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标题: 【讨论帖】制备色谱技术与操作 [打印本页]

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:31 标题: 【讨论帖】制备色谱技术与操作

我对制备色谱方面的一些主要问题进行了简单总结，请大家踊跃讨论，我尽力回答大家~！

[ 本帖最后由 ns5fan 于 2015-4-21 15:32 编辑 ]

作者: hyuu 时间: 2015-4-21 15:37

制备色谱到底是什么？请介绍一下制备色谱？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:38

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原帖由 hyuu 于 2015-4-21 15:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
制备色谱到底是什么？请介绍一下制备色谱？

有些搞分析色谱的朋友，对制备色谱这个名词比较陌生。其实，在化学化工医药等广泛采用的层析法以及薄层色谱就是最为典型的制备色谱。下面对制备色谱中的一些常用概念做一下介绍。
（1）分析色谱的目的，是分析出混合物中一个（或者几个）纯物质的含量。制备色谱的目的，是从混合物中得到纯物质。
为了加快分离的时间与提高分离的效率，制备色谱的的进样品量很大，导致制备色谱柱子的分离负荷的相应加大，也就必须加大色谱柱填料，增大制备色谱的直径和长度，使用的相对多的流动相。
然而，当色谱柱上样品负载加大的时候，往往导致柱效急剧下降而得不到纯的产品。制备色谱，要解决容量与柱子效果之间的矛盾，对重现性也要考虑。从经济上来说。制备色谱要争取少用填料，少用溶剂，要尽可能多的得到产品。
（2）样品的前处理：
制备色谱柱子由于处理的样品多，比分析柱子更容易受污染，所以，必要的前处理就显得非常的必要。萃取、过滤、结晶、固相萃取等简单的分离方法，如果用得上，而且还不是很麻烦，就要尽可能多的采用以去掉杂质。
（3）制备色谱柱的材质及其特点下面介绍一下，制备色谱柱常用的材质及其特点。
各种规格的玻璃柱子在实验室里头很容易得到，而且价格低廉，但玻璃柱子致命的弱点是它能承受的压力很小，且非常容易破碎。当由于压力太小而导致流动相流速很慢的时候，高位液面或加高压空气（或者氮气）的采用是一个简单的解决办法。在底下加真空，也能在一定程度上解决这个问题。
不锈钢柱子具有良好的耐腐蚀、抗压力性能，但其价格相对很贵。如果，只有很小的分离任务且经费也允许，市面上直径为1cm的小型制备柱就是首选。
有机玻璃柱子也能抗压力耐腐蚀，相对不锈钢柱子而言，它是半透明的，可以看到液体的运行状态，对有色的物质其特点就更为突出。
（4）固定相的选择硅胶、键合固定相（如C18）、离子交换树脂、聚酰胺、氧化铝、凝胶等都可以作为色谱柱的填料。有不少文献报道，对填料可以进行一下处理提高了分离效果，如，对硅胶进行的硝酸银（或缓冲液）处理。
（5）装柱方法的选择根据固定相颗粒度和柱子的尺寸，采用不同的装柱方法，往往装填越好分离效果越好。装柱效果跟填料的颗粒度关系很大，颗粒度的减少会导致装柱的难度。一般来说，颗粒直径小于20－30um的固定相采用湿法装填。所谓“敲击－装填”技术适用于颗粒直径大于25um的固定相。湿法的目的是迫使相对稀松的固定相悬浆以高速装入色谱柱子，从而减少空隙的形成。然而，当柱直径大于20mm，所加压力为30－40bar时，高压悬浆装填技术就变得十分复杂。为将小颗粒固定相装入更大得制备型色谱柱，可采用柱长压缩技术。这种方法，先将固定相悬浆（或偶尔是干填充物）装入柱中加压，利用物理方法将其压紧。压紧的方法有两种：径向压缩和轴向压缩。湿法装柱需要一定的设备，在柱子填完后，应用有柱效的测量，对柱效低的柱子应该重填。
（6）流动相的选择除了和分析色谱同样的考虑外，在选用流动相时，要考虑色谱分离后面加有旋转蒸发等二次分离操作。一般来说，不宜采用高毒性溶剂，对多元溶剂要尽可能的少用。
如果产品中含有大量溶剂，溶剂的纯度也要考虑在其中。
（7）加样的方法可以采用以下方法之一进样。－用注射器进样－用旋转阀进样－通过六通阀进样－通过主泵进样－通过辅泵进样－固体上样
（8）泵的选用生产制备色谱泵的厂商很多。根据有无脉冲、能承受的最大压力、控制的精度、售后服务等来选择泵。
（9）检测器的选用一般的分析池的最大允许流速仅为5 mL/min 或者10mL/min。而专门的制备池的最大允许流速可为150mL/min。有时，采用旁路分离管，将少量流体导入分析池进行检测，是一个不错的办法，但其浓度的误差会相对较大。
（10）组分保留时间的估计用分析柱子在同等色谱条件下（同样的固定相和流动相）测定保留时间后，按照单一组分的线流速（不是体积流速）一定，通过计算可以知道组分的大致保留时间区域。
分析谱图的峰形状，对确定保留时间也有很大的参考价值。
（11）产品的收集手工馏分收集费时费力，自动馏分收集器有很大的方便。许多实验室和工厂都采用了馏分收集器。
（12）超载、边缘切割、中心切割、放大技术与非线性效用
在制备色谱中，因为没有必要达到分析色谱那样的分离度，可以在一定范围内大大加大进样的浓度和体积。在做分离的时候，也有一些分析色谱的时候，不能用到的技巧。因为篇幅关系，不在这里叙述。
（13）柱转换技术通过接头或者阀门，实现柱子的简单延长，或者比较方便地实现对其中一个（或几个）组分的精制。
（14）比较新的制备色谱技术模拟移动床可以连续进样，并可以利用边缘切割效用，而且采用了柱切换技术，能更好的利用溶剂和填料，已经应用于工业化生产。其理论和技术也日益完善。
迎头色谱、超临界流体色谱、逆流色谱环形色谱、气相制备色谱等在科研和工业生产中也得到了应用。

