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标题: 【求助】细胞拉曼光谱检测 [打印本页]

作者: 小恐龙 时间: 2014-11-11 17:52 标题: 【求助】细胞拉曼光谱检测

标签：载玻片雷尼绍

求助各位大侠，有没有测过细胞的拉曼光谱。我们用的雷尼绍的仪器，785nm激发光，背景信号太强，一点细胞的信号都测不出，怀疑激光没有聚焦在细胞上。

1. 细胞测量前要怎么处理？

2. 细胞放在什么样的载玻片上测量，怎样减小背景影响？

3. 仪器参数设置上有什么需要注意的么？怎样确定把光聚焦到细胞上？

老板逼得紧，谢谢各位啊!

作者: vera+ 时间: 2014-11-11 17:52

有测细胞的报道，中文文献都有很多，你去搜索一下看看吧

作者: 小恐龙 时间: 2014-11-11 17:53

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原帖由 vera+ 于 2014-11-11 17:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
有测细胞的报道，中文文献都有很多，你去搜索一下看看吧

我已经看过很多文献了，照着文献上写的做实验都做不出来，很多文献也写的不清楚，所以想问问真正做过细胞实验的人。您做过细胞光谱实验吗？

作者: vera+ 时间: 2014-11-11 17:53

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原帖由 小恐龙 于 2014-11-11 17:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我已经看过很多文献了，照着文献上写的做实验都做不出来，很多文献也写的不清楚，所以想问问真正做过细胞实验的人。您做过细胞光谱实验吗？

我做过拉曼标记物质进入细胞之后的拉曼，但是测的是标记物的信号，没有测过细胞本身的信号。

细胞也混合物，而拉曼表征的最好是单一分子结构的物质，否则就存在检测限的问题，如果这个混合物每一种的含量都很少，或者其中有荧光很强的分子，那么很难测到信号。

另外是不是得对细胞进行前处理啊？

作者: jujuba 时间: 2014-11-11 17:53

细胞检测是很难做：样品处理，信号采集
文献上别人用拉曼成像做的图很漂亮，看起来很吸引人，
国内能做好这一块的还真不多，广西那边做光镊拉曼的课题组，主要做细胞
不过他的技术和共聚焦显微镜技术不同

作者: tianmei001 时间: 2014-11-11 17:54

做细胞的成像难度很大，关键在于共聚焦。
另外建议你785激发时，不要用玻璃，激光穿透深度很大时，衬底信号很强。

532激发也可以的

作者: 小恐龙 时间: 2014-11-11 17:54

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原帖由 vera+ 于 2014-11-11 17:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我做过拉曼标记物质进入细胞之后的拉曼，但是测的是标记物的信号，没有测过细胞本身的信号。

细胞也混合物，而拉曼表征的最好是单一分子结构的物质，否则就存在检测限的问题，如果这个混合物每一种的含量都很少，或者其中有荧 ...

我们实验之前有对细胞进行离心和清洗，开始用的是PBS，影响信号太大，后来换成蒸馏水，这种情况下细胞又很快就吸水涨破了。关键还是细胞的信号太弱，测不出信号。现在用铝片做载玻片，因为不透光，又很难找到细胞。。

作者: 小恐龙 时间: 2014-11-11 17:54

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原帖由 jujuba 于 2014-11-11 17:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
细胞检测是很难做：样品处理，信号采集
文献上别人用拉曼成像做的图很漂亮，看起来很吸引人，
国内能做好这一块的还真不多，广西那边做光镊拉曼的课题组，主要做细胞
不过他的技术和共聚焦显微镜技术不同
...

对，国内做细胞拉曼主要就是广西那块，他们用的是光镊技术，能捕捉到细胞。

作者: 小恐龙 时间: 2014-11-11 17:55

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原帖由 tianmei001 于 2014-11-11 17:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
做细胞的成像难度很大，关键在于共聚焦。
另外建议你785激发时，不要用玻璃，激光穿透深度很大时，衬底信号很强。

532激发也可以的

我们现在换成633的了，之前用过石英，氟化钙当衬底，都不行，现在用的铝片。您做过532的吗？

作者: tianmei001 时间: 2014-11-11 17:55

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原帖由 小恐龙 于 2014-11-11 17:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我们现在换成633的了，之前用过石英，氟化钙当衬底，都不行，现在用的铝片。您做过532的吗？

用过488，532，633和785测试细胞成像，结果还不错

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