清有什么差别?

Certified 胎牛血清包括了Qualified 胎牛血清执行的所有的标准检验程序，而且除了这些标准检测，Certified胎牛血清还有如下一些附加的检测： End-Point Determination of Endotoxin Content 噬菌体检验 生物化学检测 激素的检测 血红蛋白检测 Sf9 细胞生长促进及方法学检测
作者: daod    时间: 2014-11-1 15:42


英杰公司的吧？
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:42



QUOTE:
原帖由 daod 于 2014-11-1 15:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

英杰公司的吧？

好象确实很多中文的培养资料确实是从Invitrogen那里翻译来的，不过Hyclone和Invitrogen的资料也都差不多。
作者: dodoit    时间: 2014-11-1 15:42

怎么没有C2C12？
作者: lixi559    时间: 2014-11-1 15:43


我觉得上面用酶消传代的时间太长了吧?另外我周围的人好象在传代时没有再把细胞离心,而是酶消后,去酶,静置一会儿,加培养基中止,再直接分装
作者: summerxx    时间: 2014-11-1 15:43


还想请问A10系的细胞是什么细胞
作者: 我是一片云    时间: 2014-11-1 15:44

如何克服细胞培养液中L-谷氨酰胺易降解的缺点
二肽谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）
—细胞培养中稳定而不降解, 可高压灭菌, 释放最少毒性氨—


在细胞培养液中L-谷氨酰胺是大部分细胞培养基的基本成分；而L-谷氨酰胺是一种并不稳定的氨基酸，在中性的水溶液中会自发降解；需要频繁地补加L-谷氨酰胺。因而在培养操作过程中经常：（1）频繁打开盖子，增加了破坏无菌状态的可能性；（2）过多的追加L-谷氨酰胺，增加了培养基中氨的毒性水平。 试验结果证实：在DMEM培养液分别加入二肽谷氨酰胺和L-谷氨酰胺，这两组培液在37℃环境中，每天取出样品在HPLC上检验二肽谷氨酰胺和L-谷氨酰胺的含量水平。其结果显示：二肽谷氨酰胺基本不水解，释放最少毒性氨；而L-谷氨酰胺则每天会水解释放出较多的氨，提高了培液中氨的毒性水平。
将L-谷氨酰胺和二肽谷氨酰胺配成溶液在121℃、20分钟高压灭菌的环境中，其结果：L-谷氨酰胺在高压灭菌后被大幅降解而产生大量毒性氨，二肽谷氨酰胺在高压灭菌后基本无影响。
二肽谷氨酰胺在细胞内被氨肽酶（E.C.3.4.11.2）所水解，产生L-谷氨酰胺和L-丙氨酸；因此在大部分细胞系统中二肽谷氨酰胺就可以象L-谷氨酰胺同样有效地被利用。二肽谷氨酰胺是最优替代物，它无需适应；既可用于贴壁细胞培养，也适合于悬浮细胞的培养。 其优点如下： （1）需要长期的孵育而不补充营养的系统。 （2）要求最优标准化培养基进行长期的研究。 （3）对氨敏感的培养系统。 （4）代谢研究。 （5）高压灭菌的培养基。 二肽谷氨酰胺可以200mM的溶液直接加入到培养系统中来替代L-谷氨酰胺，使细胞培养的结果更可靠。
上海恒利安生物科技有限公司已成功开发出用于细胞培养的二肽谷氨酰胺商业化产品。
公司除了生产除了各种传统粉末型细胞培养基外，还生产了限定化学成分培养基（chemical defined medium,CDM）---该培养基为非动物性源物质水解而成的培养基粉末，其特点为：无任何过敏源和组成成分恒定的优点。另外还可生产无血清培养基（serum free medium,SFM）和无蛋白培养基（protein free midium,PFM）以及液体细胞培养基。在国内率先生产推出了二肽谷氨酰胺(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)细胞培养试剂，克服了L-谷氨酰胺在细胞培养中不稳定易降解, 不能高压灭菌, 释放较多毒性氨等缺点。
本公司生产的细胞培养基有：
一、MEM细胞培养基系列(粉末)
●MEM（A）【不含谷氨酰胺、可高压灭菌】
●MEM（G）【含谷氨酰胺、多种非必需氨基酸、除菌过滤灭菌】
●MEM（H）【含谷氨酰胺、高糖型、除菌过滤灭菌】
●MEM（L）【含谷氨酰胺、低糖型、除菌过滤灭菌】
●MEM（α）【含谷氨酰胺、除菌过滤灭菌】
●MEM（D）【含谷氨酰胺二肽、可高压灭菌、大幅度减少血清的用量】
二、DMEM细胞培养基系列(粉末)
●DMEM（A）【不含谷氨酰胺、可高压灭菌】
●DMEM（H）【含谷氨酰胺、高糖型、除菌过滤灭菌】
●DMEM（L）【含谷氨酰胺、低糖型、除菌过滤灭菌】
三、RPMI-1640细胞培养基系列(粉末)
●RPMI—1640（A）【不含谷氨酰胺、可高压灭菌】
●RPMI—1640（A）无酚红【不含谷氨酰胺、高压灭菌】
●RPMI—1640【含谷氨酰胺、除菌过滤灭菌】
四、199细胞培养基系列(粉末)
●199含酚红培养基
●199无酚红培养基
●199无血清培养基
五、水解乳蛋白细胞培养基(粉末)
●属于限定化学成分培养基, ●不含有动物蛋白质及其水解产物
六、欧氏平衡盐（细胞培养用）（粉末）
●欧氏平衡盐细胞培养基
●欧氏平衡盐(无酚红)细胞培养基
七、F-10,F-12细胞培养基系列(粉末)
●F-10细胞培养基
●F-12细胞培养基
八、二肽谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）
●在细胞培养中稳定而不降解, ●可高压灭菌, ●释放毒性氨最少
九、其它类型细胞培养基（粉末）:根据客户要求定制
十、液体培养基系列:型号根据客户要求定制
●100ml/瓶, ●200ml/瓶, ●400ml/瓶
作者: mercedes    时间: 2014-11-1 15:44

