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标题: 【求助】转化涂板 [打印本页]

作者: 101010 时间: 2015-2-13 16:16 标题: 【求助】转化涂板

谁知道这是怎么回事，每次转化涂板都涂成这样。涂板后16h就长好了，有蓝白斑。求指点

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作者: wawa 时间: 2015-2-13 16:16

卫星菌落太多了，缩短培养时间，至少缩短4-5个小时
不过只要能够挑出主菌落，微卫星影响不死很大，你这个时间太长了

作者: october7 时间: 2015-2-13 16:16

转化菌浓度太高，可以尝试降低浓度然后再进行涂板，这么高的密度也不利于单一菌落的挑选。

作者: mnstyle 时间: 2015-2-13 16:22

转化后复苏40分钟就行，然后涂板、过12小时你看看，应该就可以挑菌了

作者: 101010 时间: 2015-2-13 16:22

QUOTE:

原帖由 wawa 于 2015-2-13 16:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

卫星菌落太多了，缩短培养时间，至少缩短4-5个小时
不过只要能够挑出主菌落，微卫星影响不死很大，你这个时间太长了

这样单菌落长的不是很大

作者: 101010 时间: 2015-2-13 16:22

QUOTE:

原帖由 october7 于 2015-2-13 16:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
转化菌浓度太高，可以尝试降低浓度然后再进行涂板，这么高的密度也不利于单一菌落的挑选。

嗯做了个100ul和150ul的梯度，可是2个板都长成这样了。有没有可能是涂的时间过长，导致菌分裂？

作者: windy+++ 时间: 2015-2-13 16:23

长太久了，都出卫星菌落了，下一次大大概8-12h左右就可以了，然后放到4℃30min到1h左右显色就可以挑斑了

作者: PINK 时间: 2015-2-13 16:25

平板时间过长，或者加的抗生素过少，我以前也遇到过

作者: 831226 时间: 2015-2-13 16:25

载体和片段浓度太大了，适量减少。我一般2ul目的片度加1ul载体，目的片段浓度基本在100ng/ul以内，效果比较好，都是单菌落，不会长成一片一片的

作者: 101010 时间: 2015-2-13 16:27

载体和片段浓度太大了，适量减少。我一般2ul目的片度加1ul载体，目的片段浓度基本在100ng/ul以内，效果比较 ...

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我是0.7ul的载体 4.3ul的目的片段

作者: fangxiang 时间: 2015-2-13 16:27

嗯做了个100ul和150ul的梯度，可是2个板都长成这样了。有没有可能是涂的时间过长，导致菌分裂？

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首先，还可以继续降低浓度，再做几个梯度看看；其次，重新配制固体培养基吧，是不是时间太长了，抗生素失效了；还有检查一下4度冰箱，还有37度孵箱，看温度是否准确；祝实验顺利！

作者: leifengta 时间: 2015-2-13 16:28

LB培养基中的抗生素可以适量多加一些，一般阳性菌是杀不死的，缩短培养时间，看正常过夜培养后长得怎么样。祝实验顺利！

作者: 66+77 时间: 2015-2-13 16:28

长太久了

作者: 33号 时间: 2015-2-13 16:29

个人认为：一重新配制平板；二降低转化菌浓度；三缩短培养时间

作者: yayya 时间: 2015-2-13 16:29

第一感觉，您的感受态已经污染了杂菌，建议重新制备，菌种一定要纯

作者: 555444 时间: 2015-2-13 16:29

染菌

作者: 131415 时间: 2015-2-13 16:29

是不是菌落为棉絮状？是不是根本没法挑？是不是还没过夜就长出来了？PS：要等培养基凉好了再加氨苄，混匀

作者: panda王 时间: 2015-2-13 16:30

你没涂匀涂得时候一定要涂匀吸收后再放入培养箱

作者: kulee 时间: 2015-2-13 16:30

抗生素失活！

作者: toy 时间: 2015-2-13 16:31

嗯做了个100ul和150ul的梯度，可是2个板都长成这样了。有没有可能是涂的时间过长，导致菌分裂？

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你加的太多了我也遇到类似的情况 50微升足矣否则只能这样了你可以试试

作者: 101010 时间: 2015-2-13 16:32

是不是菌落为棉絮状？是不是根本没法挑？是不是还没过夜就长出来了？PS：要等培养基凉好了再加氨苄，混匀

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是啊不太好挑，但是一般长了16个小时呢培养基都是先涂IPTG和X-gal 完了37°放半个小时再涂

每次加氨苄是先把固体培养基化了，然后等不是很烫时加氨苄然后倒板。

作者: zzzz 时间: 2015-2-13 16:32

这个梯度做的太小了，应该是1微升+100微升，为好。或者采取划线的方式。

作者: 2541 时间: 2015-2-13 16:32

可能板子放的时间长了，重新倒一批板子试试。。。

作者: yes4 时间: 2015-2-13 16:33

划线做个梯度

作者: S6044 时间: 2015-2-13 16:38

是不是倒板子的时候温度太高了，抗生素都失活了

作者: S6044 时间: 2015-2-13 16:39

我是0.7ul的载体 4.3ul的目的片段

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要测一下目的片段的浓度，大概算一下比例，载体试剂盒里有计算方法的。浓度最好按要求来做，否则会影响连接

作者: greenbee 时间: 2015-2-13 16:39

感受态活力太好了吧，可以把一管感受态分两管用！

作者: 49888 时间: 2015-2-13 16:40

用新鲜的平板，抗性涂30uL （100mg/mL），感受态细胞别太多（100ug足够）

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