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标题: 【求助】请各位帮我分析下电泳图总跑成这样？ [打印本页]

作者: fox_79 时间: 2015-4-2 14:50 标题: 【求助】请各位帮我分析下电泳图总跑成这样？

请各位帮我分析下电泳图总跑成这样，是什么有问题，谢谢！

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作者: 969 时间: 2015-4-2 14:50

试试换成新的电泳液

作者: fox_79 时间: 2015-4-2 14:51 标题: 回复 #2 969 的帖子

换了，还是一样的结果

作者: 969 时间: 2015-4-2 14:51

那有可能是你的样品质量不高了。。。

作者: fox_79 时间: 2015-4-2 14:51

可是Marker也跑成那样了啊

作者: 969 时间: 2015-4-2 14:52 标题: 回复 #5 fox_79 的帖子

哦！是不是电压不稳呢！

作者: fox_79 时间: 2015-4-2 14:53

怎么看是不是电压不稳？

作者: DONT 时间: 2015-4-2 14:53

带不平正吧！拖尾的，我觉得是要么降解了，要么杂的多质量不高

作者: woshi 时间: 2015-4-2 14:53

我觉得你的胶是不是没有制好啊，煮胶的时候一定要煮开，可以多煮两次，溶好了的胶跑出来就要好些。还有就是电泳液有可能有问题哦

作者: lixi559 时间: 2015-4-2 14:54

我看不像是胶的问题，像电压的问题，你用多大的电压跑的，还有你跑的样品分别是什么你也没有说明，还有你是用什么染料

作者: fox_79 时间: 2015-4-2 15:02

电压是125V，0.5XTBE，染料是用百泰克的utralpower 核酸染料，胶染和点染结合，跑的是PCR产物

作者: fox_79 时间: 2015-4-2 15:02

胶融的很彻底啊，每次都特意看清楚，缓冲液配新的也一样，实验室的其他人也是出现这情况

作者: qianqin1977 时间: 2015-4-2 15:03

我没有用过TBE和你所说的染料，用的是TAE和EB，给你做个参考，是不是电压有点大，用小电压试试呢？

作者: 考拉乌拉拉 时间: 2015-4-2 15:03

估计是杂质过多或者DNA有被降解，检查看看是否有降解酶等杂质存在，还有可能是电压稳定问题。

作者: caihong 时间: 2015-4-2 15:03

好怪异的电泳图，可能是你习惯性的问题，可以试试让别人代做一次，看看是否是你本人的操作的问题

作者: txwuyan 时间: 2015-4-2 15:04

其他人也不出现这样的问题很可能是电压的问题

作者: langlang 时间: 2015-4-2 15:04

我也遇到过这种情况，可能是被降解啦

作者: fox_79 时间: 2015-4-2 15:04

实验室其他人跑电泳也是这种情况

作者: 喵咪 时间: 2015-4-2 15:04

胶没配好

作者: zhezhe 时间: 2015-4-2 15:05

我遇到过不同染料跑胶效果不同，有些染料就会让带跑成这个样子，不知道你是不是这个问题。你可以不加染料，去别的实验室用EB染一下，或者换个染料试一试，如果不跑成这样，那就说明是染料的问题了。