作者: dior 时间: 2015-4-21 15:39

我想购买waters600用于分析和制备，对于其配备有什么好的建议。

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:39

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原帖由 dior 于 2015-4-21 15:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我想购买waters600用于分析和制备，对于其配备有什么好的建议。

可以配一个PDA，另外加一个示差折光410，另外买几根制备柱就可以了。
waters600的流速最大为20mL/min，一般可以配20mm ID的制备柱，一次分离10-100mg的样品，如果样品量更大，可以通过配件扩展到45mL/min，使用30mm ID的制备柱。另外为了保证馏分收集的准确性，最好配上Fraction II 馏分收集器。
如果样品数量很大，可以配2767 sample manager和ZQ MS, 同时做自动进样并通过MS或UV信号自动收集馏分。这样可以过夜自动运行。最大通量每天可以处理100-200个样品。

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:39

如何用制备色谱柱制备低含量的杂质？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:40

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如何用制备色谱柱制备低含量的杂质？

制备色谱柱为Zorbax SB-C18 9.4*250mm及gilson馏分收集器，色谱仪为Agilent 1100或LC-6A。想用其制备面积归一化法含量为0.05%左右的杂质，初步提纯后用高分辨的LC-MS进行定性分析。如何设定色谱条件，如流量，进样量，样品的浓度，切割点的设置，是否要浓缩，要求将95%以上的主峰切除。（主峰后有二个杂质靠得很近。）

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:40

1 制备用的流动相最好等级高一点，否则流动相中的杂质会影响LC-MS分析。
2使用馏分收集器时，延迟体积一定要计算精确，检测器的响应时间设到最小，否则都会影响收集的纯度和回收率。制备柱的流速一般与直径的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速为1mL/min，9.4mm制备柱用1*（9.4/4.6）2, 大约为4ml/min。进样量设到几个mg应该基本没有过载。进样样品浓度越高越好。假如进样10mg，理论计算0.05%的杂质大约只有5ug，显然浓度太低，最好是多做几次，合并馏分然后浓缩后做LC-MS分析。

