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标题: 【求助】 293t细胞活力不好 [打印本页]

作者: mickeylin    时间: 2015-2-23 18:39     标题: 【求助】 293t细胞活力不好

新手,刚养细胞,我看细胞形态还可以,就是长的很慢,培养基DMEN+10%FBS+0.1%双抗,基本上四天才能传,而且好多都是成簇的生长?求高手指点!

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作者: mickeylin    时间: 2015-2-23 18:39

10倍镜

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作者: mickeylin    时间: 2015-2-23 18:40

4倍镜

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作者: mickeylin    时间: 2015-2-23 18:40


传错了。。这个是10x的


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作者: zbboom    时间: 2015-2-23 18:41

重新复苏一管呗!
作者: am10    时间: 2015-2-23 18:41


感觉细胞有些老化了,估计你们的培养条件不好,比如培养箱的温度波动大或者CO2含量变化大且时间长,导致细胞不能很好生长,或者你冻存细胞的时候,养的细胞太过头了,都有可能导致这种状态,FBS不好也会导致这样的状态

作者: cbou876    时间: 2015-2-23 18:42


传细胞时传的太稀了!这个没问题,重新消化,传成两皿。

作者: summerxx    时间: 2015-2-23 18:42

首先确认这是293T还是HEK293,一般HEK293形态和你的比较相近
1.可以把细胞密度调高点,如果你这是复苏以后的细胞密度,那就有点稀了。
2.传完细胞看一下,是不是成团,我觉得你没有消化好。正常消化完显微镜下看应该是单个的细胞。3.复苏细胞一般要恢复几代才能正常生长。

作者: ilovegaga    时间: 2015-2-23 18:42

胰酶不能消化太久,1-2min;另外在处理细胞前DMEM要在37°C水浴中置一段时间,传代细胞密度在30%-40%。LZ可以再复一支试试,有时候要连复几支才能找到状态好的细胞。293T应该很好养,长的很快,基本1-2d传一次。祝好运

作者: mod=8048    时间: 2015-2-23 18:44

貌似没有消化好吧!293T很好养,增殖也快的!

作者: mickeylin    时间: 2015-2-23 18:46



QUOTE:
原帖由 am10 于 2015-2-23 18:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

感觉细胞有些老化了,估计你们的培养条件不好,比如培养箱的温度波动大或者CO2含量变化大且时间长,导致细胞不能很好生长,或者你冻存细胞的时候,养的细胞太过头了,都有可能导致这种状态,FBS不好也会导致这样的状态 ...

你好,细胞老化是主要看细胞空泡多少么。。。我在高倍镜下看细胞膜上都有一点点两的像孔一样的东西是空泡么?谢谢
作者: mickeylin    时间: 2015-2-23 18:46

首先确认这是293T还是HEK293,一般HEK293形态和你的比较相近
1.可以把细胞密度调高点,如果你这是复苏以后 ...

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你好,这是293T前十代的细胞,是复苏传了两代以后的
作者: mickeylin    时间: 2015-2-23 18:46

传细胞时传的太稀了!这个没问题,重新消化,传成两皿。

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我重新消化,传代密度调高,现在好一些,但是感觉还是有点成簇生长,看看转染之后怎么样。。。谢谢
作者: mickeylin    时间: 2015-2-23 18:47

首先确认这是293T还是HEK293,一般HEK293形态和你的比较相近
1.可以把细胞密度调高点,如果你这是复苏以后 ...

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请问一下,消化好是怎么个意思,需要完全把它从壁上消化下来,但是我怕消化时间长了对细胞有损伤,我现在都是直接胰酶加入覆盖细胞后吸走,用培养基把它从壁上吹打下来的,很容易就下来了。。。这样可以么?谢谢!
作者: mybioon    时间: 2015-2-23 18:47


重新复苏一管,多加点血清培养,等细胞长好了再传代,用含EDTA的胰酶消化,离心收集细胞后用枪充分重悬,使细胞分开成单个。传代后,保留20%左右细胞在培养瓶内

作者: baidukk    时间: 2015-2-23 18:47

细胞老化,你会看到细胞膜的界限比较模糊,细胞里面空泡也很多
作者: avi317    时间: 2015-2-23 18:48

我建议不加双抗试试。。。其实加了双抗一般也抵不住多少污染,反而影响自己细胞的生长
作者: qqshepherd    时间: 2015-2-23 18:48

我觉得有四种可能,一种是冻存和复苏的时候操作的不太好使细胞活力下降了;第二种就是冻存的年数太久,尤其是-80℃下冻存超过三个月就会这样长不快;第三种是支原体污染了,支原体污染就会出现生长极其缓慢的现象,建议你检测一下;第四种是胰酶消化时间过长。救回来的可能性不太大,还是重新复苏吧
作者: mybioon    时间: 2015-2-23 18:48


传代密度太低也会聚团生长的~

作者: tianmei001    时间: 2015-2-23 18:49


293T做病毒是不需要加双抗的!你的培养基配方是不是少了点,可以加NEAA,丙酮酸钠,Glutamine

作者: leifengta    时间: 2015-2-23 18:50

老实说吧,我也在养293T,不过最起码一天一换液两天一分瓶而且都是一分三,基本很少的量在第三天也绝对能长满,你这个细胞形态就不对,我没养过293不清楚,不过这个形态对于293T是不对的,伪足伸的不够长,细胞铺展的不够,要说成簇生长我也有过,也有可能是细胞瓶不好,有些地方细胞长不起来就会成簇生长,总之293T应该很好养,增值很快而且细胞状态好的时候看折光性是非常漂亮的。如果折光性不好,看着不够饱满了,多半就是状态下来了,调整下就好了~
作者: leifengta    时间: 2015-2-23 18:50

还有,我用的是胎牛血清10%,不是马的,培养箱37℃,CO2浓度6%




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