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标题: 【求助】目前打算做液质很多问题不明白 [打印本页]

作者: 3648755 时间: 2015-5-16 11:16 标题: 【求助】目前打算做液质很多问题不明白

我用的机器是waters tqd-i class，我主要是想通过这个台机器，样品是某一个中药，里面的主要物质是皂苷，但是也有生物碱，我现在测定自己的样品中都有什么并进行归属，因为单体比较难分离，所以后期才会走这个单体以及对照品，我以前都是用的waters 的液相，超高都很少用，现在让我做液质来毕业，所以对这个很不了解，最大的问题就是，这个也是也是上来就走一针梯度洗脱（以前走液相都是先用10-100甲醇水走一个小时），然后再进行条件优化，但是现在液质用的是乙腈和甲酸-水，所以就不是很清楚怎么走了，之前有人做过我的这个中药，但是用的是HPLC，还是甲醇水，所以更不知道怎么做了，文献上说的很少，请大手告知怎么来摸色谱和质谱的条件，感激不尽！！！

作者: 3648755 时间: 2015-5-16 11:17

我的样品只是大孔下来的，之前的样品处理什么的是不是跟HPLC都差不多

作者: whitesheep 时间: 2015-5-16 11:17

首先得优化物质的质谱条件

作者: 3648755 时间: 2015-5-16 11:17

我是一个新手，有没有什么建议呢？我问了别的师兄师姐，都说上面的设置是固定的，基本上不需要怎么更改，这是我最郁闷的地方，关键是都不一样的东西，为什么竟然是一样的，原因他们也不是很清楚，还有人就是说先摸好色谱的条件，然后再进行质谱条件的摸索，这跟您说的有点不一样，能不能具体指教一下，我确实是这方面的小白，机器也不是很清楚，只是知道这个机器擅长用来定量的，我的目的是用来定性的，这个机器不会有太大的影响吧

作者: vvmmoy 时间: 2015-5-16 11:17

首先要对你测的目标化合物进行质谱调谐，找出特征母离子和子离子，参考的仪器条件要查一下相关标准比如优先考虑国标或者地方标准，行业标准等，如果没有相关测试标准就要查阅文献资料作为参考。

作者: dior 时间: 2015-5-16 11:18

分光光度计可算是哈希公司的明星产品

作者: 3648755 时间: 2015-5-16 11:18

QUOTE:

原帖由 vvmmoy 于 2015-5-16 11:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
首先要对你测的目标化合物进行质谱调谐，找出特征母离子和子离子，参考的仪器条件要查一下相关标准比如优先考虑国标或者地方标准，行业标准等，如果没有相关测试标准就要查阅文献资料作为参考。 ...

我的这个中药，药典没有收录，做实验的目的就是想把这个药物的给定性和定量，然后收录进入药典，相关的很少有液质的，有的也只有个别单体化合物，我现在参考的是两篇英文文献中的条件，明天做实验，希望我能把条件摸好

作者: ujne 时间: 2015-5-16 11:19

我也是才开始做液质没多长时间，我感觉你可以先用笨法子，先用原来设置的方法走一下你的样品，看一下能不能扫描得到，如果能找到的话，在慢慢设置也就好了。要是安装正规思路走的话是先用标准品进样针进样调质谱条件，然后在调液相的条件。

作者: www.1 时间: 2015-5-16 11:20

我是做化药的液质分析，我觉得液质用于定量的话，一般都是有针对性的，所以先摸索质谱条件，是响应合理；对于未确定的混合物来定性其中某单体的话，一般是先摸索液相条件，使其中组分基本分离，流动相可以进质谱仪，然后质谱上用通用条件（楼主师兄说的默认的条件）全扫描，找到各个组分的分子量，再结合其他信息确定成分是什么物质。个人所见，仅供参考。

作者: 3648755 时间: 2015-5-16 11:20

我今天走了一下样品因为是中药的总样品，里面的成分很复杂，我今天走的效果并不好，都额米有什么基线分离之类的，所有的线都飘到上面去了，具体也不知道是怎么回事，还正在研究，现在考虑是不是先走标品，然后再走混标，最后才能走总样品，然后进行指认，我的目的就是想定性，知道我的这台机器不行但是条件所限你懂的

作者: 3648755 时间: 2015-5-16 11:23

QUOTE:

原帖由 ujne 于 2015-5-16 11:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我也是才开始做液质没多长时间，我感觉你可以先用笨法子，先用原来设置的方法走一下你的样品，看一下能不能扫描得到，如果能找到的话，在慢慢设置也就好了。要是安装正规思路走的话是先用标准品进样针进样调质谱条件，然后在调液 ...

