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标题: 【求助】如何对付黑焦虫！ [打印本页]

作者: eric930 时间: 2014-12-4 14:38 标题: 【求助】如何对付黑焦虫！

我培养原代血管内皮细胞，近两月贴壁极差且细胞易出现空泡变，培养液中有大量的黑焦虫，因不贴壁，都无法洗，请问我该怎么办？真及人啊！

作者: glass 时间: 2014-12-4 14:38

空泡,之后甚至会发现细胞都消失了(就象被吃掉了)对于这种被大家称为黑焦虫的污染,我们的CHO和293都有这样的问题.对于CHO贴壁较牢,加两性霉素,以后多用培养基洗几次情况会好转;对于293贴壁不牢,如果能复苏,还是丢掉这个,如果一定要用着瓶只能用离心换瓶再多洗来试试,但是效果不是很好. 似乎细胞和这种黑色会动的颗粒的生长是个竞争的关系,在细胞状态好的时候,情况较好,细胞如果换液不及时,营养不良,状态不佳时,它就疯长! 有人认为这种问题是周期性的.

作者: fangxiang 时间: 2014-12-4 14:38

黑焦虫完全是一种形态描述. 通过我的经历及大家的帖子可以看出这种形状的东西有完全不同的特性,有的可以和细胞共生,有的就会杀死细胞. 细胞状态不好的时候,背景就不太干净(有时可能是细胞死亡碎片,有时会是黑胶虫,还有就是支原体).但如果不管什么抗生素,什么浓度都杀不死, 而且细胞遇虫即死的话,支原体的可能性就很小. 原地蠕动的黑胶虫好象对细胞毒性不那么大,但那种横冲直撞的大虫就很恐怖了,搞不懂属于什么生物. 我们实验室经过一段时间的整顿(8mon),总算恢复了.还不知道是什么让它消失的,现在想起来简直心有余悸.连配制培养基的三蒸水在抽滤之前都消毒. 不过建议有虫灾的同志们,培养基血清赶紧封存.如果不同的实验室用同一品牌,同一批血清都出同样的问题,那就要找公司摆谈摆谈了.

作者: eric930 时间: 2014-12-4 14:39

非常感谢二位，我觉的它是乎来自空气中，如在6空板则更多，现在先暂时停一下观察

作者: yjf1026 时间: 2014-12-4 14:39

我们的几个细胞系多出现这种问题，悬浮细胞尤其严重这种微生物是属那类？我们的原代细胞使用同样的血清和培养基却没问题那为高手请尽快解答当感激不尽

作者: hold住 时间: 2014-12-4 14:39

不知到用高抗处理一下行不? 我没有试过,听老专家说可以

作者: glass 时间: 2014-12-4 14:40

hsp 详细说说看

作者: idea2011 时间: 2014-12-4 14:40

菜鸟问什么是黑焦虫啊？

作者: eric930 时间: 2014-12-4 14:40

QUOTE:

原帖由 idea2011 于 2014-12-4 14:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

菜鸟问什么是黑焦虫啊？

就是那种小黑点一样的会动的东东！

作者: whitesheep 时间: 2014-12-4 14:41

这样说不准确吧？或许是其他的东冬？总之是不要随便给未知的东西命名的好！

作者: fangxiang 时间: 2014-12-4 14:41

我培养海马神经元，也出现过会动的小黑点，调动微调可见其周围有淡淡的很圆的晕。但细胞绝对没有浑浊。有人说是寄生虫。不知是何原因？

作者: october7 时间: 2014-12-4 14:41

我曾问过 FBS 的公司, 他们说 FBS里面的 lipid 在镜下看起来象有光晕的小黑点,而且会动, 应该不影响细胞生长. 但是如果细胞不多, 肯定会有一些影响. 唯一减少黑点的方法是试不同的batch.

作者: fangxiang 时间: 2014-12-4 14:42

黑焦虫可能与血清有关,因为同样的细胞,我们实验室有些人培养的细胞黑焦虫很恐怖,有些人培养的细胞几乎没有,而细胞是一样的,血清不一样.

