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标题: 【求助】电泳中的弱带 [打印本页]

作者: 缘yuan 时间: 2015-4-3 09:38 标题: 【求助】电泳中的弱带

请问，为什么pcr产物电泳时有些泳道会有些很弱的条带。应该不是P的很弱，因为重复两次，第二次时那些在第一次较弱的带就没有了，我怀疑是上样时阳性带的样品漂入了周围的泳道造成的。不知道大家有何见教，谢谢！附见中亮带周围的弱带就是我所说的。

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作者: zhezhe 时间: 2015-4-3 09:38

弱带应该是没有P出来吧，具体原因不太清楚，学习。。。

作者: ending 时间: 2015-4-3 09:39

设的有阴性对照吗？看看阴性对照情况，可能是P的弱了，也可能是污染

作者: summerxx 时间: 2015-4-3 09:40

我有时候也有这种情况，阴性对照中是没有的，感觉是没有P出来，这种条带不可信

作者: wood533 时间: 2015-4-3 09:40

我认为这些弱带是PCR污染所致，当时我跑巢式PCR，这种现象也时有发生，建议设阳性对照、阴性对照及空白对照，重新跑PCR，如果有条件PCR相关试剂可以换一批试试。还有提个建议，跑电泳时最好加Mark。祝实验顺利！

作者: yizhi 时间: 2015-4-3 09:40

这个会经常遇到，建议点样的时候要快，根据齿槽孔的大小不要点太多，鉴定的时候18孔的齿槽8微升作用足够了，另外p的时候最好设阴性对照

作者: xue258 时间: 2015-4-3 09:40

这不是漂移,是PCR的问题你只需要亮的条带即可,这种情况很难找到真正原因

作者: shenkunjie 时间: 2015-4-3 09:41

可能你的样品或者是试剂污染了

作者: milkdog 时间: 2015-4-3 09:41

你用什么为模板，如果菌液浓度大的话会出现这个情况，没什么事的

作者: yes4 时间: 2015-4-3 09:41

最右边的那个就是阴性对照。又P了一次，问题就解决了。我的解释是因为这些DNA是从小鼠脚趾抽提的，取样的时候是用同一把剪刀，可能剪完阳性小鼠，又去剪的是阴性小鼠，会有少量串样，导致阴性样本中混有少量阳性DNA，PCR加模板时可能刚好把这些混入的少量阳性DNA吸取了，结果P出微弱条带。

作者: shenkunjie 时间: 2015-4-3 09:42

你这是在检单菌落吗？你这个肯定不是电泳漂样造成的，我看着像是你PCR模板的问题，如果是检菌，我建议你有4~10μl水把单菌落重悬，混合均匀做模板。PCR条件应该没问题

作者: shenkunjie 时间: 2015-4-3 09:42

做PCR时只需要用1~2μl做模板即可，不要太多了，太多对PCR会造成影响的；剩余的你可以加LB摇了

作者: ujne 时间: 2015-4-3 09:42

应该是扩的问题，你仔细看看胶，二聚体亮的目标条带都弱，你引物都形成二聚体了没有和目的片段结合扩增

作者: zhezhe 时间: 2015-4-3 09:43

追问是否是菌落pcr？若是菌落检测，这种情况比较常见，菌液浓的话会出现假阳性，如果扩增条件不好的话也会出现阳性带较弱的情况。建议可以另选一对引物对出现淡淡阳性带的样本进行检测。
还有就是电泳液要换，避免污染。电泳时也要注意！
希望能帮到你！

作者: qianqin1977 时间: 2015-4-3 09:43

轻微污染的后果，阴性对照和MARKER是PCR实验必须要做的！

作者: dior 时间: 2015-4-3 09:44

会不会是引物二聚体？

作者: whitesheep 时间: 2015-4-3 09:44

我做时没有这么亮！

作者: bs4665 时间: 2015-4-3 09:44

经常遇到这样的事情，pcr真的还是要看god的心情

作者: ha111 时间: 2015-4-3 09:45

其实pcr的重复性有时候不是很好的。

作者: cj_mondy 时间: 2015-4-3 09:45

PCR过程中经常会产生非特异扩增或产生引物二聚体等小片段，这都是常见的。

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