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标题: 求助：中药口服液质量标准制定的一些问题 [打印本页]
作者: vbbs    时间: 2011-5-9 16:26     标题: 求助：中药口服液质量标准制定的一些问题

第一次做新药，是一个中药复方口服液，主要成分中含有氢溴酸东蒗菪碱，质量标准制定如下：
5.1.1色谱条件
色谱柱：Promosil C18（250×4.6mm，5µm，博纳艾杰尔公司）；流动相：0．07mol/L磷酸钠溶液 (用磷酸调 pH值至6.0，含0.0175mol/L十二烷基硫酸钠)-乙腈 (2：1)；流速：0.8ml/min；检测波长：216nm；柱温：25℃；进样量：10ul。理论塔板数按氢溴酸东莨菪碱峰计算应不低于10000。
5.1.2 供试品和对照品溶液的制备
5.1.2.1 对照品溶液 精密称取氢溴酸东莨菪碱10.18mg，置10ml容量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）使溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含1.018mg的溶液（东莨菪碱重量=氢溴酸东莨菪碱/1.445）。
5.1.2.2 供试品溶液 精密量取本品溶液5ml，置锥形瓶中，加入2mol/L盐酸溶液30ml，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，滤过，滤渣和滤器用2mol/L盐酸溶液分数次洗涤，合并滤液和洗液，用浓氨试液调节pH值至9，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收容剂至干，残渣用0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）溶解并移至5ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。
5.1.3 阴性对照品溶液的制备 按处方比例及工艺，制备缺洋金花的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备不含洋金花的阴性样品溶液。
5.1.4 测定方法
精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10u1，分别注入液相色谱仪(自动进样仪)，测定峰面积，以外标法计算含量。
5.1.5 系统适用性试验
分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性品溶液10ul注入高效液相色谱仪，阴性对照品在氢溴酸东莨菪碱峰位置处无吸收峰，即其它成分对测定无干扰，氢溴酸东莨菪碱峰与其它组分峰基线分离良好。
5.1.6 线性试验
     精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品10.16mg，置25ml量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，分别置10ml量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）溶解并稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定，分别进样10ul，测得峰面积积分值。以对照品的浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=1.3×107C-9243.77，相关系数r：=0.9997。表明进样量在0.2032～1.2192ug范围内呈良好线性关系。
5.1.7 稳定性试验
     精密量取供试品溶液5ml，按供试品（批号：2009010501）溶液制备方法制成供试品溶液，间隔一定时间(0，4，8，12，24，48h)重复进样，每次进样10ul，测得峰面积的RSD为1.78%，表明该溶液在48小时基本稳定。
5.1.8 精密度试验
     精密吸取上述对照品溶液10ul，重复进样6次，测定东莨菪碱的峰面积，结果 RSD%为0.58%(n=6)。表明本方法精密度良好。
5.1.9 重复性试验
     精密量取供试品溶液（批号：2009010501）5ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，分别测定东莨菪碱的含量，结果RSD为1.42%(n=6)。表明本方法有较好的重复性 。
5.1.10 加样回收率试验
5.1.10.1 对照品溶液的制备 精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品约7.8mg，置100ml的容量瓶内，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）使溶解，并稀释至刻度，即得。
5.1.10.2 采用加样回收率测定方法，精密量取已知含量的样品2.5ml，精密加入上述对照品溶液2.5ml/2ml/3ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，依法测定，结果平均回收率为106.7%，RSD为1.42%。
      回收率=（测的东莨菪碱含量—样品中东莨菪碱含量）/加入东莨菪碱量

     因为是第一次作含量测定，有许多不明白之处，中药质量标制定准指导原则也说得不清不楚，许多都是按照自己理解摸索来的。
     [B]通过测定样品的平均含量为0.077mg/ml。线性试验是根据样品的平均含量，以样品的平均含量为中间值，制定的线性取样范围。[/B]
     根据加样回收中对照品加入量与样品含量之和在线性范围的原则，按照80%，100%，120%的原则加入对照品，但是结果很不理想，加样回收率超过了200%，不知道是什么方面的原因，很着急，请大家帮忙分析一下，找出有错误的地方，我马上更改。
作者: lvmaomao    时间: 2011-5-9 17:13

楼主，想问什么 用什么仪器测？问题重点也没标出来 难道是想让大家看这么大篇的文献吧？？
作者: fence-straddler    时间: 2011-5-9 17:56     标题: 回复 #1 vbbs 的帖子