作者: utt0989 时间: 2014-12-4 14:42

可否请教一下FBS公司的情况。为何细胞少时对其影响较大。是何原因引起的。谢谢！

作者: feima+ 时间: 2014-12-4 14:42

FBS 也即小牛血清. 根据我的经验, 养cell line 比原代培养小黑点要少, 原代培样时, 分化组织所得到的细胞越纯, 小黑点越少, 公司的人说, 有人反映小黑点对fragmented fibril 很敏感, 我也有这个感觉. 小黑点多, 细胞不会死, 但是小黑点贴壁, 给细胞留的地方就少了. 所以最大化的纯化所提细胞, 用好的血清估计是关键.

作者: she 时间: 2014-12-4 14:43

我们用的是进口的胎牛血清，马血清是国产的。小黑点是到了三五天以后出现的，与贴壁似乎无关，我养的细胞到了十一二天后就开始退化，我怀疑与小黑点是否有关。

作者: any333 时间: 2014-12-4 14:43

细胞崩解的产物也是'"小黑点" . 所以应该先排除其他因素, 例如: 细胞的好坏, 血清及其它生长因子的使用等等.

作者: yueban-1147 时间: 2014-12-4 14:43

如果怀疑是血清的问题，是否可以将加过血清的DMEM过滤呢？血清过滤会不会损失其营养成分

作者: rfv 时间: 2014-12-4 14:44

我请教过微生物的同学，他们说黑焦虫（又加血孢子虫）只能感染血细胞，且离体后就会死亡，所以小黑点可能是其他东西。现在的抗生素都没有明显作用，最好的方法就是扔掉重来。

作者: IAM007 时间: 2014-12-4 14:46

如果是杂交硫细胞可以先弄到老鼠的腹腔里面培养一段时间，黑焦虫就会不见了，再从腹水里面把细胞亚克隆要回来吧

作者: 3N4G 时间: 2014-12-4 14:47

我们实验室也曾经出现过黑焦虫污染事件。如果有冻存的后备细胞在，与其花大量的人力物力抢救，还不如直接扔掉来得节省。

作者: baidukk 时间: 2014-12-4 14:48

什么是黑焦虫？
是什么样的？
哪位能不能贴张照片出来看看？

作者: wiwi 时间: 2014-12-4 14:49

我实验室也出现类似情况，我培养的细胞在受害最严重时，我每天都去换液，每次换液用PBS清洗一遍，这样等细胞长的比较密时，黑焦虫明显少多了，只是瓶底看上去有点脏，我把细胞吹下来转移到令一个瓶里，几个小时后贴壁了就换液，现在细胞好多了，又呈现了比较壮壮的样子。

作者: uuooii 时间: 2014-12-4 14:49

根据我的观察和大家的议论来看，这种东西在细胞状态好时少，状态差时多，而且细胞传代多容易出现，原代比细胞系容易出现。但是我觉得各位说的不一定是相同的东西，细胞碎片在很小时也会类似这种情况，血清质量不是非常好也会出现这种情况，我感觉只要细胞状态好，密度高一点，这种东西就会减少。国内的细胞比较容易出现。但是如果细胞空泡很明显说明状态很差，凋亡也会很多，也会出现此种情况。

作者: Ao7 时间: 2014-12-4 14:50

强烈建议使用一种驱逐支原体的药物。我们实验室作细胞库，就是用它除掉了支原体。我这里可不是给人作广告，我当时用的还是老板从国外带回来的。cuturl('http://www.jingmei.com/site/site/recommend/ZYTGR.jsp?type1=3')

作者: niangao1980 时间: 2014-12-4 14:50

那么黑焦虫是否会进入培养细胞内呢？

黑焦虫进入动物体内，会有那些危害呢？

作者: sunshine039 时间: 2014-12-4 14:50

我是新手，黑焦虫是什么，是一种微生物吗？它污染的细胞是什么样子呀，有没有转贴图片看看！我养的细胞也长不好，老是出现悬浮物，有人说是细胞碎片，但是那东西好象在长，细胞慢慢就死光了。怎么回事呢？请高手给指导指导！

作者: huifeng0516 时间: 2014-12-4 14:51

各位高手，我养的C6细胞，刚开始细胞长的不错，伸展也很好。但是养一段时间，培养液中就有悬浮物出现，还有些贴在培养瓶底部，细胞就长不好了，慢慢的越长越少，怎么回事呀！有谁知道，请赐教！谢谢！！！！

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