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标题: 关于蛋白质组学深入研究的几个难点(抛砖引玉) [打印本页]

作者: robertcams    时间: 2007-7-17 13:47     标题: 关于蛋白质组学深入研究的几个难点(抛砖引玉)

目前,为了使以质谱为基础的蛋白质组学研究更加深入,除了尽量使用高质量精确度、高分辨率的质谱仪外,还应该关注几个难点:

1)如何在基因组测序没有完成的情况下利用质谱进行蛋白质鉴定?(目前的手段:De novo sequencing, sequence similarity search, and MS data combined with raw genome analysis);
2) 如何利用质谱进行有效而简便的肽末端测序(N-end and C-end)?要是能直接进行蛋白质末端测序更好?(估计很难,目前的质谱对测大分子量的蛋白其质量精确度和分辨率是个问题,再加上同位素干扰,实在是很难)
3)怎样有效的进行翻译后修饰研究?(磷酸化,糖基化,甲基化,乙酰化,泛素化等等等,太多了,而且不同的PTM其使用的富集方法、分离纯化、衍生及鉴定方法也各不相同)
4)在定量蛋白质组学中,怎样选用合适的稳定同位素进行标记,其标记效率和重复性怎样控制?
5)除了有效利用常用软件的功能外,怎样有效的消除质谱鉴定的假阳性和假阴性?(手工检查很重要,但要求有经验的选手)
6)怎样充分利用网络资源和相关的生物信息学软件?(要是能根据自己的需要编写软件更好)
7)以上只是粗浅的观点,望高手指点,谢谢!
作者: longcz    时间: 2007-7-17 13:49

呵呵谈点粗浅的看法:
1)如何在基因组测序没有完成的情况下利用质谱进行蛋白质鉴定?
现在最常用和简单的做法是先和已有的公共数据库如NCBInr进行比对,或者和该物种的EST库比对,期望有同源的部分肽段匹配上,但效率不高.
今年刚在science发表的一篇文章可以给我们提供一点新思路:
——————————————————————————————————————————
Science 13 April 2007:
Vol. 316. no. 5822, pp. 280 - 285
DOI: 10.1126/science.1137614

Protein Sequences from Mastodon and Tyrannosaurus Rex Revealed by Mass Spectrometry

这篇文章用质谱测定了6800万年前霸王龙化石中的胶原蛋白部分序列,方法很巧妙,恐龙基因组当然是没有测序完成的,呵呵,也很科幻:)有兴趣可以看看原文。

2) 如何利用质谱进行有效而简便的肽末端测序(N-end and C-end)?要是能直接进行蛋白质末端测序更好?
有日本人用MALDI-TOF干过这个工作,具体方法好像是先在N-term加个带生物素的标签,然后酶解该蛋白,最后富集N-term的多肽做二级质谱来测定序列,比起Edman降解当然是灵敏快速多了,但还是有很多问题。
3)怎样有效的进行翻译后修饰研究?(磷酸化,糖基化,甲基化,乙酰化,泛素化等等等,太多了,而且不同的PTM其使用的富集方法、分离纯化、衍生及鉴定方法也各不相同)
呵呵,这个问题绝对是难点中的难点,也是蛋白组学发展的方向,一两句说不清楚啊……
4)在定量蛋白质组学中,怎样选用合适的稳定同位素进行标记,其标记效率和重复性怎样控制?
现在有iTRAQ,SILAC,O18,N15等技术,小弟倒是都做过,感觉还是N15的标记效率和重复性比较可靠点点……有兴趣可以单独讨论。
5)除了有效利用常用软件的功能外,怎样有效的消除质谱鉴定的假阳性和假阴性?
假阳性偶都一张一张的看啊,呵呵,假阳性基本有经验了一眼就可以看出来的……效率和准确度绝对比软件高,呵呵,软件是死的,人是活的。
假阴性就要麻烦一点了,因为很多谱图是在数据转化过程中(如中心化)丢掉了,几乎不可能找回来的。现在解决方法就是同一个样品单独跑三次,把三次的结果合并,可以部分解决假阴性问题。
6)怎样充分利用网络资源和相关的生物信息学软件?(要是能根据自己的需要编写软件更好)
现在有很多质谱软件平台。大家都可以去测试和编写,改进软件,比如做蛋白组学定量的非常好一个软件MSQuant就是免费公开的,有Development version ,cuturl('http://msquant.sourceforge.net/')你改我改,大家改,呵呵
众人拾柴火焰高啊……
作者: lily    时间: 2007-7-17 13:52


真是大家呀!
作者: firefox    时间: 2007-7-17 14:51

二楼的,你能不能每次都把原文打个包RAR,上传上来?或者给个下载的链接?

另,偶也赞同:
假阳性偶都一张一张的看啊,呵呵,假阳性基本有经验了一眼就可以看出来的……效率和准确度绝对比软件高,呵呵,软件是死的,人是活的。
假阴性就要麻烦一点了,因为很多谱图是在数据转化过程中(如中心化)丢掉了,几乎不可能找回来的。现在解决方法就是同一个样品单独跑三次,把三次的结果合并,可以部分解决假阴性问题。

作者: longcz    时间: 2007-7-17 15:02

楼上的,你要的文章在附件里,呵呵
霸王龙和鸡

[ 本帖最后由 longcz 于 2007-7-17 15:05 编辑 ]
作者: longcz    时间: 2007-7-17 15:12

这是小日本用MALDI做测定蛋白N端序列的工作:)
偶个人认为方法太华丽,不太实用,不喜欢,仅供参考……

质谱测定蛋白N端序列
作者: pharmasy1    时间: 2007-7-17 15:15


楼上几位大家,辛苦了。学习ing




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