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标题: 【转载】【交流】有做叶绿素a测定的吗？ [打印本页]

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:10 标题: 【转载】【交流】有做叶绿素a测定的吗？

我现在在做水样的叶绿素测定，用的是第四版的分光光度法，有做叶绿素a测定的吗？大家一起交流交流，一起进步。

作者: jom 时间: 2014-12-25 16:11

分光光度法，需要测好几个波长吧？计算公式知道吧？有各种文献报道，我不知到你用的是哪种？

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:11

是啊，630，645，663，750四个波长
公式比较长我就不写上来了，
我就是按照《水与废水检测方法技术》第四版的方法来做
大致操作：
抽滤，丙酮提取，研磨，离心，分光光度计测定

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:11

我也在做叶绿素的测定，是海水，不过我用的标准是《海洋监测规范》

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:12

海水我也有做，用的也是《海洋监测规范》，
国标的方法就比《水与废水》第四版的好，它不需要研磨，不存在研磨时的损失。
mohuo555，你海水抽滤的水量是多少阿？

作者: jom 时间: 2014-12-25 16:12

根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的光密度D与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即：
D=kCL
式中：k为比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，k为该物质的比吸收系数。各种有色物质溶液在不同波长下的比吸收系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的光密度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总光密度等于各组分在相应波长下光密度的总和，这就是光密度的加和性。测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的光密度D，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的比吸收系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、b的80%丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的比吸收系数分别为82.04和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式：
D663 = 82.04Ca+9.27Cb                                           （1）
   D645 = 16.75Ca+45.60Cb                                           （2）
式（1）、（2）中的D663和D645为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时的光密度，Ca、Cb分别为叶绿素a和b的浓度，以mg/L为单位。解方程组（1）、（2），得：
   Ca = 12.72D663 – 2.59D645                                        （3）
   Cb = 22.88D645 – 4.67D663                                        （4）
将Ca与Cb相加即得叶绿素总量（CT）：
   CT = Ca + Cb =20.29D645 + 8.05D663                               （5）
另外，由于叶绿素a、b在652nm的吸收峰相交，两者有相同的比吸收系数（均为34.5），也可以在此波长下测定一次光密度（D652）而求出叶绿素a、b总量：
      CT =（D652 × 1000）/ 34.5                                        （6）
在有叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测定出溶液中类胡萝卜素的含量。
Lichtenthaler等对Arnon法进行了修正，提出了80%丙酮提取液中三种色素含量的计算公式：
   Ca = 12.21D663 – 2.81D646                                        （7）
   Cb = 20.13D646 – 5.03D663                                        （8）
   Cx·c=（1000D470 – 3.27Ca – 104Cb）/ 229                            （9）
式中：Ca、Cb分别为叶绿素a和b的浓度；Cx·C为类胡萝卜素的总浓度；D663、D646和D470分别为叶绿体色素提取液在波长663nm、646nm和470nm下的光密度。
由于叶绿体色素在不同溶剂中的吸收光谱有差异，因此，在使用其他溶剂提取色素时，计算公式也有所不同。叶绿素a、b在96%乙醇中最大吸收峰的波长分别为665nm和649nm，类胡萝卜素为470nm，可据此列出以下关系式：
      Ca = 13.95D665 – 6.88D649                                        （10）
      Cb = 24.96D649 – 7.32D665                                        （11）
      Cx·c=（1000D470 – 2.05Ca – 114.8Cb）/ 245                         （12）

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:13

我过滤体积一般在0.400到0.800不等

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:13

有在线仪器吗?

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:13

我们也差不多。
海水就抽多点，一般都是1L，如果叶绿素含量较多，而且也比较难抽滤，只要也抽500ml

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:14

我们抽滤也是500ml

作者: longquan 时间: 2014-12-25 16:14

我正在摸索叶绿素a的测定，研磨方法靠经验，我认为不好掌握、推广；使用超声波细胞破碎仪烦琐，对高浓度样品测定，结果不佳。不知大家提取叶绿素a时是如何操作的？

作者: longquan 时间: 2014-12-25 16:14

仪器我采用普析通用公司的紫外、可见分光光度计不错，四波长的吸光值一下就测出来了，再把他们转到EXCEL表中，结果就出来了，计算便捷。

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:15

我在EXCEL里编制了公式，计算很简单的，把几个吸光值输入就可以出数据了

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:17

10楼的做的是废水的么？

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:18

呵呵，我四年以前做过，现在都忘了，等我给你查一下啊

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:18

叶绿素a按照监测规范第七本分光光度法很好做的。

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:18

较脏的水很难抽滤，怎么办？

作者: 小熊猫 时间: 2014-12-25 16:19 标题: 回复 #6 jom 的帖子

谢谢分享！

作者: nsdm 时间: 2014-12-25 16:20

我们最近也想做呢！

作者: 但是 时间: 2014-12-25 16:20

丙酮可以用NN二甲基乙酰胺来代替，就不用等24小时了

作者: 小牛牛 时间: 2014-12-25 16:21

大家用离心吗？

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:21

我们用的是特纳荧光计测叶绿素a。

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:22

有在线测叶绿素a仪器，也有实验室型的荧光法测叶绿素a仪器。美国TURNER DESIGNS的仪器用着不错，样品处理完，可直接读出浓度

作者: 龙泉 时间: 2014-12-25 16:22 标题: 回复 #23 jkh123 的帖子

请问用特纳荧光计测叶绿素a时怎么提取叶绿素a的？
是先抽滤的么？抽滤后提取多长时间呀？而且需要取多少提取液呢。我也用的特纳的荧光计，用100％甲醛大概4ML提取玻璃纤维滤纸上的叶绿素a，放了2天都没提取完，滤纸上总有些剩下的。请问需要怎么处理下呢？谢谢

作者: 龙泉 时间: 2014-12-25 16:23 标题: 回复 #23 jkh123 的帖子

补充下，我其实就是不想研磨。组织研磨器超级难用，每次磨几个样手指头都起水泡。不研磨的提取方法都是什么呀

作者: 熊猫 时间: 2014-12-25 16:23

我们用紫外测的，4个波长输入仪器，自动计算出浓度。

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:24

我也在做，我们做的是水库的，请问大家用的是什么滤膜

作者: jkh123 时间: 2014-12-25 16:24

我想问下水质监测叶绿素要求不超过多少啊

作者: 红旗渠 时间: 2014-12-25 16:24 标题: 回复 #21 小牛牛的帖子

需要离心的，不然太浑浊，影响比色。

作者: 但是 时间: 2014-12-25 16:25

我也在用分光光度法做叶绿素a，就是抽滤太麻烦了

作者: nsdm 时间: 2014-12-25 16:25

我也是做叶绿素的，怎么每次按照书上讲的去离心，怎么不能有效分离啊，我用的是塑料的离心管，转速4000,10分钟，这是什么原因？？？

作者: ayanyang 时间: 2014-12-25 16:26

南京铭奥仪器设备有限公司代理进口的优质叶绿素A监测仪及一系列水质监测仪器，有需要的可以随时联系哦。18913964277，张苏华

作者: ayanyang 时间: 2014-12-25 16:27 标题: 回复 #8 jkh123 的帖子

有的，南京铭奥仪器设备有限公司代理进口的叶绿素a测定仪及其他系列水质监测仪，可联系张苏华，18913964277

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