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标题: 【求助】二次PCR目的带还是不亮 [打印本页]

作者: 西子 时间: 2015-4-2 14:41 标题: 【求助】二次PCR目的带还是不亮

请教高人：
pcr条带不亮，很弱，于是做二次PCR，还是用第一次的试剂和体系，但目的带并没有增亮，还是很弱，这是为什么呀？百思不得其解，我是将第一PCR产物稀释20倍与100倍，结果都差不多，请大家指教！

作者: vvmmoy 时间: 2015-4-2 14:41

PCR总是很怪的，rp问题

作者: pencil菲 时间: 2015-4-2 14:42

PCR真奇怪，我也老遇到问题。觉得引物最重要。楼主可试试不稀释产物的

作者: 西子 时间: 2015-4-2 14:45

不稀释产物会不会浓度太高？我会试试，谢谢！
大家帮我多分析分析吧，我已饱受折磨了。

作者: linlinstar 时间: 2015-4-2 14:45

我最近做了一个没稀释的，不过DNA体积数为原来的一半，效果比原来强

作者: 西子 时间: 2015-4-2 14:45

怎么判断假阳性啊？会不会是假阳性？

作者: mickeylin 时间: 2015-4-2 14:46

结果怎么样了？有改观吗？我也在做二次PCR，效果也不好，就有一回变亮了...

作者: kewanqi2011 时间: 2015-4-2 14:46

我已经无语了，我P了好几天就没P出第二次的结果，郁闷的要死

作者: 一叶 时间: 2015-4-2 14:46

我最近也在为这个问题发愁，条带不亮拍不出好照片，快急死我了

作者: 铜雀 时间: 2015-4-2 14:47

我的二次p就是没有见过东西，全是白花花的哭

作者: 分子式 时间: 2015-4-2 14:47

哎，我都P了一个月了，还是没有改观，不是没有目的条带就是条带很浅，而且最怪的就是MAKER跑不开

作者: babybabe 时间: 2015-4-2 14:47

我前几天也在搞这个，你可以尝试下，降低一下退火温度，还有就是减少一些循环数等等优化下。在2次pcr的时候最好做几个浓度稀释下看看。

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