作者: feiya 时间: 2015-4-21 15:41

我想用hplc分离一个简单的多肽,我应该选用什么样的流动相,还有他的梯度,还有选用什么样的柱子

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:41

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原帖由 feiya 于 2015-4-21 15:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我想用hplc分离一个简单的多肽,我应该选用什么样的流动相,还有他的梯度,还有选用什么样的柱子

RP-HPLC,C18柱可以制备很少量的肽。如果用RP-HPLC，首先应该用同类型的分析柱子分析一下多肽含多少杂质，设置缓缓的梯度的分离样品，在根据分析柱子跑出的峰形，逐渐放大纯化的方法。

作者: 3N4G 时间: 2015-4-21 15:41

TFA在缓冲液中是不是只起到调节pH的作用呢？TFA的浓度越高基线的漂移越厉害，那是不是说它的浓度在缓冲液pH允许的情况下越低越好呢？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:42

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原帖由 3N4G 于 2015-4-21 15:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
TFA在缓冲液中是不是只起到调节pH的作用呢？TFA的浓度越高基线的漂移越厉害，那是不是说它的浓度在缓冲液pH允许的情况下越低越好呢？

（1）TFA起到类似离子对的作用，一般浓度在0.05-0.1%，过高的浓度，会使溶液偏酸，长时间使用可能影响柱子寿命。
（2）同时TFA可以抑制硅胶表面硅醇基，改善碱性化合物的峰型。有时0.1%TFA分离不好的话。可以考虑加大浓度到0.2%。但要注意用完后及时冲洗色谱柱。
（3）走梯度时，因为走成基线漂移，但对制备的影响不大。

作者: okhaha 时间: 2015-4-21 15:43

样品如果溶解度太低如何上制备HPLC？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:44

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原帖由 okhaha 于 2015-4-21 15:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
样品如果溶解度太低如何上制备HPLC？

（1）了解一下样品的性质,根据其酸碱性,极性等性质，通过调节溶剂的pH值等, 以达到较好的溶解度
（2）样品可能某种晶型难溶，这样可以加入其他溶剂（如丙酮等）以助溶。
（3）不是一定要用流动相来溶解样品，对溶解度差的样品，可以选择甲醇，THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO，对一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留，不会造成干扰。而且DMSO的洗脱能力很弱，一般不会影响峰型。
（4）可以固体上样。

作者: langlang 时间: 2015-4-21 15:44

多肽的分离制备, 如何上量？如何增大分离度?

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:45

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原帖由 langlang 于 2015-4-21 15:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
多肽的分离制备, 如何上量？如何增大分离度?

反相HPLC应当是很好的分离小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流动相，看保留如何，若无保留，建议改用其他色谱方法进行分离。
关于多肽的分离，首先要知道它的分子量大小，然后选择不同类型的填料，如孔径的大小。我们先在分析柱（4.6MM内径）上做一下实验,找到最大的分离度,这一过程的难度是最大的,要不断地改变流动相和固定相,然后再线性或非线性放大到制备,放大的倍数按分析柱的实验结果。分离后可以通过冷冻干燥得到固体。
还可以考虑离子交换来分离多肽。

作者: babybabe 时间: 2015-4-21 15:45

做柱层析时（国产大孔吸附树脂），怎么才能把洗脱液中的树脂残留物处理干净？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:45

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原帖由 babybabe 于 2015-4-21 15:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
做柱层析时（国产大孔吸附树脂），怎么才能把洗脱液中的树脂残留物处理干净？

大孔吸附树脂在上使用前，一般需要进行处理，方法包括用色谱纯的甲醇或乙睛洗到没有吸收；或树脂用乙醇浸泡2天，丙酮浸泡2天，然后用常规的酸，碱洗。再用丙酮回流二小时就可以用了。

