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标题: 【求助】色谱峰总有前延，峰形不正 [打印本页]

作者: 8princess8 时间: 2014-12-2 16:09 标题: 【求助】色谱峰总有前延，峰形不正

今天做HPLC，样品峰形不正太，起初以为是杂质，用梯度分离，不好使；后来再进一针标准品，发现标准品的峰形依然不好。开始排查原因：
1. 起初流动相加了0.8%冰醋酸，考虑是否是酸性不够，改为0.8%甲酸，峰形依然没有改变；
2. 考虑是否柱效不行，换了一根柱子；冒险把柱子反冲一次，峰形依然没有改变；
3. 进样阀用甲醇清洗，作用不大；
4. 进针色谱甲醇，用甲醇溶解的样品，看了下吸收度，认为基线基本没有变化；
5. 流动相把甲醇换成乙腈，峰形还是没有变化；
6. 把0.8%冰醋酸流动相，换成纯水峰形还是没有变化；
另外，这根柱子、色谱条件和液相一个月前测这个样品峰形还非常好，最近搬了一次校区再用就不好了，非常奇怪。
明天，把这根柱子换到另一台液相上再试试，再认真清理下进样阀，看看结果吧，实验太揪心！！！
跟大家请教下还有什么方面没有注意到，需要处理下？？？

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作者: 8princess8 时间: 2014-12-2 16:10

色谱甲醇进样色谱峰

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作者: fangxiang 时间: 2014-12-2 16:11

1. 从老校区灌水过来
2. 调整进样速度？

作者: 8princess8 时间: 2014-12-2 16:12

QUOTE:

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1. 从老校区灌水过来
2. 调整进样速度？

如何调整进样速度？

作者: orangecake 时间: 2014-12-2 16:12

QUOTE:

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如何调整进样速度？

柱子稍倾斜一点

作者: TNT 时间: 2014-12-2 16:13

流通池有没有污染？样品用流动相溶解。

作者: yueban-1147 时间: 2014-12-2 16:13

1.对照品是否不醇，后面怎么还会有个小峰，建议重新配对照品，或者试试把对照品的峰往后拉，看一下能不能跟前面的东西分开
2.色谱柱在搬运过程是否有碰撞，导致色谱柱损坏，影响分析效果

作者: 8princess8 时间: 2014-12-2 16:14

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1.对照品是否不醇，后面怎么还会有个小峰，建议重新配对照品，或者试试把对照品的峰往后拉，看一下能不能跟前面的东西分开
2.色谱柱在搬运过程是否有碰撞，导致色谱柱损坏，影响分析效果 ...

在别的液相上，用这个柱子没有问题，考虑是进样阀的问题，再重要冲洗下管路

作者: junhun 时间: 2014-12-2 16:14

建议试一针不加任何样品的纯甲醇

作者: 8princess8 时间: 2014-12-2 16:14

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建议试一针不加任何样品的纯甲醇

试了，第二个图就是，看吸收度非常小，基线基本没变化

作者: junhun 时间: 2014-12-2 16:15

1、楼主先做一下空白试试，看看空白出不出这个色谱峰之前的干扰；
2、如果空白没有这个干扰，那就要调整色谱条件了，建议用缓冲溶液试一下，一般情况下使用缓冲溶液会对色谱峰有调节峰形的作用，楼主做的东西应该也有相关文献的，建议楼主查查文献取取经，试一下。

作者: rxcc33 时间: 2014-12-2 16:16

建议楼主，首先不加色谱柱用两通，加大流速大概4ml/min后5ml/min冲洗仪器,流程是：水，甲醇，乙腈各冲半个小时左右，然后重新配置流动相，注意玻璃仪器的清洁，注意流动相所用到的有机溶剂一定要新开封的，新过滤的。注意试验用水，不行的话请买一大瓶杭州产的娃哈哈纯净水。上流动相之前请用水，甲醇，乙腈各冲40分钟色谱柱，注意色谱柱出口处别连仪器上，正常流速。看你的峰型更像是有污染所致。

作者: 8princess8 时间: 2014-12-2 16:16

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原帖由 rxcc33 于 2014-12-2 16:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
建议楼主，首先不加色谱柱用两通，加大流速大概4ml/min后5ml/min冲洗仪器,流程是：水，甲醇，乙腈各冲半个小时左右，然后重新配置流动相，注意玻璃仪器的清洁，注意流动相所用到的有机溶剂一定要新开封的，新过滤的。注意试验用水，不行 ...