回收率大了这么多！计算没有问题吧，把你的结果的原始数据和计算过程写一下~
作者: feiteng666    时间: 2011-5-9 22:57

楼主，是不是计算的问题呢
作者: 英语你我他    时间: 2011-5-9 22:57

加标200%？太高了吧？在试验过程中是不是污染了？
作者: shengfengyu    时间: 2011-5-10 09:44

楼主做新药标准的，关注下。
作者: piaoliang110mei    时间: 2011-5-10 09:45     标题: 回复 #1 vbbs 的帖子

楼主的加样回收率结果到底是什么，为什么前面有

“采用加样回收率测定方法，精密量取已知含量的样品2.5ml，精密加入上述对照品溶液2.5ml/2ml/3ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，依法测定，结果平均回收率为106.7%，RSD为1.42%。”？

与后面“根据加样回收中对照品加入量与样品含量之和在线性范围的原则，按照80%，100%，120%的原则加入对照品，但是结果很不理想，加样回收率超过了200%”矛盾呀！
作者: yueya9113    时间: 2011-5-10 09:45

看看你的计算是否有错误？加标后浓度体积变化！
作者: vbbs    时间: 2011-5-10 10:20

不好意思 ，没有说明白 ，我用的是岛津的液相机子，用面积外标法计算，测定样品含量时的公式 为 ： 样品峰面积*10.18mg*98%/对照品峰面积*5ml*10倍*1.445
对照品峰面积为12404344.5，样品峰面积为6983970.5，6922532，6949904.5，6957659.5，
6965083.5

加样回收中对照品溶液2ml/2.5ml/3ml与80%，100%，120%表述的是一个意思，家养回收率计算公式为 ：杨品峰面积*7.8mg*样品稀释倍数*98%/对照品峰面积*样品取样量*100倍 *1.445

加样对照峰面积为1425672.938，对照品加入量为2.5ml时的峰面积为
3433927.75
3418554.25
3503073.25
3477568.5
3489245.25
3473198.5
另外，我如何确定对照品取样量，才能保证样品含量测定的准确度。
作者: piaoliang110mei    时间: 2011-5-10 11:49     标题: 回复 #9 vbbs 的帖子

还是没看明白。不过我发现你的操作中存在一个问题：对照品峰面积为12404344.5，样品峰面积为6983970.5 差别有些大，对照品峰面积最好与样品峰面积差不多（个人认为要达到90%~110%），因为从你的描述来看，你用的是单点校正而不是标准曲线法，只有线性曲线过原点时对某个浓度的计算二者差别才不大。另外你如果加标回收，加标样测定出来的面积也要与对照面积大小相似，才能保证测定结果的准确，当然所有进样浓度都应该在确定的线性范围内。

再有你的200%具体计算过程贴出来，让大家看一看，我怀疑你的计算有误。
作者: PURPOSE人生    时间: 2011-5-10 11:49

做加样回收率要注意：
1.称取供试品的量应当为正常量的一半，即，如果你供试品含量测定时称样量为1g，那么在此应当取0.5g，而该样品的含量应当是已知的（可先取5批样品进样分析，带入标曲计算含量或用外标法计算，然后求出一半的含量）
2.加样的量应当是供试品中物质含量一半的80%、100%和120%
3.计算时应当是用总含量减去0.5g供试品中的含量，以此差值与实际加入量相比，求算回收率以及RSD
作者: Geochimica    时间: 2011-5-11 10:21

你的峰面积与对照的差异比较大，最好在90%--110%.
作者: vbbs    时间: 2011-5-11 11:39

供试品和对照品溶液的制备
1. 对照品溶液 精密称取氢溴酸东莨菪碱10.18mg，置10ml容量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）使溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含1.018mg的溶液（东莨菪碱重量=氢溴酸东莨菪碱/1.445）。
2. 供试品溶液 精密量取本品溶液5ml，置锥形瓶中，加入2mol/L盐酸溶液30ml，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，滤过，滤渣和滤器用2mol/L盐酸溶液分数次洗涤，合并滤液和洗液，用浓氨试液调节pH值至9，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收容剂至干，残渣用0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）溶解并移至5ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。
我用的是面积外标法计算：
我的计算公式为：样品峰面积×10.18mg×98%×1倍稀释÷对照品峰面积÷5ml÷10倍稀释÷1.445
对照品峰面积分别为12405085,2403604
样品峰面积分别为
6983970.5
6922532
6949904.5
6957659.5
6965083.5
我计算的含量分别为
0.078mg/ml
0.077 mg/ml
0.077 mg/ml
0.077 mg/ml
0.077 mg/ml
加样回收率试验
1. 对照品溶液的制备 精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品约7.8mg，置100ml的容量瓶内，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）使溶解，并稀释至刻度，即得。
2. 采用加样回收率测定方法，精密量取已知含量的样品2.5ml，精密加入上述对照品溶液2.5ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，依法测定。
回收率=（测的东莨菪碱含量—样品中东莨菪碱含量）/加入东莨菪碱量
我的计算公式为：样品峰面积×7.8mg×98%×2倍稀释÷对照品峰面积÷2.5ml÷100倍稀释÷1.445
加样对照峰面积分别为
1435563.25
1415782.625
加样回收样品峰面积分别为
3433927.75
3418554.25
3503073.25
3477568.5
3489245.25
3473198.5计算结果
原有量（mg）        加入量（mg）        测得量（mg）        回收率（%）
0.1925        0.195        0.51        163
0.1925        0.195        0.505        160
0.1925        0.195        0.52        168
0.1925        0.195        0.515        165
0.1925        0.195        0.52        168
0.1925        0.195        0.515        165

