分析测试百科

标题: 分析isospinosin , spinosin [打印本页]

作者: lxycxf 时间: 2011-3-27 21:48 标题: 分析isospinosin , spinosin

在用HPLC-UV分析 isospinosin,,, spinosin 。首先，这两个化合物是7位和8位的取代基位置互换，其他都一样。在甲醇-水流动相中能分离开，洗脱梯度为70%aq-0；时间为0-60min，出峰时间大概在30多分钟。但是基线漂移很严重。换乙腈-水后，怎么也分不开。怎么办？？？

作者: naren4545 时间: 2011-3-28 11:59

乙腈的洗脱强度稍大于甲醇，把比例调整一下吧！

作者: 考研吧 时间: 2011-3-28 12:00

1.基线漂移严重的原因可能是进样之前流动相没有平衡好，也有可能是梯度洗脱过程中压力不稳定导致的基线漂移
2.你的乙腈和水的比例是多少呢

作者: xiaotaozi06 时间: 2011-3-28 12:01

基线漂移可以解决的..多平衡一下吧...

作者: uwku58h 时间: 2011-3-28 12:01

是不是甲醇不好？
检测波长是多少？用乙腈的话，基线漂移也很大么？

作者: redwang8181 时间: 2011-3-28 12:01

检测波长是多少？

作者: semxuxu 时间: 2011-3-28 12:02

出峰时间有点晚，调到十五分钟左右比较好，可能是你梯度变化比较大吧，这样容易基线不稳。还是用甲醇-水系统吧。再有如果结构比较稳定的话，可以加点酸或碱。

作者: HEC_css 时间: 2011-3-29 11:28

能看看具体结构么？

先考虑基线问题。看看色谱图如何？

作者: chongwenmen 时间: 2011-3-29 11:28

洗脱梯度为70%aq-0；时间为 0-60min？
你从水一直到70%，60分钟跑完是吗？
如果是的话，别从水开始，20%也行啊，梯度变得慢一点

作者: PURPOSE人生 时间: 2011-3-29 11:29

QUOTE:

原帖由 lxycxf 于 2011-3-27 21:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
在用HPLC-UV分析 isospinosin,,, spinosin 。首先，这两个化合物是7位和8位的取代基位置互换，其他都一样。在甲醇-水流动相中能分离开，洗脱梯度为70%aq-0；时间为0-60min，出峰时间大概在30多分钟。但是基线漂移很严重。换乙 ...

你的样品是不是只有这两个物质出峰啊，如果只是两个物质混合的话，这个梯度设计很有问题啊，
两个东西30分钟都能出峰的话，就没必要再继续让梯度走下去了呀；而且你没必要把初始有机相比例设得那么低。用甲醇-水走梯度，基线漂是正常的。

作者: yangst85 时间: 2011-3-29 11:29

楼主是不是检测波长低于230nm啊？

作者: maicaixiaogu 时间: 2011-3-29 11:29

QUOTE:

LS说的对与UV的波长有关. 可以换一波长看一看.
如果这种现象重复出现在每一次进样中, 也可以用减背景的方法来解决. 就是先做一空白背景谱, 然后在样品分析时, 减去空白背景就可以了.

作者: lxycxf 时间: 2011-4-1 19:02

首先很感谢大家的积极建议。由于我的样品至少需要检测5个峰以上，所以，检测范围比较宽。用70％水：30甲醇－0％水：100％甲醇，时间：0－60min。大概10min左右出的第一个峰是需要的，然后20min左右是第二个峰。接着就是30min多分钟出现好多峰，有很严重重叠，其中isospinosin ,spinosin就是在这里，但是分开了。然后50多分钟出现的jujubosideA也是需要的。所以，样品中需要测的化合物极性好像差别比较大。基线漂移，我估计是因为梯度比较陡。所以换成乙腈和水系统。为了摸索isospinosin ,spinosin 分离的条件，就这两个化合物进样，梯度范围为25％乙腈－50％乙腈，0-30min, 出峰时间24min左右，分离度0.5，不能完全分离，于是降低乙腈浓度，为20％乙腈－50％乙腈，时间不变，结果分离度差不多。出峰时间延长接近30min.

