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标题: 发现工作液的OD值一直在下降！！！ [打印本页]

作者: 舞疯 时间: 2015-3-27 23:45 标题: 发现工作液的OD值一直在下降！！！

最近在做ABTS自由基清除试验，可是发现工作液的OD值一直在下降，这样试验就没法做下去了，不知各位有没有这种情况的发生，如果有，如何解决的，非常感谢！
我的做法如下：
储备液1：7 mM ABTS水溶液
储备液2: 4.9 mM 过硫酸钾水溶液
母液：将储备液1和2等体积混合，室温避光反应12-16h
工作液：将母液用pH 7.4的磷酸缓冲液稀释至OD734=0.7±0.02
以上是引用其它同学的发帖，相同的配制方法也遇到相同的问题，储备液稀释后一小时内吸光值就由0.685下降到0.432，这样就不能用了啊，急请做过的大侠帮帮忙！十分感谢！

作者: 翔少爷 时间: 2015-3-27 23:45

我的方法和你的有点不一样，过硫酸钾用的是2.45，工作液是用无水乙醇稀释的，我做出来的效果还可以。

作者: 小米粒 时间: 2015-3-27 23:48

我的混合比例是1:1，另外，你做几组之后，就测一下abts的od值，校正一下，会好一些吧

作者: 星星…… 时间: 2015-3-27 23:50

这种试剂确实需要现配现用，且要低温避光保存

作者: kaixinjiuhao 时间: 2015-3-27 23:51

现配现用，每次做之前稀释到吸光值0.7，这样也不麻烦的

作者: 大球球 时间: 2015-3-27 23:52

这种自由基本身就很不稳定，吸光值降低是正常现象。所以，一定要现配现用，如果样品较多，中间可以重新校正下。

作者: 美丽婷婷 时间: 2015-3-27 23:53

工作液一般都是用缓冲液稀释，您怎么用的无水乙醇呢？

作者: 双_视野 时间: 2015-3-27 23:53

ABTS自由基要现用现配，ABTS最好用进口的，我用的变化没有那么快！
几组样品，最好是同时做，这样才有可比性
如果有条件，建议用酶标仪做，先在96孔板里面加相应样品溶液，后用排枪加调好吸光度的ABTS溶液，这样做很准

作者: 莫莫莫 时间: 2015-3-27 23:53

每次测定前要调整到0.7，但不一定要用母液稀释，可以用稀释倍数低点的来加到吸光度变低的ABTS里面

作者: 千里之外 时间: 2015-3-27 23:54

我是用无水乙醇配的两种溶液，等体积混合制备母液，然后用无水乙醇稀释，过程中一定要避光，我用了一天，变化不大

作者: grace! 时间: 2015-3-27 23:54

棕色瓶装溶液，锡箔纸或者黑色袋子把试剂瓶外面包严实，当然，也不可能完全的避光，我测得时候实验室灯比较暗，只要你按照比较正规的方法配置，吸光值不会降低很多的，除非你的溶液被污染了，因为ABTS是个很好清除的自由基，加一点儿待测样品就能变成无色了，所以玻璃仪器得洗干净，尽量不要有抗氧化性物质残留什么的，取溶液的时候也要注意，实验不理想是多方面的，有时候是试剂的问题，有时候是操作问题，你具体分析依稀自己的原因吧。

作者: 巅峰时刻#-# 时间: 2015-3-27 23:54

现配现用,避光,低温保存,我师妹用的我记得体系全是用甲醇配制的，母液是低温避光保存的

作者: hero_b 时间: 2015-3-27 23:55

母液用水，缓冲液，无水乙醇哪个稀释效果要好呢？我看文献里有用乙醇稀释的，但是溶液是用水配的啊，怎么可以用乙醇来稀释呢？

作者: 迷糊小鬼 时间: 2015-3-27 23:55

百度百科上写的，过硫酸钾不溶于乙醇啊。。我试了也确实没有溶呀。。。文献里也有写用水溶解的，请问到底该用什么呢？如果是用乙醇的话，没有完全溶解该怎么办呀。。多谢~~

作者: apple_danny 时间: 2015-3-27 23:55

我配的是600微升的母液+50%的EtOH大概有10毫升吧。。

作者: today@ 时间: 2015-3-27 23:56

楼主方法是对的，查了几篇英文文献，都是要求过硫酸钾终浓度为2.45 mM。

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