作者: qqq111 时间: 2015-4-21 15:46

由分析型液相转为制备型液相，其色谱系统需作多大调整？是否可以按照柱体积折算只改变流速？其上样量多大为宜？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:46

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原帖由 qqq111 于 2015-4-21 15:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
由分析型液相转为制备型液相，其色谱系统需作多大调整？是否可以按照柱体积折算只改变流速？其上样量多大为宜？

（1）泵要换，流量要加大，压力可不变或减少；流通池要换体积更大的。
（2）整个系统的管路要更换更粗的，否则压力太大,而且特别容易发生堵塞。对流通池后的管路，最好增加反压调节器，否则管路太短的话，反压小会导致流通池气泡，管路长的话会导致峰展宽。
（3）检测器的响应时间和峰宽要设置合适，否则会导致收集时延迟体积的计算不准
(4)上样量主要根据柱子的大小、样品的浓度、制备是否根据分析条件放大（例如制备柱是否还用分析用填料）；一般上样量与柱子直径的平方以及长度成正比。

作者: babybabe 时间: 2015-4-21 15:46

流动相中含有盐时，收集液该如何除盐？选用挥发性酸，碱或盐（如醋酸铵）是否会在挥干溶剂或冻干过程中直接除去？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:46

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原帖由 babybabe 于 2015-4-21 15:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
流动相中含有盐时，收集液该如何除盐？选用挥发性酸，碱或盐（如醋酸铵）是否会在挥干溶剂或冻干过程中直接除去？

一般可以采用离子吸附的办法去掉（可以参考离子吸附有关技术）。但也是稍微麻烦的事情，最好，不加加酸碱盐，如果要加的话最好，要加挥发性的或者对产品或者检测没有干扰的。
可用G25脱盐，它是安马西亚出的一种葡聚糖凝胶。交联度大孔径小,对小分子的无机盐保留较大,而对分子量较大的有机物没有保留从而可以将盐份脱除。另外采用挥发性的酸，碱时，一般会在干燥过程中直接除去，但如果样品也有酸碱性，可能会与这些挥发性酸碱形成一定比例的盐。

作者: zzzz 时间: 2015-4-21 15:47

制备型柱子柱压上升柱效下降怎么办？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:47

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原帖由 zzzz 于 2015-4-21 15:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
制备型柱子柱压上升柱效下降怎么办？

对高价值的制备柱来讲，延长柱子寿命是很重要的。一般要注意保护柱子，一般来说，制备柱子一般需要保护柱配套。
下面是可能堵塞柱子的原因：
（1）如果您所分离的样品中杂质较多而您在上样前没有经过过滤（0.45微米），一些颗粒性杂质会积聚在柱头造成柱压升高，
（2）也有可能是因为您所使用的流动向中含有缓冲盐的原因，结晶或发生化学变化而堵塞。可以把柱子冲一冲。
（3）流动相是否符合液相色谱的要求？是否过滤处理？
。柱子再生处理办法如下：
（1）依次用水，甲醇，四氢呋喃，氯仿，甲醇来冲洗柱子，每种溶剂5-10个柱体积。
（2）如果效果不明显，将柱子按以上顺序反冲，一般将大大降低柱子效果，不到不要没有办法才采用。
（3）如果效果还是不好，就需要打开色谱柱，超声波清洗筛片（这样也会使柱子效果下降）。必要时挖掉色谱柱内受污染部位，填入新的填料，还可用3个月。（填的时候小心，别重新污染柱子）

作者: zhezhe 时间: 2015-4-21 15:47

制备柱柱跑干了影响柱效吗?

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:48

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原帖由 zhezhe 于 2015-4-21 15:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
制备柱柱跑干了影响柱效吗?

