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标题: 缓冲盐的浓度多少才能避免析出而又不影响分析。 [打印本页]

作者: kuailedeadai 时间: 2010-12-20 15:24 标题: 缓冲盐的浓度多少才能避免析出而又不影响分析。

前几天在论坛上向大家求助过，就是流动相用缓冲盐的时候，因为缓冲盐析出使得实验无法进行。超声清洗后才得以继续。老师说我的缓冲盐浓度是40mM，浓度太高了，5-6mM会比较合适。我看大部分的文献上缓冲盐的浓度和我用的差不多，可是我的为什么会非常容易的析出堵住单向阀呢。是以为浓度太高了还是其它的原因呢？大家帮我分析一下吧！老是有问题我修机器都快崩溃了呵呵

作者: maicaixiaogu 时间: 2010-12-20 15:24

QUOTE:

原帖由 kuailedeadai 于 2010-12-20 15:24 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
前几天在论坛上向大家求助过，就是流动相用缓冲盐的时候，因为缓冲盐析出使得实验无法进行。超声清洗后才得以继续。老师说我的缓冲盐浓度是40mM，浓度太高了，5-6mM会比较合适。我看大部分的文献上缓冲盐的浓度和我用的差不 ...

40mM是高了，若能在低浓度下就能获得好的分离效果，则尽可能用低浓度。
另外，不仅要看你的缓冲盐浓度，而且还要注意有机相的比例，有机相比例越高，越容易析出。另外，还要注意洗脱程序，若是梯度洗脱，一般有机相比例是从低到高，初始洗脱时，缓冲盐在低比例有机相中是溶解的，但随着梯度洗脱的进行，有机相比例升高，缓冲盐溶解度下降则会析出，不知你用的是否梯度洗脱。另外，你可以先用水相（含缓冲盐）和最高比例的有机相混合，看溶液是否澄清，若是澄清的，则OK了。

作者: unknow 时间: 2010-12-20 17:24 标题: 回复 #1 kuailedeadai 的帖子

事实证明，你的40mmol/L的盐浓度确实析出了，这可能是因为你有机相比例浓度较高的原因。你这个浓度跟我们离子色谱缓冲盐的浓度相当了，离子色谱用的可是纯水！

反相色谱中缓冲盐能少加就尽量少加，按老师说的，少加点盐看效果吧。
你加缓冲盐是参考的文献？不知道你课题的重点是不是在分析这块，其实有兴趣的话完全可以找到不加缓冲盐就达到好的效果的分析条件。

作者: hewen0925 时间: 2010-12-20 19:49

操作问题。用了缓冲盐，要注意流动相过度，控制有机相的量。

作者: jianghai 时间: 2010-12-20 19:50

你按你使用的比例，用烧杯混合一下，看看有盐析出没？

40，不高啊，你用的盐是什么？

我用50的磷酸盐没什么问题啊

作者: haohaorenjia 时间: 2010-12-20 19:51 标题: 回复 #1 kuailedeadai 的帖子

取决于你的缓冲盐在有机溶剂中的溶解度。浓度不要太大，5-20mM左右。然后调整合适的pH值，估计作用更大一些。

楼主看看帖子也许对你会有帮助。

分享：反相色谱中如何选择缓冲液？
cuturl('http://bbs.antpedia.com/viewthread.php?tid=38147&extra=page%3D1')

[ 本帖最后由 haohaorenjia 于 2010-12-20 19:53 编辑 ]

作者: 健康千万家 时间: 2010-12-20 19:54

流动相缓冲盐和有机相比例是不是比较大，或者你走的是梯度，梯度太大。
如果你不能确信什么时候会析出盐，你按照一定的比例混合下看看有没有结晶就知道了。

作者: nowait1983 时间: 2010-12-20 19:54

这个只有不是100%的有机溶剂，应该不会析出结晶

作者: q_r_epcnge 时间: 2010-12-20 19:54

50mM及以下都不算高，你是在什么条件下析出的能不能说清楚点。

作者: fqdfi32 时间: 2010-12-20 19:55

你是单独一个泵走缓冲液,还是含缓冲液的有机相一个泵!

作者: nanopony 时间: 2010-12-20 19:55

满足实验的基础啊上尽量越低越好

作者: kuailedeadai 时间: 2010-12-20 21:08 标题: 回复 #10 fqdfi32 的帖子

一个泵是缓冲液，另外是有机相。现在有点明白了，是有机相比例太高了。

作者: kuailedeadai 时间: 2010-12-20 21:13 标题: 回复 #9 q_r_epcnge 的帖子

什么时候析出的还真不能确定。但是看了大家的回答我觉得是我的有机相比例太高了，走的梯度，最后的时候用了90%的有机相。肯定是这个原因了。

作者: uytdo 时间: 2010-12-21 11:01

缓冲盐如果和流动相有机溶剂混用（甲醇、乙腈等）就容易析出。

作者: wzw3392008 时间: 2010-12-21 11:02

QUOTE:

主要是有机相的比例多少。

作者: liuzhikunwq 时间: 2010-12-21 11:02

　　您具体使用多高的流动想比例呢?

　　一般可能小于100mM，不过要看具体情况。

　　可能单向阀存在问题。

作者: duxin_30 时间: 2010-12-21 11:03

建议试一下相同比例下缓冲盐能不能析出吧
也有可能是梯度中有机相比例太高

作者: sacred 时间: 2010-12-21 11:04

楼主用的是什么仪器，有的仪器的单向阀对缓冲盐的浓度较为敏感，略高一点是就会堵塞。楼主用的等度还是梯度，缓冲盐的析出和有机盐的比例有较大的关系

你走的是梯度的话，很可能在有机相比例很高的时候出现盐析的现象。

作者: kuailedeadai 时间: 2010-12-21 21:46 标题: 回复 #1 kuailedeadai 的帖子

大家说的都很有道理，看来论坛里确实高手云集，每次都能学到不少东西，在此谢谢大家了！同时祈祷我的实验顺顺利利呵呵

作者: jeirf3uwd 时间: 2010-12-27 10:45

通常缓冲盐的浓度范围为10~100mmol/L

作者: fjdlgldg 时间: 2010-12-27 10:45

有缓冲盐的话有机相浓度不能太高，否则很容易析出的

作者: LUMGR 时间: 2010-12-27 10:46

在同样能得到较好分离的条件下,最好用浓度低的缓冲液!!以减少对泵的损害

作者: LUMGR 时间: 2010-12-27 10:46

QUOTE:

原帖由 sacred 于 2010-12-21 11:04 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
楼主用的是什么仪器，有的仪器的单向阀对缓冲盐的浓度较为敏感，略高一点是就会堵塞。楼主用的等度还是梯度，缓冲盐的析出和有机盐的比例有较大的关系

你走的是梯度的话，很可能在有机相比例很高的时候出现盐析的现象。 ...

只听说岛津单向阀对纯乙腈有影响，还有单向阀对缓冲液敏感

作者: gamewang 时间: 2010-12-27 10:46

建议上缓冲盐流动相之前，先用水相或甲醇（乙腈）和水混合相过渡一下！

作者: eesa_dc_seein 时间: 2010-12-27 10:47

QUOTE:

文献的只能参考，可信度不大，还要自己多试验。

作者: nancy7752 时间: 2010-12-27 10:47

一般都控制在１０ｍｍｏｌ左右吧，你那浓度是太高了

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