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标题: 虾青素液相色谱分析检测，只是在2min时有个倒峰？ [打印本页]

作者: liuzhangwee 时间: 2011-4-25 11:38 标题: 虾青素液相色谱分析检测，只是在2min时有个倒峰？

我最近用自己浓缩的虾青素粗色素油做了一下虾青素液相色谱分析检测，
色谱条件：C18柱，流动相：乙腈：水=95:5，检测波长是471nm，样品用甲醇溶解的。

但是出的谱图报告只是在2min时有个倒峰，其它什么东西都没有了，后来把检测波长换到281nm时就有一序列峰，但这肯定是其它物质，虾青素是在400多nm处吸收的。请问这是什么原因

作者: naren4545 时间: 2011-4-25 18:55

s首先选择好波长，然后再调整色谱条件，很容易的！

作者: hplcangel 时间: 2011-4-26 09:34

简单分析一下：
1、虾青素是在400多nm处吸收，为何检测波长选择471nm？选择虾青素的吸收波长，灵敏度不是更高么？
2、流动相（乙腈：水=95:5）。要知道乙腈的洗脱能力很强，这个比例下，保留性不同的物质分离效果不明显，且保留时间很短。
3、2min处的倒峰，是由于流动相或样品中物质的紫外吸收波长<检测波长引起的，也就是说，样品中紫外吸收波长小于471nm的物质，都可能会形成倒峰。

综上，我认为，471nm，乙腈：水=95:5下，样品在2min处洗脱下来，且以倒峰的信号表现出来。

改善方法：
1、选择适合的检测波长。不确定可以先扫紫外。
2、调整流动相中乙腈比例（乙腈比例，慢慢调试），在合适的比例上可选择流动性使用缓冲盐，调pH等，达到分离目的。
3、样品用甲醇溶解，会有溶剂效应，可以改用流动相溶解。

作者: piaoliang110mei 时间: 2011-4-26 11:09

虾青素本身就在470nm左右有吸收的啊
流动相得改改，我看他们帮我检测时用的流动相有甲醇：二氯甲烷：乙腈：水，甲醇占85%了，其余三个比较少，自己找合适的比例吧，不能全说了

作者: liuzhangwee 时间: 2011-4-26 13:36

你好，我查的是商业标准（进出口动物源性虾青素检测），应该可以适用的啊，流动相我也试过用75%甲醇，也是倒峰

作者: piaoliang110mei 时间: 2011-4-27 17:11

他们检测时用85:5:5:5，就是上面跟你讲的那几个溶剂，在液相里大约 5~7min之间出全反式的峰，8min左右出三个顺式峰。不过一般天然的几乎没有顺式，合成的有一点点顺式。反式峰形很漂亮的，不可能是倒峰，除非你的东西里面没有虾青素，或者你配置的浓度太低也会出现倒峰。

我现在经常玩虾青素，从来没出现过你讲的情况，除了刚开始没做出虾青素的时候。
还有一个，就是你要是进样时有空气，也可能会出现倒峰。

作者: liuzhangwee 时间: 2011-4-28 14:11

你好，谢谢你的指点，后来我浓度提高了，把用石油醚萃取的虾青素液直接测，波长选了石油醚最大吸收峰处，就没有倒峰了

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