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标题: EDTA铁的液相检测问题 [打印本页]

作者: 维拉2010 时间: 2011-4-29 10:14 标题: EDTA铁的液相检测问题

采用液相检测EDTA铁，保留时间不稳定，第一天6.6分，第二天10分，第三天3分，第四天10分

保留时间跟我玩起来捉迷藏有戏，请大家多多指教。以下是详细内容。

柱子 Agilent XDB C8

流动相：40%四丁基氢氧化铵溶液3.25ml加水130ml，再用8.8%甲酸溶液调PH至3.30，加甲醇125ml，再用水稀释至1000ml
，此时PH约为3.50

液相条件波长254nm ，流速1.0ml/min进样量20  EDTA铁浓度0.1mg/ML

第一天：保留时间6.6 分，没在意

第二天：使用前一天流动相、柱子，保留时间跑到10分，以为是EDTA铁在新使用的柱子上有一定饱和时限，所以勉强解释了一下，希望以后会稳定。继续试验

第三天：新换流动相，柱子未换，保留时间跑到3分，以为甲醇加多了或者试剂的问题，狂配流动相，连续更换3次流动相，样品保留时间均在3分。
放弃，无语了。

第四天：死马当活马医，继续用前一天的柱子，流动相，前一天的样品，保留时间重新回到了10分。

以上样品在四天检测当中，峰形和峰面积没有明显变化。

分析以上：排除了流动相、样品、柱子、仪器的因素，实在找不出原因了。还怀疑是流动相的PH导致样品不稳定，后来查询了EDTA铁的PKA在pKPK1=0.0 (CO2H)
pK2=1.5 (CO2H)
pK3=2.00 (CO2H)
pK4=2.69 (CO2H)
pK5=6.13 (NH+)
pK6=10.37 (NH+)  来自维基百科

EDTA铁为二元酸  PKA为2.00 依据此在PH3.5 是稳定的

为什么呢？不过从目前来看，好像是流动相PH的原因啊

[ 本帖最后由维拉2010 于 2011-4-29 10:19 编辑 ]

作者: aa1380 时间: 2011-4-29 13:28

是不是柱子没有饱和好啊！

作者: amelican_beauty 时间: 2011-4-29 13:28

反相柱流动相中使用离子对试剂（四丁基氢氧化铵）要充分平衡，使其在固定相上充分饱和才可以，40%的四丁基氢氧化铵溶液至少要80ml以上，可以用0.1ml/min的流动相过夜，再测。

作者: hplcangel 时间: 2011-4-29 13:29 标题: 回复 #1 维拉2010 的帖子

pH在样品的pKa±1内，保留时间变化最大。
调pH时注意温度对pH计及pH的影响，校准及测量温度控制在25±1内。
另外，注意柱温箱控温。

作者: tiffany199 时间: 2011-4-29 13:29

每次检测完毕后色谱柱充分清洗了吗，流动相的PH是否调节到位？

作者: aasle 时间: 2011-4-29 17:15 标题: 回复 #1 维拉2010 的帖子

第一天：甲醇按照比例配制，合适。时间6min
第二天：原流动相中的甲醇过夜挥发，时间10min
第三天：重配流动相，配错了。
第四天：甲醇又挥发了，刚好10min。
换个人试试或者双人复核吧，看你就知道刚入行，道行太浅。

作者: kcuw589 时间: 2011-4-29 17:15

你这是应该是离子对试剂残留所致的

每次用完后，色谱柱要冲洗干净，小心填料变性

作者: ouoje 时间: 2011-4-29 17:15

貌似没有提到柱温，你柱温控制了吗？
不清楚该物质对温度的敏感性。
有些物质柱温变化，保留时间随之变化很明显

作者: lvmaomao 时间: 2011-4-29 17:16

40%四丁基氢氧化铵是离子对试剂，需要平衡的时间较长，再者样品处理是否完全一致？是否一个用流动相，一个用水

作者: emuchhh 时间: 2011-4-29 17:16

柱温问影响这么大？

作者: syc840313 时间: 2011-4-30 11:13

嗯，个人觉得是对pH特别敏感的缘故

作者: DragonsABC 时间: 2011-4-30 11:13

你尝试一下用磷酸调PH 而不是甲酸我遇到过这种情况甲酸流动相咪好条件后过两天突然保留时间由5分跑到10分怎么调节比例他的保留时间就是不动苦恼了好一阵换成磷酸就没事了这是我的情况不知道你怎么样试试吧

作者: maoguoqiang 时间: 2011-4-30 11:13

变化太大了吧
柱子饱和需要时间比较长的！

作者: 维拉2010 时间: 2011-5-3 08:34 标题: 谢谢大家的热心帮助

1 柱温一直是室温这几天的温度变化也不大

2 溶解样品的试剂是水，样品处理是一致的。难道跟这个有关系？

谢谢不吝赐教

[ 本帖最后由维拉2010 于 2011-5-3 08:37 编辑 ]

作者: 维拉2010 时间: 2011-5-3 08:37 标题: 回复 #12 DragonsABC 的帖子

非常感谢我会试试的谢谢

作者: 维拉2010 时间: 2011-5-3 08:40 标题: 回复 #3 amelican_beauty 的帖子

非常感谢，谢谢您的建议

作者: 维拉2010 时间: 2011-5-3 08:43 标题: 回复 #6 aasle 的帖子

您好那请问我第三天在同一天之内配三次流动相都是在3分钟怎么解释

难道三次都配错了

敢问您老入行多久了

不过有没有能力好像跟入行时间不成正比吧

作者: 维拉2010 时间: 2011-5-10 09:57 标题: 非常感谢大家问题终于解决了

另外换了一根新色谱柱，问题完全没有了

保留时间稳定

真诡异

在此再次感谢大家的帮助

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