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标题: 【求助】请高手指点为何会频繁出现此种污染？ [打印本页]

作者: 00无名指00 时间: 2015-1-29 15:49 标题: 【求助】请高手指点为何会频繁出现此种污染？

最近刚开始进行细胞培养，我养的是前列腺癌PC3细胞，频频出现污染，每次污染发现的时候都是细胞形态已经基本上崩溃，散乱，然后在细胞之间发现细沙样的黑点，在低倍显微镜下显示非常小，从外观上看培养基比较浑浊，由于是菜鸟，就怀疑是操作原因，另外准备了六孔板将胰酶，血清，培养基，配好的完全培养基全部培养，最后发现是血清和配好的完全培养基出问题，在其中发现了絮状的黑团，扔掉重配后，前两天使用新培养基第一次传代，一传四，结果四瓶全部杯具。。。依然是从外观上看培养基非常浑浊，细胞中间出现细沙样的黑点。和之前的污染很类似，怕还是自己的操作出问题，于是在昨天请上一届师姐在一旁指点着做完了一次传代，中间有不对的请她即使指出，但是昨天发现依然出现这种类似的污染，请教各位，可能原因是出在哪？

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作者: 00无名指00 时间: 2015-1-29 15:49

这是在倒置显微镜下的照片。请各位不吝赐教，到目前为止，还处在养细胞练手阶段，但是每次传代必污染，没有一次不出现污染，实在是太打击人，找不出是操作的环节没有做到无菌还是培养液或使用器械受污染。
PS：目前每次操作的时间比较长，一次传代一传三，大约要1个多小时，这是不是很严重的一个因素呢？

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作者: superboy 时间: 2015-1-29 15:52

白色念珠菌？

作者: kewanqi2011 时间: 2015-1-29 15:52

可能是霉形体污染吧。有没有可能你的细胞株就是污染的？

作者: 66小飞侠 时间: 2015-1-29 15:52

应该是细胞一开始保种的就是污染了的

作者: xueyouzhang 时间: 2015-1-29 15:53

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可能是霉形体污染吧。有没有可能你的细胞株就是污染的？

我用的细胞株基本上是其他人传代时候传给我的，或者直接拿着其他人冻存的复苏的，但是其他人传代的同一批是不污染的，其他人冻存的复苏也是不污染的。请问如果是自己个人操作问题，那么最大的错误可能性会错在什么步骤呢？

作者: xueyouzhang 时间: 2015-1-29 15:53

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白色念珠菌？

原来怀疑是黑胶虫，但是听上一届人说黑胶虫污染的不会出现培养基浑浊，而我的每次污染都浑浊，请问如果是白色念珠菌污染，会表现为什么情况？一般是什么原因导致的呢？

作者: xueyouzhang 时间: 2015-1-29 15:53

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应该是细胞一开始保种的就是污染了的

作者: 考拉乌拉拉 时间: 2015-1-29 15:54

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原帖由 xueyouzhang 于 2015-1-29 15:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我用的细胞株基本上是其他人传代时候传给我的，或者直接拿着其他人冻存的复苏的，但是其他人传代的同一批是不污染的，其他人冻存的复苏也是不污染的。请问如果是自己个人操作问题，那么最大的错误可能性会错在什么步骤呢？ ...

嗯，那真的是环境脏了么？建议趁过年有时间，把细胞间彻底用甲醛熏蒸一下，所有的枪，用的瓶子什么都换了吧，其他也没有什么办法了。。。
ps：黑胶虫污染？只有国内才有人说这个东东。国外的文献有提到过这种东西么？

作者: xingyi08 时间: 2015-1-29 15:55

一般污染了，找不到原因的话，真个细胞培养环境最好都做清洁，包括培养箱什么的，里面的硫酸铜也可以换一下，超净台里头用酒精好好擦一下，紫外过夜

作者: 00无名指00 时间: 2015-1-29 15:55

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嗯，那真的是环境脏了么？建议趁过年有时间，把细胞间彻底用甲醛熏蒸一下，所有的枪，用的瓶子什么都换了吧，其他也没有什么办法了。。。
ps：黑胶虫污染？只有国内才有人说这个东东。国外的文献有提到过这种东西么？ ...

请问如果怀疑培养基和血清什么的污染，要做培养检测有没有污染的话，怎么做？

作者: 考拉乌拉拉 时间: 2015-1-29 15:56 标题: 回复 #11 00无名指00 的帖子

请问如果怀疑培养基和血清什么的污染，要做培养检测有没有污染的话，怎么做？

作者: PINK 时间: 2015-1-29 15:56

培养基血清出问题了那是没办法的是，只能全换新的。血清最好用进口的。培养皿用一次性的吧。。。

作者: 天下虫子 时间: 2015-1-29 15:57

一种可能是细胞冻存时就污染了，只能放弃，或者培养时加抗生素，等一段时间细胞经过传代彻底清除了细菌后，再用无抗生素的培养基，一种可能是细胞间，或者超净台，培养箱里的某个角落就有菌群污染源一直没有清除，建议细胞间至少一个月熏一次乳酸灭菌，因为气体可以无孔不入灭菌起来比紫外线有优势。

作者: XYZQ 时间: 2015-1-29 15:57

黑焦虫污染，比较难解决，除非你的细胞活性很好，否则就选择在重新培养。

作者: DDD 时间: 2015-1-29 15:58

细胞培养用的瓶子和吸管都换一次性的试试，把所有可以更换的条件都换一遍，应该可以找到原因的，细胞房的清洁是必须的，一定要好好除菌。

作者: @花开花落@ 时间: 2015-1-29 15:58

你们培养基买的还是配的？有条件就什么都换，没条件就什么都滤，1=3最多15min吧，如果一个小时，那叫我穿56皿的情何以堪呀！

作者: mamamiya 时间: 2015-1-29 15:58

把你的培养基和血清过滤一下，留个样检一下无菌，把操作台好好清理一下，用前紫外灭菌40分钟，一直开着风

作者: 考拉乌拉拉 时间: 2015-1-29 15:59

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原帖由 天下虫子 于 2015-1-29 15:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
一种可能是细胞冻存时就污染了，只能放弃，或者培养时加抗生素，等一段时间细胞经过传代彻底清除了细菌后，再用无抗生素的培养基，一种可能是细胞间，或者超净台，培养箱里的某个角落就有菌群污染源一直没有清除，建议细胞间至少一 ...

同学你好，我现在是这样子做的，我请一名操作有把握的同学用我的培养基。血清、胰酶等进行操作，除此之外所有其他的瓶子、试管等都用他自己的，这样子排除其他任何可能造成污染的因素，结果这两天下来，没有发现污染，这样子，似乎可以排除我的培养试剂的问题了，我准备再接着用人家的东西进行一次培养，所有这些培养基，血清之类的都用别人的，这样子如果出现污染，那就可以确定是出在自己操作方面的问题，你看这样子可行么？

作者: 考拉乌拉拉 时间: 2015-1-29 15:59

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原帖由 @花开花落@ 于 2015-1-29 15:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你们培养基买的还是配的？有条件就什么都换，没条件就什么都滤，1=3最多15min吧，如果一个小时，那叫我穿56皿的情何以堪呀！

作者: 米囡 时间: 2015-1-29 16:00

超净台、培养箱都有可能的，传代的时间也有点长了~
练手阶段总是各种不顺的，慢慢熟悉了就会好了

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