1)如何在基因组测序没有完成的情况下利用质谱进行蛋白质鉴定?(目前的手段:De novo sequencing, sequence similarity search, and MS data combined with raw genome analysis);
2) 如何利用质谱进行有效而简便的肽末端测序(N-end and C-end)?要是能直接进行蛋白质末端测序更好?(估计很难,目前的质谱对测大分子量的蛋白其质量精确度和分辨率是个问题,再加上同位素干扰,实在是很难)
3)怎样有效的进行翻译后修饰研究?(磷酸化,糖基化,甲基化,乙酰化,泛素化等等等,太多了,而且不同的PTM其使用的富集方法、分离纯化、衍生及鉴定方法也各不相同)
4)在定量蛋白质组学中,怎样选用合适的稳定同位素进行标记,其标记效率和重复性怎样控制?
5)除了有效利用常用软件的功能外,怎样有效的消除质谱鉴定的假阳性和假阴性?(手工检查很重要,但要求有经验的选手)
6)怎样充分利用网络资源和相关的生物信息学软件?(要是能根据自己的需要编写软件更好)
7)以上只是粗浅的观点,望高手指点,谢谢!作者: longcz 时间: 2007-7-17 13:49
呵呵谈点粗浅的看法:
1)如何在基因组测序没有完成的情况下利用质谱进行蛋白质鉴定?
现在最常用和简单的做法是先和已有的公共数据库如NCBInr进行比对,或者和该物种的EST库比对,期望有同源的部分肽段匹配上,但效率不高.
今年刚在science发表的一篇文章可以给我们提供一点新思路:
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Science 13 April 2007:
Vol. 316. no. 5822, pp. 280 - 285
DOI: 10.1126/science.1137614
Protein Sequences from Mastodon and Tyrannosaurus Rex Revealed by Mass Spectrometry