作者: lxycxf 时间: 2011-4-1 19:03

首先很感谢大家的积极建议。由于我的样品至少需要检测5个峰以上，所以，检测范围比较宽。用70％水：30甲醇－0％水：100％甲醇，时间：0－60min。大概10min左右出的第一个峰是需要的，然后20min左右是第二个峰。接着就是30min多分钟出现好多峰，有很严重重叠，其中isospinosin ,spinosin就是在这里，但是分开了。然后50多分钟出现的jujubosideA也是需要的。所以，样品中需要测的化合物极性好像差别比较大。基线漂移，我估计是因为梯度比较陡。所以换成乙腈和水系统。为了摸索isospinosin ,spinosin 分离的条件，就这两个化合物进样，梯度范围为25％乙腈－50％乙腈，0-30min, 出峰时间24min左右，分离度0.5，不能完全分离，于是降低乙腈浓度，为20％乙腈－50％乙腈，时间不变，结果分离度差不多。出峰时间延长接近30min.

作者: lxycxf 时间: 2011-4-1 19:03 标题: 回复 #10 PURPOSE人生的帖子

首先很感谢大家的积极建议。由于我的样品至少需要检测5个峰以上，所以，检测范围比较宽。用70％水：30甲醇－0％水：100％甲醇，时间：0－60min。大概10min左右出的第一个峰是需要的，然后20min左右是第二个峰。接着就是30min多分钟出现好多峰，有很严重重叠，其中isospinosin ,spinosin就是在这里，但是分开了。然后50多分钟出现的jujubosideA也是需要的。所以，样品中需要测的化合物极性好像差别比较大。基线漂移，我估计是因为梯度比较陡。所以换成乙腈和水系统。为了摸索isospinosin ,spinosin 分离的条件，就这两个化合物进样，梯度范围为25％乙腈－50％乙腈，0-30min, 出峰时间24min左右，分离度0.5，不能完全分离，于是降低乙腈浓度，为20％乙腈－50％乙腈，时间不变，结果分离度差不多。出峰时间延长接近30min.

作者: lxycxf 时间: 2011-4-1 19:04

QUOTE:

原帖由 semxuxu 于 2011-3-28 12:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
出峰时间有点晚，调到十五分钟左右比较好，可能是你梯度变化比较大吧，这样容易基线不稳。还是用甲醇-水系统吧。再有如果结构比较稳定的话，可以加点酸或碱。 ...

首先很感谢大家的积极建议。由于我的样品至少需要检测5个峰以上，所以，检测范围比较宽。用70％水：30甲醇－0％水：100％甲醇，时间：0－60min。大概10min左右出的第一个峰是需要的，然后20min左右是第二个峰。接着就是30min多分钟出现好多峰，有很严重重叠，其中isospinosin ,spinosin就是在这里，但是分开了。然后50多分钟出现的jujubosideA也是需要的。所以，样品中需要测的化合物极性好像差别比较大。基线漂移，我估计是因为梯度比较陡。所以换成乙腈和水系统。为了摸索isospinosin ,spinosin 分离的条件，就这两个化合物进样，梯度范围为25％乙腈－50％乙腈，0-30min, 出峰时间24min左右，分离度0.5，不能完全分离，于是降低乙腈浓度，为20％乙腈－50％乙腈，时间不变，结果分离度差不多。出峰时间延长接近30min.

作者: PURPOSE人生 时间: 2011-4-2 10:41 标题: 回复 #16 lxycxf 的帖子

如果你要分离的两个化合物是异构体的话，甚至手型异构体，那这个方法可能很不好建立。
即使你能勉强做到基线分离，可能方法的耐用性也要打折扣的。
手性拆分，还是手性柱给力啊！
祝好运！

作者: lxycxf 时间: 2011-4-2 13:10 标题: 回复 #18 PURPOSE人生的帖子

不是手性，不过7，8 位的取代基有一点差别。

作者: lxycxf 时间: 2011-4-2 13:12 标题: 回复 #12 maicaixiaogu 的帖子

检测波长为210nm

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