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标题: 请教用生工的RNA提取试剂盒提取水稻籽粒中的RNA [打印本页]

作者: kflsjjfdl 时间: 2009-1-9 13:24 标题: 请教用生工的RNA提取试剂盒提取水稻籽粒中的RNA

最近用生工的RNA提取试剂盒提取水稻籽粒中的RNA。按照生工的说明书进行操作。在加入0.1ml氯仿/异戊醇后，按照说明书用12000rpm离心5min，管中层见白色絮状沉淀，上清的量很少或没有(protalk上说大约有 0.45ml上清，但我提的时候一般只有0.1ml左右的上清)，继续按照protalk上的步骤做下去，RNA的浓度很低或者没有。请问哪位高手能给我指点一下，谢谢了!

作者: hplcangel 时间: 2009-1-12 23:17

应该是蛋白质含量较高，先加缓冲液粗提以后，在加蛋白酶K和DTT在42度下100r/m温和摇床1个半小时

作者: uovt69jn 时间: 2009-1-14 00:31

估计是水稻籽粒的多糖含量太高吧，

在提取液中加入 0.35 倍体积的无水乙醇，迅速混匀，多糖会先沉淀。

也可用缓冲液：100 mmol/LTris -HCl(pH=8.0)、5 mmol/L EDTA和0.35 mol/L Sorbitol洗几次。

也可能是蛋白过多，先用蛋白酶硝化一下再用氯仿/异戊醇抽提

作者: notrjhn 时间: 2009-1-14 22:24

奉劝你还是不要用试剂盒了，成本低，售价高，有的还骗人，用传统的方法做就可以了。种子的蛋白和多糖杂质比较多，可以用无水乙醇浸泡液氮研磨的种子，低温保存24小时，然后离心去上清，可以去掉多糖杂质。

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