今天用别人的液相，这根柱子峰形很好。回来又换了台检测器发现峰还是不好，应该是仪器污染了，明天用异丙醇冲洗管路

作者: dodoit 时间: 2014-12-2 16:16

可能是由于纯甲醇溶解样品的原因吧。加些水进去可能会好吧。

作者: 8princess8 时间: 2014-12-2 16:17

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原帖由 dodoit 于 2014-12-2 16:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
可能是由于纯甲醇溶解样品的原因吧。加些水进去可能会好吧。

同样甲醇溶解的样品，同样的柱子，在别的液相上就没问题，还是管路污染了

作者: vvmmoy 时间: 2014-12-2 16:17

是不是没有用流动相溶解样品？柱温箱温度是否合适？天冷了，温度影响柱效。再一个，考虑下样品是否过载，再稀释50倍试试

作者: ladyhuahua 时间: 2014-12-2 16:17

可能进样量太大，也可能是溶样溶剂对样品溶解能力太强。建议降低进样量，使用流动相溶解样品。你的溶剂峰怎么能那么高呢？是否有东西没有保留住？

作者: redbutterfly 时间: 2014-12-2 16:18

流动相是否有污染？？

作者: wanglaoshi 时间: 2014-12-2 16:18

这种问题经常遇到，一般都是水的问题，换换水就没事了。

作者: 2541 时间: 2014-12-2 16:19

对照品峰都有问题，一般就是管路，滤头，柱子这几个出问题，逐一解决就能好了。

作者: 8princess8 时间: 2014-12-2 16:20

流通池有没有污染？样品用流动相溶解。

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后来发现确实是没用流动相溶解的原因。当时在其它agilent上做用甲醇溶解出峰也没问题，就把这问题忽略了。waters上做，样品必须得用流动相溶解。很奇怪。

作者: 8princess8 时间: 2014-12-2 16:20

可能进样量太大，也可能是溶样溶剂对样品溶解能力太强。建议降低进样量，使用流动相溶解样品。你的溶剂峰怎么能那么高呢？是否有东西没有保留住？

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后来发现确实是没用流动相溶解的原因。当时在其它agilent上做用甲醇溶解出峰也没问题，就把这问题忽略了。waters上做，样品必须得用流动相溶解。很奇怪。

作者: 8princess8 时间: 2014-12-2 16:21

建议楼主，首先不加色谱柱用两通，加大流速大概4ml/min后5ml/min冲洗仪器,流程是：水，甲醇，乙腈各冲半个小时左右，然后重新配置流动相，注意玻璃仪器的清洁，注意流动相所用到的有机溶剂一定要新开封的，新过滤的 ...

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后来发现确实是没用流动相溶解的原因。当时在其它agilent上做用甲醇溶解出峰也没问题，就把这问题忽略了。waters上做，样品必须得用流动相溶解。很奇怪。

作者: 11_hjx 时间: 2014-12-2 16:22

后来发现确实是没用流动相溶解的原因。当时在其它agilent上做用甲醇溶解出峰也没问题，就把这问题忽略了。waters上做，样品必须得用流动相溶解。很奇怪。
...

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找到原因了就好，呵呵，我没用过WATERS的仪器，不过溶剂效应到是遇到过几次，所以一般为了保险起见都会用流动相来溶解，除非特殊样品。有一次因为之前也是用甲醇溶解没有溶剂效应，再重复的时候就发现溶剂效应很强，峰型极差，最后发现是因为第一次试验用甲醇溶解的时候我们每次都用的混标，就是加了内标，而后来重复试验的时候没有用混标。因为内标影响了甲醇溶解样品的PH值所以峰型挺好，而未加内标的样品用甲醇溶解时就出现了很强的溶剂效应，改用流动相溶解就好了。祝好运！

作者: rxcc33 时间: 2014-12-2 16:22

调整进样速度

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