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标题: 【求助】分析短链季铵盐，用三氟乙酸离子对，.. [打印本页]

作者: 何去何从 时间: 2015-4-22 16:55 标题: 【求助】分析短链季铵盐，用三氟乙酸离子对，..

分析短链季铵盐，色谱柱WATERS XTERRA RP18，用三氟乙酸离子对试剂，加三乙胺调pH值，发现色谱柱被污染，可能是三乙胺在色谱柱上强烈吸附。
详细情况见下列图。
条件一A:乙腈  B:0.1%三氟乙酸（pH1.90）  梯度：5%A——80%A，15min
（不加三乙胺，几峰能达到分离，但峰形较宽）

条件二A:乙腈  B:0.1%三氟乙酸（pH2.2，用TEA调）  梯度：5%A——80%A，15min
（加三乙胺，想改善峰形，结果分离度变差，拖尾更严重）

条件三A:乙腈  B:0.1%三氟乙酸（pH3.3，用TEA调）  梯度：5%A——80%A，15min
（加三乙胺，想改善峰形，结果分离度变差，拖尾更严重）

条件四A:乙腈  B:0.1%三氟乙酸（pH4.5，用TEA调）  梯度：5%A——80%A，15min
（加三乙胺，想改善峰形，结果分离度变差，拖尾更严重）

然后再重复做条件一A:乙腈  B:0.1%三氟乙酸（pH1.90）  梯度：5%A——80%A，15min
发现再也重复不到原来情况。

用低流量甲醇洗柱过夜重复做条件一A:乙腈  B:0.1%三氟乙酸（pH1.90）  梯度：5%A——80%A，15min
情况还是一样。

作者: 何去何从 时间: 2015-4-22 16:55

我现在怀疑是色谱柱的问题，我换了一更新的未曾使用C8柱，色谱图还可以。

作者: langlang 时间: 2015-4-22 16:55

反相色谱柱的PH范围是2-8，是不是lz之前使用的PH过低，对柱子造成不可逆的破坏呢？先冲冲柱子，不行的话就只能换一根了

作者: dog002 时间: 2015-4-22 16:56

首先，我们明白，在反相C18色谱柱上的保留、分离，基于目标物与C18的相互作用力，这种作用力最主要的是疏水作用力。

其次，拖尾等，很大程度上是因为目标物(尤其是碱性化合物)与硅胶表面的硅醇基发生了二级反应。硅胶表面硅醇的活性，用PKa表示，约2.5左右。

那么，我们可以通过两种方式对分离差、拖尾的分析对性优化：

1、在低PH条件下，硅胶表面硅醇基没电离，活性小，减少拖尾；从您的实验不难发现这一点，不知您是否发现了，PH1.9的效果好一些，其他PH条件下(2.2、3.3、4.5等)效果差。

2、添加酸、碱等PH调节剂，使目标物呈分子状态，增强目标物与C18的作用，即，对于酸性化合物，PH小于其PKa两单位；对于碱性化合物，PH大于其PKa两单位。
短链的季铵盐，显然是一个很强的碱性化合物，季铵的PKa约10.7，此时调节PH在11左右，相信效果会好一些。

以上是个人看法，如果您需要详细材料，或者更好的解决方式，请告诉我您具体的目标物是什么？样品是什么？也可Q我845199055。

祝顺利！

作者: kewanqi2011 时间: 2015-4-22 16:57

顶楼上，流动相调节合适的PH值是王道

作者: xevin 时间: 2015-4-22 16:57

弱酸弱碱及盐之类的物质，调节pH很重要的。

作者: abc816 时间: 2015-4-22 16:58

对的，调PH值很重要，三乙胺因为难溶于水，所以还是不加为好。既然PH值低了不行，那你调高PH试试，另外4楼说调节PH在11左右不对

吧，柱子能抗得住不？

作者: woshi 时间: 2015-4-22 16:58

会不会是ph太低了

作者: dior 时间: 2015-4-22 16:58

用点缓冲盐试试

另外

在开发方法，更换流动相的时候中间最好用水/有机过渡一下

频繁的换pH，柱子可能吃不消的

作者: DNA 时间: 2015-4-22 16:59

虽然0.1%TFA的PH偏低，但WATERS XTERRA RP18能扛得住的。

还是充分清洗及平衡柱子先。

作者: eor 时间: 2015-4-22 16:59

一般的柱子用过三乙胺以后，如果后面没有在用，峰形就会很难看。
所以用三乙胺的柱子和不用的柱子分开用。

作者: bbc 时间: 2015-4-22 16:59

用Waters这个柱子应该不行吧。用Dionex公司表面活性柱应该更好

作者: dog002 时间: 2015-4-22 17:00

是的，一般反相C18柱子是承受不了偏酸偏碱的，偏酸PH在2以下，容易水解C18链；偏碱PH在8以上，容易溶解硅胶，更何况这里说到PH11。反相C18柱的PH使用范围在2-8之间，偏酸碱条件下都会影响色谱柱性能，甚至寿命，这其中的原因，我们可以再作讨论。

回到这里，因为工艺技术的革新和改进（具体是什么技术，感兴趣的，不妨多搜搜相关资料，与我分享，^_^），现在市场上不少的反相C18是能耐PH值的，这里的Xterra，还有Waters XBridge系列，另外，如Agilent Extend、Phenomenex Gemini 和NX，等，都能承受。

作者: qianqin1977 时间: 2015-4-22 17:01

柱子的问题

作者: gogo 时间: 2015-4-22 17:03

首先，我们明白，在反相C18色谱柱上的保留、分离，基于目标物与C18的相互作用力，这种作用力最主要的是疏水作用力。

其次，拖尾等，很大程度上是因为目标物(尤其是碱性化合物)与硅胶表面的硅醇基发生了二级反应。硅胶表面硅醇的活性，用PKa表示，约2.5左右。

那么，我们可以通过两种方式对分离差、拖尾的分析对性优化：

1、在低PH条件下，硅胶表面硅醇基没电离，活性小，减少拖尾；从您的实验不难发现这一点，不知您是否发现了，PH1.9的效果好一些，其他PH条件下(2.2、3.3、4.5等)效果差。

2、添加酸、碱等PH调节剂，使目标物呈分子状态，增强目标物与C18的作用，即，对于酸性化合物，PH小于其PKa两单位；对于碱性化合物，PH大于其PKa两单位。
短链的季铵盐，显然是一个很强的碱性化合物，季铵的PKa约10.7，此时调节PH在11左右，相信效果会好一些。

以上是个人看法，如果您需要详细材料，或者更好的解决方式，请告诉我您具体的目标物是什么？样品是什么？也可Q我845199055。

祝顺利！

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　　　ｐＨ调节到１１，一般的ＯＤＳ柱不太行吧？

作者: 555444 时间: 2015-4-22 17:03

用WATERS XBridge C18柱的PH值可承受范围：2-12，调节到11也可以。

作者: whitesheep 时间: 2015-4-22 17:05

每个公司都有自己不同PH范围的柱子

作者: ldh 时间: 2015-4-22 17:07

有个方法PH在1.5分离很好，用的是菲罗门的五氟苯基柱，不知能不能扛的住？

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