如果时间不长的话,可以用流动相多冲几个小时.柱效不一定变化很大.如果时间太久,柱效一定变低. 具体造成影响有多大，要靠柱效测定来确定，而不是干柱时间的长短。如果跑干了，对于PUMP的影响可能还大些，所以最好先把管路中的空气抽走再说。
一般说来，制备柱子跑干，属于操作失当。柱子闲置不用时，最好冲入甲醇或其他有机溶剂，一定要把两头堵住密封，这样保留的时间会较长。

作者: shenkunjie 时间: 2015-4-21 15:48

分析HPLC如何放大到制备型HPLC

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:49

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原帖由 shenkunjie 于 2015-4-21 15:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
分析HPLC如何放大到制备型HPLC

在分析液相中色谱柱的典型进样量是微克级，甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1:10000。进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积（小于1:100）。在这种条件下，会达到很好的分离效果，峰形尖锐并且很对称。
分析系统线形放大到制备型HPLC意味着使用直径更大的制备柱、更高的流速和根据色谱柱的长度增加进样量并保持样品浓度不变。峰形仍会保持尖锐而对称。这种方法需要大型的色谱柱和大量的溶剂来分离较少的样品，但这种方法从经济上一般不合适。
在制备液相中，最大的区别就是超量进样。制备的分离峰形一般不可能仍会保持尖锐而对称，分析和制备是不同的概念。制备的首要概念是在达到纯化的基础上，降低成本，加快时间（提高效率）。一般说来，纯化的成本要高于生产粗产品的成本，所以，可以加大上样量，甚至过载，出现平头峰，而收集只集中在峰的一小部分，以来保证纯度，主要为了节省流动相和提高设备利用率。

作者: mamamiya 时间: 2015-4-21 15:49

制备纯化蛋白、多肽，耗用流动相惊人，请问这些用过的流动相（乙腈，甲醇）可以重蒸使用吗？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:49

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原帖由 mamamiya 于 2015-4-21 15:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
制备纯化蛋白、多肽，耗用流动相惊人，请问这些用过的流动相（乙腈，甲醇）可以重蒸使用吗？

流动相用一般减压方法重蒸后，往往会形成有机溶剂和水会共沸，另外，由于减压蒸馏属于单次平衡，往往得不到100%纯度的溶剂，这会使溶剂的配置有一定困难，从而使色谱的重现性和分离度会发生一定的变化。如果要求不是很高的话，一般可以分析重蒸后馏分中的各组分含量，计算后再使用。
要通过重蒸得到纯物质是极其困难的，必须采用精馏塔多级蒸发，单就设备投资和能耗来讲，实验室规模或生产规模的废液回收处理已经是得不偿失。其实，我们没有必要得到纯的物质。

作者: finger 时间: 2015-4-21 15:50

反相色谱分离纯化后，怎样除去流动相产品中的TFA和乙腈或其他杂质？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:50

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原帖由 finger 于 2015-4-21 15:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
反相色谱分离纯化后，怎样除去流动相产品中的TFA和乙腈或其他杂质？

TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除，国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤，其中，离子交换层析效果比较好，还可以起到浓缩样品的作用。
首先，冻干的办法应该可以几乎彻底地除去TFA和乙腈，药物实验前最好先检测一下冻干品中的残留量，只要不超过允许范围，这种办法是最最简单、有效的。
其次，如果你的药物的分装量不大的话(<100ug)，建议你用离子交换层析，最好装一个小一点儿的柱子，让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/ml以上，稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛，考虑稀释，最好也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话，可能会形成TFA盐，这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗，然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的盐酸，再干燥后形成盐酸盐。

作者: toy 时间: 2015-4-21 15:50

同一种填料的分析柱、制备柱按线形放大公式套，分离度会不会变化？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:51

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原帖由 toy 于 2015-4-21 15:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
同一种填料的分析柱、制备柱按线形放大公式套，分离度会不会变化？