我今天刚碰了液质以前跟师姐做的TOF，而且只是打杂的，现在用的是TQD三重四级杆，您说下笨法子也行。我的目的是定性，但是我现在只有TQD，条件所限，你懂的，我今天走了之后发现基线分离有些困难，质谱扫描很杂，我打算下次先走标品，然后走混标，最后走总样，觉得这个步骤怎样？

作者: KGZ564 时间: 2015-5-16 11:23

我感觉你可以用现有的条件走一针试试看看，然后在进行调整方法，同一个课题组的化合物结构有相似之处，方法也可以借鉴下。

作者: S6044 时间: 2015-5-16 11:24

我用的机器是waters tqd-i class，我主要是想通过这个台机器，样品是某一个中药，里面的主要物质是皂苷，但是也有生物碱，我现在测定自己的样品中都有什么并进行归属，因为单体比较难分离，所以后期才会走这个单体以及对照品，我以前都是用的waters 的液相，超高都很少用，现在让我做液质来毕业，所以对这个很不了解，最大的问题就是，这个也是也是上来就走一针梯度洗脱（以前走液相都是先用10-100甲醇水走一个小时），然后再进行条件优化，但是现在液质用的是乙腈和甲酸-水，所以就不是很清楚怎么走了，之前有人做过我的这个中药，但是用的是HPLC，还是甲醇水，所以更不知道怎么做了，文献上说的很少，请大手告知怎么来摸色谱和质谱的条件，感激不尽！！！

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你这个问题说实话有点大，确定液相和质谱条件就是建立一个全新的检测方法，我没法简单的用几句话说清楚。给你几个建议。首先一般情况下HPLC的流动相条件可以作为液质的优化初始设定。第二，质谱条件优化，顺序是找到目标出峰——调谐ESI参数——精确质量优化——确定碰撞能量。这只能说个大概

作者: zzzz 时间: 2015-5-16 11:24

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原帖由 S6044 于 2015-5-16 11:24 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我用的机器是waters tqd-i class，我主要是想通过这个台机器，样品是某一个中药，里面的主要物质是皂苷，但是也有生物碱，我现在测定自己的样品中都有什么并进行归属，因为单体比较难分离，所以后期才会走这个单体以及对照品，我以 ...

液质能做分子量最大多少的物质？

作者: cj_mondy 时间: 2015-5-16 11:26

中药的全扫描质谱很复杂，很多时候都是一堆基线，建议楼主
1.先将MS和UV联用，根据紫外谱图上的峰位置来推断目标物在MS中的出峰时间，这个过程最好优化下色谱条件，将紫外谱图上的峰尽量分离。
2.对这些时间色谱峰的质谱图进行背景扣除，一般来说可以得到比较干净的谱图，接着再进行分子量匹配，有没有与文献或师兄师姐课题里类似的物质；
3. 尝试对这些物质进行二级断裂，通过MS/MS碎片来推断可能的结构，最好之前用这一类皂苷的单标研究一下裂解规律，可以加快解谱速度；

作者: bs4665 时间: 2015-5-16 11:27

UPLC和HPLC没什么大区别，注意的是如果用UPLC柱子，那色谱条件可以用Waters的柱子切换软件来无缝转移。关键是你要分析的化合物是否有确定的结构，如果是已知物质的分析和含量测定，那还比较容易，如果是未知化合物的摸索，建议用Q-TOF.

作者: any333 时间: 2015-5-16 11:27

我们以前的做法是
一、摸质谱方法：
  质谱MS TUNE界面下，用A/B/C管路走纯品，选择MSMS模式，然后调节毛细管电压等参数找母离子，再打开氩气，调节碰撞能找子离子。每台质谱的质量轴不一样，所以会和标准或者理论值有一定差异。
二、色谱柱
  选择适合这个化合物的柱子。
三、摸液相方法：
  调节液相方法。可以参考文献走个梯度。然后逐步调节水相有机相比例，多走几针试一下。
  具体步骤挺麻烦的，一下子也说不全。大概这样吧。

作者: any333 时间: 2015-5-16 11:27

我的建议是一定要先搞定质谱方法以后，才去摸液相方法，否则出峰不好的话，就不知道是质谱没有采集到数据还是液相没有分离好物质。看上去一堆，很难优化。

作者: any333 时间: 2015-5-16 11:28

还要补充一点，摸质谱方法最好是用手动调谐，自动调谐效果不太好，以前试过有时找不到，有时找到的与我想要的不一致。

作者: www.1 时间: 2015-5-16 11:28

任何液质方法的开发首先都是先摸质谱方法。做为检测器，你质谱方法都没有，不能确保检测出目标物而去优化分离方法是没有任何意义的。先拿标准品用手动也好，自动也好（我用过Waters的自动优化，优化出来的方法还是很靠谱的）优化出质谱条件，然后进行液相条件的优化。最后进基质样品，出不来峰再从前处理方面考虑！

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