作者: babybabe 时间: 2015-4-2 15:05

同意楼上，很可能是染料的问题。我也遇到过这样的问题，用一种非毒性的染料做，跑出奇形怪状的条带，最终换回EB了。去别的实验室用EB试试吧。

作者: yayya 时间: 2015-4-2 15:05

电压的问题

作者: yizhi 时间: 2015-4-2 15:06

拖尾应该是杂蛋白的原因

作者: 考拉乌拉拉 时间: 2015-4-2 15:06

可能引物特异性不好，还有你循环可能有问题，改下循环条件试试看！

作者: newway 时间: 2015-4-2 15:06

我觉得你的胶铺的有问题，热胶的时候一定要受热均匀，有没有小块没化开啊？

作者: guagua 时间: 2015-4-2 15:07

估计是你的胶配的不均匀，或者是样品跑的太快，你把电压降一点试试

作者: qianqin1977 时间: 2015-4-2 15:07

根据经验，可能是以下原因：电压是否稳定，缓冲液是不是该换了，胶可能没有弄好，还有就是你电泳槽是不是放平整了。

作者: S6044 时间: 2015-4-2 15:07

胶没凝好吧

作者: dotaaa 时间: 2015-4-2 15:09

我感觉也像是电压的问题，样品marker应该没问题啊

作者: cj_mondy 时间: 2015-4-2 15:09

琼脂糖换过了吗？

作者: vcve 时间: 2015-4-2 15:10

好像一般琼脂糖胶的电泳用的是TAE缓冲液吧，我们实验室的师弟用的goldview染色剂，还不错，毒性没有EB那么大，不会致癌！

作者: fox_79 时间: 2015-4-2 15:10

QUOTE:

原帖由 vcve 于 2015-4-2 15:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

好像一般琼脂糖胶的电泳用的是TAE缓冲液吧，我们实验室的师弟用的goldview染色剂，还不错，毒性没有EB那么大，不会致癌！

"新产品Goldview，我们不想多加评论。因为从极为相似的对比试验结果来看，该产品似乎就是AO（丫啶橙，一种剧毒产品，且荧光型号不佳））。请看Goldview 与 AO 对比试验结果（其中Goldview是从国内某公司采购，AO则来自SIGMA）"网上看的

作者: fox_79 时间: 2015-4-2 15:11

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原帖由 cj_mondy 于 2015-4-2 15:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
琼脂糖换过了吗？

换了，一样

作者: abc816 时间: 2015-4-2 15:11

试试50乘的TAE和EB染色，我们做的效果可以。。。

作者: fox_79 时间: 2015-4-2 15:11

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原帖由 abc816 于 2015-4-2 15:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

试试50乘的TAE和EB染色，我们做的效果可以。。。

决定换染料用用

作者: #碧海潮生# 时间: 2015-4-2 15:12

换了燃料感觉效果怎么样？？？

作者: caihong 时间: 2015-4-2 15:12

你制胶和跑胶用的缓冲液是TAE吧！首先你制胶和跑胶用的是同一种buffer；其次确认你制的胶是否充分凝固了；再次请确认你跑胶用的多高的电压，当用TAE缓冲液跑胶时，如果电压太高，电流也会很高，如果跑的时间较长，缓冲液的温度就会比较高，胶可能就呈现出融化的状态，跑出的图片就容易出现你所展示的情况。

作者: fox_79 时间: 2015-4-2 15:13

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原帖由 caihong 于 2015-4-2 15:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你制胶和跑胶用的缓冲液是TAE吧！首先你制胶和跑胶用的是同一种buffer；其次确认你制的胶是否充分凝固了；再次请确认你跑胶用的多高的电压，当用TAE缓冲液跑胶时，如果电压太高，电流也会很高，如果跑的时间较长，缓冲液的温度就会 ...

我跑胶用的缓冲液是0.5XTBE，也是用这制胶，胶很确定彻底熔了，而且也是凝固了才跑电泳的，电压125V，不会太高啊

作者: S6044 时间: 2015-4-2 15:13

拖尾现象有可能是因为 1 凝胶的问题 2 电压过高的原因 3 样品上样量的问题，样品质量不高或者上样量过大。

作者: xue258 时间: 2015-4-2 15:13

是不是胶做的不好啊没有煮透电泳液也有影响

作者: taoshengyijiu 时间: 2015-4-2 15:14

换成tae试一下吧！

作者: tie8 时间: 2015-4-2 15:14

胶可能有问题。
电泳液
自己制备的DNA产物
marker，不清楚，可能胶的问题更多一些

作者: zzzz 时间: 2015-4-2 15:14

我怀疑是tbe没配好配的浓度不对我们实验室以前有个师弟配tbe 浓度不对结果条带也乱七八糟的

作者: feiya 时间: 2015-4-2 15:15

可能不同实验室的经验不一样吧，说说我们实验室的经验：
对于不同浓度的琼脂糖和目的基因大小，会调整电泳的条件。
我们现在在做的一般是1%的琼脂糖，用1×的TAE溶解，用的是Goldenviewer染料，一般电压设置在120V左右；
建议lz再摸索一下条件

作者: bangqi_k 时间: 2015-4-2 15:15

你的胶是不是没有制好

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