我的试验设置，及方法是否正确？
作者: baohailin    时间: 2011-5-12 10:01

加样回收率应为分别加入80%、100%、120%三个浓度各三份，测得结果后算9个值的平均回收率及相应RSD%
作者: thereyoube    时间: 2011-5-12 10:02

我的计算公式为：样品峰面积×10.18mg×98%×1倍稀释÷对照品峰面积÷5ml÷10倍稀释÷1.445

这里面的98%和1.445是什么

你的回÷收率里面的计算公式，我认为有问题，你检测的是整个溶液当中的量，下面÷的2.5是什么呢，我也弄混了，不知道公式应该是什么样咯
作者: ljw780624    时间: 2011-5-12 10:49

98%是对照品的含量；东莨菪碱重量=氢溴酸东莨菪碱/1.445，测定的是氢溴酸东蒗菪碱，含量要求以东蒗菪碱计，加样回收率计算公式：样品峰面积×7.8mg×98%×2倍稀释÷对照品峰面积÷2.5ml÷100倍稀释÷1.445中的2.5ml是样品的取样量。
作者: piaoliang110mei    时间: 2011-5-14 16:19     标题: 回复 #13 vbbs 的帖子

"对照品峰面积分别为12405085,2403604",为什么有两个数据，而且相差那么大？

计算样品含量时，"精密量取本品溶液5ml......溶解并移至5ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得" 5ml本品溶液------5ml供试品溶液，相当于供试品溶液没有稀释，你的计算中为何还有一个5ml？

你的样品测定过程中还有一个最大的问题就是我原来提到的用单点校正法对照和供试品峰面积一致才有可计算性。你可以自己算一算，一般来讲，色谱条件相同的条件下，不是同一天进样，同一个溶液的峰面积不会相差很大。而前后两个对照浓度比：10.18/7.8*10=13.05，峰面积比：12405085 /1435563.25=8.64,可见，峰面积与浓度不是简单的正比关系。所以对照和供试峰面积差得较多时，计算结果根本不对。我见你做过线性，也就是标准曲线，这种情况应该用你的标准曲线计算。原有量，加入量数值好像都不对，原有量应该乘以5（而且需要用标准曲线计算），加入量你没有除以1.445.

因为我也不太清楚你的实验，说的不对的地方还请见谅。
作者: vbbs    时间: 2011-5-16 16:11

刚刚又重新作了一下，我加样回收中对照品称量为7.77mg溶到100ml，对照品的峰面积为899824.125；因为我测定的样品平均含量为0.077mg/ml，所以在加样回收中，我样品取样为2.5ml（为含量测定时样品取样量的一半），我按照样品含量（2.5ml*0.077mg/ml=0.1925mg）的80%，100%，120%分别加入对照品2ml，2.5ml，3ml到供试品溶液中，同时我又做了只加2.5ml样品，只加2.5ml对照品，以及阴性溶液加入2.5ml对照品，试验结果如下：只加入2.5ml样品的峰面积为2794906.5；只加2.5ml对照品的峰面积为287700.906；阴性溶液中加2.5ml对照品的峰面积为424595.875；80%，100%，120%分别加入对照品2ml，2.5ml，3ml的峰面积分别为3369103.25，3736954.75，3965197.5。通过计算还是不行，请大家好好看一下，看看有什么不合理的地方，正确的计算公式是什么？


还有一个问题: 在测定样品含量时，对照品的浓度是按照药典中单味药材中含量测定时对照品浓度制备，还是随机制备一个浓度，有什么要求吗，该如何选择对照品的浓度？比如我制备的对照品浓度为10.81mg到100ml中，其峰面积为3596993.75，我又作了一个二步稀释（取2ml到25ml量瓶），其峰面积为432850.5，侧出来的样品含量差别比较大。



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