标题:
叶绿素含量的测定的原理和方法
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作者:
YN172014
时间:
2014-12-17 15:52
标题:
叶绿素含量的测定的原理和方法
一、
实验目的
1.
了解植物组织中叶绿素的分布及性质。
2.
掌握测定叶绿素含量的原理和方法。
二、
实验原理
叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中,并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。当植物细胞死亡后,叶绿素即游离出来,游离叶绿素很不稳定,对光、热较敏感;在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素,在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中叶绿素有两种:叶绿素
a
和
b
,两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
叶绿素的含量测定方法有多种,其中主要有:
1.
原子吸收光谱法:通过测定镁元素的含量,进而间接计算叶绿素的含量。
2.
分光光度法:利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值,即可用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量。
叶绿素
a
测定仪
和叶绿素
b
在
645nm
和
663nm
处有最大吸收,且两吸收曲线相交于
652nm
处。因此测定 提取液在
645nm
、
663nm
、
652nm
波长下的吸光值,并根据经验公式可分别计算出叶绿素
a
、叶绿素
b
和总叶绿素的含量。
三、仪器、原料和试剂 仪器 分光光度计、电子顶载天平
(
感量
0
.
01g)
、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管。 原料 新鲜
(
或烘干
)
的植物叶片 试剂
1. 96
%乙醇
(
或
80
%丙酮
) 2.
石英砂
3.
碳酸钙粉
。
四、
操作步骤
取新鲜植物叶片
(
或其它绿色组织
)
或干材料,擦净组织表面污物,去除中脉剪碎。称取剪碎的新鲜样品
2g
,放入研钵中,加少量石英砂和碳酸钙粉及
3mL95
%乙醇,研成均浆,再加乙醇
10mL
,继续研磨至组织变白。静置
3
~
5min
。 取滤纸
1
张置于漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把提取液倒入漏斗,滤液流至
100mL
棕色容量瓶中;用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。 用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至
100mL
,摇匀。 取叶绿体色素提取液在波长
665nm
、
645nm
和
652nm
下测定吸光度,以
95
%乙醇为空白对照。
五、
计算
按照实验原理中提供的经验公式,分别计算植物材料中叶绿素
a
、
b
和总叶绿素的含量
。
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手持式叶绿素测定仪
[时间:2014-12-17 15:53]
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