一般会有一定的变化，原因有以下几点
（1）制备柱的装填是否均匀，如不均匀则可能产生涡流扩散使各个组分的经过通道的直径不同、阻力不一样，停留时间不同，色谱峰可能变宽。
（2）如果样品在流动相中溶解度小，在制备色谱上会有不同的峰展宽。
（3）如果样品在分析柱上有展宽或拖尾的现象，放大到制备柱上后峰的展宽和拖尾经常会非常严重，导致分离失败。

作者: @木木@ 时间: 2015-4-21 15:51

制备色谱柱如何测柱效？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:51

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原帖由 @木木@ 于 2015-4-21 15:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
制备色谱柱如何测柱效？

可以选择几种物质，苯，甲苯，萘、蒽等的衍生物上柱，流动相一般用65-80%的甲醇/水，测定后根据保留时间计算塔板数。由于制备色谱的管路死体积一般比较大，很难得到和供应商相同的柱效。建议在制备柱开始使用时在自己的色谱上测一下柱效，然后定期检测柱效进行以进行比较。

作者: one 时间: 2015-4-21 15:52

反相色谱分离后，如何快速从流动相中得到产品？

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 15:53

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原帖由 one 于 2015-4-21 15:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
反相色谱分离后，如何快速从流动相中得到产品？

可以考虑先在低温下，减压旋蒸除去其中的有机溶剂，然后用萃取的方法（如yi醚、氯仿萃取等）把产品萃取出来，然后再低温再旋蒸，这样，就可以不将温度升得很高而得到产品。
如果要直接蒸掉流动相，水泵的真空度要注意（要检查气密性），否则蒸水会很慢。一般比较好的泵在60-70度即可蒸掉水，如果泵的真空度不好，可能需要80-90度才行，这样容易暴沸导致样品损失。另为，温度太高可能引起物质变性。
参考书目：略/ ：
需要《制备色谱在天然产物中的应用》的朋友，可以从下面的email下载。。。
wangcailiu2@163.com 密码：1234567

作者: eor 时间: 2015-4-21 16:02

真的是说得太简单了一点。你说的好多参数和我的都不一样，我的那些参数比你所说的大多了，比如流速图片点击可在新窗口打开查看

作者: hyuu 时间: 2015-4-21 16:02

请问卷烟厂的制备液相怎样配置较好？我选用美国VARIAN的制备液相

作者: txwuyan 时间: 2015-4-21 16:03

请问，有多少人用制备色谱来得到中药中主药的纯物质？

作者: 假小子 时间: 2015-4-21 16:03

问：做柱层析时（国产大孔吸附树脂），怎么才能把洗脱液中的树脂残留物处理干净？
答：
大孔吸附树脂在上使用前，一般需要进行处理，方法包括用色谱纯的甲醇或乙睛洗到没有吸收；或树脂用乙醇浸泡2天，丙酮浸泡2天，然后用常规的酸，碱洗。再用丙酮回流二小时就可以用了。

关于这一点,我选择方案:色谱纯的甲醇洗到没有吸收--再用丙酮回流二小时. 然后再使用大孔吸附树脂柱,是不是最后的洗脱液就不需要再考虑会有大孔吸附树脂残留物的处理问题啦?!(能保证洗脱液的纯吗?)

作者: 碎星星 时间: 2015-4-21 16:04

反相的柱子如果压力变高能直接用水冲吗
RPC的柱子可以用水冲，但我觉得HPLC的C18比较悬

作者: 牛顿 时间: 2015-4-21 16:04

天！我打算选的设备是工业用的，柱子都达到了50*80cm，那个厂家的设备能使用？

作者: 端口 时间: 2015-4-21 16:05

本人是做蛋白质纯化的，在大制备柱纯化方面有一点经验。我用过法国的Prochrom LC50,LC200,LC300。但国内使用大的液相制备柱的太少了，希望以后能发展起来。

作者: 端口 时间: 2015-4-21 16:05

这样的制备柱不算大啊！要是想用好一点的可以选用法国的Prochrom的，用起来很顺手的！

作者: fox_79 时间: 2015-4-21 16:06

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原帖由 碎星星 于 2015-4-21 16:04 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
反相的柱子如果压力变高能直接用水冲吗
RPC的柱子可以用水冲，但我觉得HPLC的C18比较悬