请问关于楼主可以发些关于vero细胞培养的注意的操作么？
作者: =pkchen=    时间: 2014-11-1 15:45

怎么没有vero细胞和MDCK细胞的呢?
作者: niangao1980    时间: 2014-11-1 15:45


哪位高手可以告诉我G418的具体配方？
作者: ROSE李    时间: 2014-11-1 15:46


许多朋友是第一次订购细胞，所以对他们来说如何查找细胞是一个不小的问题，我们这里做个简单讲述（以细胞株为例），希望对大家有点帮助。
首先，您必须得到你想要的细胞代号。如果您手头的文献上有您想要细胞的名称和代号，这是最好的；如果您只知道细胞的中文或英文名称，比如：人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein epithelial cell），您可以在Google中直接搜索该名称，找到对应的细胞代号——HUVEC；如果您只知道感兴趣的细胞的生物学特征，那么您最好查阅中/英文文献，以获得相应的细胞名称或代号。
第二步，您已经知道感兴趣细胞的代号和名称，比如：293，CHO，您可以直接进入我们网站链接的国内细胞库查找，搜寻国内那家细胞库有保存，然后与之联系购买。
第三，如果国内细胞库没有您要的细胞，或者您担心国内细胞库的存在老化和污染问题，您可以考虑从国外细胞库订购。我们推荐您到ATCC寻找，因为它是目前世界最大的细胞库，（细胞搜寻网址cuturl('http://www.atcc.org/SearchCatalogs/CellBiology.cfm')）。注意，“ATCC number”是ATCC内部编号，如293细胞对应CRL-1573，客户很少知道对应编号，一般不大使用，所以建议您在“Query database”内输入细胞的描述，如：293或kidney或epithelial或human，几个检索词可以同时输入，之间用空格隔开。
作者: zzzz    时间: 2014-11-1 15:46

有没有谁养人B淋巴瘤Raji细胞啊？
有没有其细胞形态图片啊？
急求！
作者: room    时间: 2014-11-1 15:46


我是初学者，对于什么是真核，原核菌株都不清楚！麻烦哪位为我讲以下：都是有哪些菌株是真核原核，有什么区别
作者: lixi559    时间: 2014-11-1 15:47

请问在培养杂交瘤细胞用百分之二十的培养液放白分之五的培养箱培养一天，怎么颜色没变化，而且细胞都死掉了，请问各位老师，到底是怎么回事？而且以前用这培养液都没问题，
作者: 3648755    时间: 2014-11-1 15:47


请教LZ及各位同任，在CHO细胞无血清培养时，传代三周逐渐出现细胞破碎的情况，细胞的碎片有的悬浮在培养基上，有的贴在壁上，继续传代后越来越多，请问这是怎么回事？
作者: zhenxin    时间: 2014-11-1 15:48


生物谷真深，鄙人看里一圈，基本上是昏迷状态。
作者: mamamiya    时间: 2014-11-1 15:48


好东西，顶！
兄台！有GH1和 GH3细胞的具体情况吗？比如他们有分泌功能吗？



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