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标题: 做多肽质谱测定分子量的工作，要通过水解吗？ [打印本页]

作者: trymybestchy 时间: 2010-12-23 11:03 标题: 做多肽质谱测定分子量的工作，要通过水解吗？

本人目前在做多肽质谱测定分子量的工作，UPLC-MS-MS（三从四级杆），ESI+，BEN C18柱，但是仪器的质量范围是2000D，而我要测的肽分子量>6000，

1 要通过水解吗，水解后的片段是测一级质谱还是二级？

2 据说可以让肽带多电荷，我现在只是在流动相中加入了0.1%的甲酸，但是这样的条件一般是产生【M+H】+峰吧

请做过类似工作的前辈指点

补充一下，
3 可以通过源内CID，进行碎裂吗

[ 本帖最后由 miracle 于 2010-12-23 18:54 编辑 ]

作者: nanopony 时间: 2010-12-24 09:24

做不了，做质谱跟你后面的条件有什么关系

作者: sseia42 时间: 2010-12-24 10:58

你是三重四级杆与ESI联用吗，如果是，你的蛋白应该可以测，它的准分子离子峰可能是含多电荷的。最大的测量可以达到30000 D的蛋白质。

作者: duxin_30 时间: 2010-12-24 11:00

应该是可以做的，带多电荷，通过多电荷再计算分子量

作者: trymybestchy 时间: 2010-12-26 11:09

我的仪器是三重四级杆与ESI连用，测肽的分子量，我知道要用到多电荷计算分子量，如何让样品带多电荷呢
调整CID，锥孔电压，还是其他的参数呢？请指教

能够说一下具体一点的条件吗，比如
流动相我用乙腈：水 90:10,0.1 %甲酸
源内电压是不是要大一些

作者: wyznanhang 时间: 2010-12-26 11:12

可以让他碎裂的小了看呗

作者: 小莲 时间: 2010-12-26 12:44 标题: 回复 #5 trymybestchy 的帖子

加甲酸就可以使之带多电荷。
现在关键是看结果了。如果是多电荷，一级质谱应该是m/z=（多肽分子量+n）/n 的多条质谱棒，n为不大于肽个数的自然数，通过相邻的两个m/z值联立（m/z值大的取n，小的取n+1）就可以求出分子量以及n。多取几次就可以得到多肽的平均分子量了。
二级质谱用的源是什么？如果是EI 就可以获得碎片，可以看氨基酸的组成。

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