反相的柱子如果压力变高应该先用低浓度的醇溶液缓慢冲洗就行了

作者: 9妖9 时间: 2015-4-21 16:06

请问一下，一般制备色谱柱装样量多大，就是最多能装多少样品

作者: 9妖9 时间: 2015-4-21 16:06

QUOTE:

原帖由牛顿于 2015-4-21 16:04 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
天！我打算选的设备是工业用的，柱子都达到了50*80cm，那个厂家的设备能使用？

80cm!你是不是写错了,这得要多少银子?

作者: ns5fan 时间: 2015-4-21 16:07

我以前的实验室有一个50cm的！：）
因为这样的柱子压力不是很大，所以，柱子不是很贵，填料要点老本。但10000元/kg，国产的，也能承受呀！

作者: 酒肉和尚 时间: 2015-4-21 16:07

比进口的填料便宜多了！但是效果不知如何？

作者: wzqzy 时间: 2015-4-21 16:08

我们的Fuji 填料有些并不比国产的贵多少, 关于性能你有兴趣的话, 我给你样品, 你自己测试后下结论.你也可以自己去询问, 在你认识的同行中必有我们的用户. 有兴趣请查一下邮箱,有联系方法.

作者: KGZ564 时间: 2015-4-21 16:08

你好，能否来参观一下你们的制备色谱仪呢？

作者: 仙客来 时间: 2015-4-21 16:08

请问怎么个固体进样法？我以前根本就没有听说过！

作者: eor 时间: 2015-4-21 16:09

硅胶柱层析时，填冲柱高，硅胶量，上样量有什么比例要求？

作者: 科技化 时间: 2015-4-21 16:09

请问各位有谁能帮忙告诉我，如果柱子的进样量在0.2g左右，可以进0.6g吗？这样的话不同的进样量是不是出峰时间也不一样了啊？
各位前辈请多帮忙，我还是新手

作者: ujne 时间: 2015-4-21 16:09

请问各位知道国内哪里有制备型气相色谱吗？

作者: SO2 时间: 2015-4-21 16:10

我是2000年就开始做制备色谱了，仪器是WATERS的，还比较好使，但我做样的频率不是很大。
我觉得流动相如果按照固定的公式来从小柱子扩大到制备柱的话，好像不太好使，我一般都是参考一下，在制备色谱上还要摸索。

作者: F22 时间: 2015-4-21 16:10

楼主好，我是多肽纯化的新手，请问您对于流动相的选择有什么心得啊？（特别是水相中的盐的选择问题）谢谢！！！

作者: gmt 时间: 2015-4-21 16:10

做HPLC时吸收峰为负值是否正常？为什么？

作者: 天下虫子 时间: 2015-4-21 16:11

尽量调到正直上来，负值是不准确的

作者: 土壤 时间: 2015-4-21 16:11

本人预分离一种表面活性剂，想用色谱试试，可对色谱了解不多，望各位前辈多多指教谢谢

作者: DCS 时间: 2015-4-21 16:11

如果是缓冲液里有盐析出，可用5％的甲醇冲洗

作者: ztonyc 时间: 2015-4-21 16:12

制备色谱的原理是什么呀，跟高效液相色谱是不是一样。我刚学，不太明白?图片点击可在新窗口打开查看图片点击可在新窗口打开查看

作者: 蛋白之安基 时间: 2015-4-21 16:12

请问分离泛醌应该用什么流动相比较好？

作者: 蛋白之安基 时间: 2015-4-21 16:13

哪位高手能解答我的疑问：
我在分离提取样品（甲基萘醌）的时候，由于样品比较少，离心的时候残渣层很容易和下层提取液混一起，请问可不可以在离心后采用过滤的方法？如果过滤，提取物会不会残留在滤纸上？

