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标题: 【求助】菌落PCR中的问题 [打印本页]

作者: iii_ii 时间: 2015-3-11 17:23 标题: 【求助】菌落PCR中的问题

我是直接在平板上挑菌加入到pcr反应体系中，试剂及反应条件都是没有问题的，我们做的是16Ｓ通用引物，结果出现了比marker最大片段1500bp大好多的条带不知道是怎么回事。求高手赐教~~~~

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作者: lgm 时间: 2015-3-11 17:24

我一般挑出菌落液体培养基要10个小时以后再拿菌液做PCR,直接那菌落出现这种情况个人感觉有可能是挑的菌落中的菌太多，直接跑出来细菌的质粒或者基因组

作者: qianqin1977 时间: 2015-3-11 17:24

你挑单克隆把菌摇起来以后,用菌液做PCR试一下

作者: remenb 时间: 2015-3-11 17:25

这个有可能是你的引物在菌的基因组中扩增的结果，而不是在你的质类上扩增

作者: iii_ii 时间: 2015-3-11 17:26

QUOTE:

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我一般挑出菌落液体培养基要10个小时以后再拿菌液做PCR,直接那菌落出现这种情况个人感觉有可能是挑的菌落中的菌太多，直接跑出来细菌的质粒或者基因组 ...

有可能，谢谢啦。不是菌太多久抑制反应了吗？但是我看16Ｓ有有P出来的。。。。

作者: gmjghh 时间: 2015-3-11 17:26

感觉菌液的纯度有问题,划线以后再挑斑重新检测

作者: iii_ii 时间: 2015-3-11 17:26

QUOTE:

原帖由 gmjghh 于 2015-3-11 17:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

感觉菌液的纯度有问题,划线以后再挑斑重新检测

菌不纯？

作者: gmjghh 时间: 2015-3-11 17:27

QUOTE:

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菌不纯？

感觉有点像,可以试一下

作者: ququer787 时间: 2015-3-11 17:28

是不是菌落挑得太多了，把大肠杆菌的染色体跑出来了。

作者: yayya 时间: 2015-3-11 17:29

菌量太多了，基因组DNA或者大质粒混在里面，有的PCR酶受抑制但估计还是有活力的，

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