作者: 乐哥 时间: 2015-4-21 16:13

我刚接触色谱
关于多肽的提纯
想详细了解这方面的问题
希望前辈多多帮忙

作者: yizhi 时间: 2015-4-21 16:13

选NOVASEP柱试试！

作者: 1221 时间: 2015-4-21 16:14

请问制备色谱的原理是什么？

作者: feiya 时间: 2015-4-21 16:14

个人认为只是层析分离而已。只要产品和杂质能够分离开即可。

作者: rfv 时间: 2015-4-21 16:14

我觉得很些根本是所问非所答，比如说[12 问：分析HPLC如何放大到制备型HPLC]。

作者: qhyu 时间: 2015-4-21 16:15

我想问问,谁知道多肽纯化后经过冻干后经常出现没有东西,特别是短肽,是因为TFA没除去干净的影响吗?请多多指教!

作者: ldh 时间: 2015-4-21 16:15

楼主你好,你的那本书我刚刚下载了,非常感谢!我有个问题想请教一下:制备硅胶的载样量都受那些因素的影响呢?为什么同样的柱子,有的载样量大,有的又很小呢?

作者: ending 时间: 2015-4-21 16:16

请问酒厂的制备色谱怎样配置较好啊？？？

作者: woshi 时间: 2015-4-21 16:16

问，制备色谱是不是可以解决中药指标成分难获得的问题啊？

作者: dior 时间: 2015-4-21 16:17

谢谢楼主呀，本人从事细胞因子的生产，多多交流呀

作者: ffaa 时间: 2015-4-21 16:18

谢谢分享！
我是制备色谱方向的，有很多时候，实验具体操作还是要具体实验具体分析的。

作者: newway 时间: 2015-4-21 16:18

能不能以国际先进的制备液相为例举出一个例子说说具体参数

作者: jude 时间: 2015-4-21 16:18

正在做制备，但是进样量过大导致得到的样品纯度不够，约50mg每次进样还差不多

作者: remenb 时间: 2015-4-21 16:19

理论上得到很多知识，确实也存在于实际不符的，流速一般我用还是偏大一些

作者: rfv 时间: 2015-4-21 16:19

呵呵……我也是搞多肽纯化的，对于以上说法大体同意并支持，可总有些遗憾，可能版主说的太肤浅了，没有深入讲解，我并没有得到多少东西，可还是强烈支持！！！顶

作者: finger 时间: 2015-4-21 16:20

刚接触，想从分析转到制备，请问从哪可得到那本书啊？

作者: xevin 时间: 2015-4-21 16:20

我做的正丁醇萃取层的分离，就用大孔吸附树脂分段后，75%乙醇洗脱部分直接上制备液相，我的柱子是250*10mm，5um，流动相是甲醇水，上样量怎末确定啊，样品是不是浓度越大越好

作者: txwuyan 时间: 2015-4-21 16:21

小弟最近想做把工业的试剂通过精馏做成色谱纯的。不知道，那位可以指点指点啊。

作者: zhy平平 时间: 2015-4-21 16:21

我是做研发的，需要色谱分析，了解分析条件，请各位多多指教。

作者: cj_mondy 时间: 2015-4-21 16:21

谢谢啦，最近正要制备点东西，真好用的上！

作者: milkdog 时间: 2015-4-21 16:22

请问各位老师，半制备和分析是不是要在不同的仪器上？半制备柱和分析柱是不是两根柱子是不是要一样的填料？？戴安的分析柱有对应的半制备柱吗？？？
很晕呼呼的天气，晕乎乎的仪器~

作者: flyxx05 时间: 2015-4-21 16:22

呵呵大家对制备液相这么感兴趣。不好意思来做和广告，我是北京创新通恒的，我们是液相的生产厂家，制备我们在国内的老大，
如果想咨询问题可以找我，我们有专业的技术支持人员为您解答，不买设备没关系我们只是提供交流哦

作者: xue258 时间: 2015-4-21 16:23

需要仔细消化先，正好现在在做这个方面！感谢！

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