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标题: 液相色谱出现双峰的问题 [打印本页]

作者: 狗尾巴花儿 时间: 2011-5-24 10:35 标题: 液相色谱出现双峰的问题

现在做的是高效液相检测磺胺类药物和甲氧苄啶，标品都是用甲醇溶解的，流动相是乙腈（A）和0.1%甲酸（B），磺胺类的药物出峰的最佳流动相比例不太一样，A:B分别是30:70,35:70，45：55，要如何设梯度，可以把他们分离开？还有个问题就是甲氧苄啶出现双峰，第一个峰是个鼓包，第二个峰型还可以，两个峰间隔大概半分钟，调节流动相比例，两个峰依旧存在，只是峰型略有变化，这是不是溶剂效应啊？要怎么克服呢？刚接触液相色谱，不太清楚，麻烦大家给点建议！不胜感激。。。

作者: 财富思考 时间: 2011-5-24 13:41

保持流速, 梯度从10%A开始至50% A止, 梯度时间为20分钟试一试, 如果效果不是很好可以增加梯度时间至40min后, 再优化.

作者: 考研吧 时间: 2011-5-24 13:41

可能是对照溶液的溶剂影响，对照应该用流动相溶解。

先用等度分析，保证所有物质出峰，再调整比例，尽量用等度分离。

不行的话，再根据不能分离的峰设计梯度。尽量使用线性梯度。

作者: NVIDIA 时间: 2011-5-24 13:42

要看溶剂效应，进一针空白看看！第一个峰是个鼓包是不是进样污染造成的或者对照品降解！

作者: 猴子 时间: 2011-5-24 17:42 标题: 回复 #1 狗尾巴花儿的帖子

看看这篇文献：cuturl('http://www.rongchang.com/ziliao/yaopin/HPLC%E6%B3%95%E6%B5%8B%E5%AE%9A%E5%A4%B4%E5%AD%A2%E7%BE%9F%E6%B0%A8%E8%8B%84%E7%94%B2%E6%B0%A7%E8%8B%84%E5%95%B6%E7%89%87%E4%B8%AD%E5%A4%B4%E5%AD%A2%E7%BE%9F%E6%B0%A8%E8%8B%84%E5%92%8C%E7%94%B2%E6%B0%A7%E8%8B%84%E5%95%B6%E7%9A%84%E5%90%AB%E9%87%8F.pdf')
如果是15cm，5u的柱子，流速1ml/min，
梯度可试设：
0min：5%乙腈
8min：80%乙腈
15min：stop

作者: ttkl533 时间: 2011-5-25 09:17

磺胺类药物检测，使用农业部958号公告-12-2007水产品中磺胺类药物残留量测定的液相色谱法就可以。我们使用紫外检测器的方法，我是将它的流动相梯度做了一点点调整，我们测了六种磺胺药物，效果挺好的，分离的峰形不错。

作者: aasle 时间: 2011-5-25 09:17

楼主可先用乙腈含量由低到高然后再返回的方法来设梯度。如果磺胺的种类就三种的话，等度也可洗脱。另外，甲氧苄啶的出锋是两个吗？甲氧苄啶的色谱条件是什么？

作者: 358uwcj 时间: 2011-5-25 09:17

走一个稍微偏快的梯度，比如A：20-80走30分钟

作者: sd71469190 时间: 2011-5-25 09:18

你要把各个组分在各自最佳流动相出峰时间说一下，不然梯度没法设置

作者: xiongwei397 时间: 2011-5-26 09:50

QUOTE:

原帖由 狗尾巴花儿 于 2011-5-24 10:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
现在做的是高效液相检测磺胺类药物和甲氧苄啶，标品都是用甲醇溶解的，流动相是乙腈（A）和0.1%甲酸（B），磺胺类的药物出峰的最佳流动相比例不太一样，A:B分别是30:70,35:70，45：55，要如何设梯度，可以把他们分离开？还有个问题就是甲氧苄啶 ...

我估计你得试试，流动相梯度得慢慢试，在参考一些文献

作者: 狗尾巴花儿 时间: 2011-5-27 22:33 标题: 回复 #2 财富思考的帖子

谢谢您的建议，现在梯度基本合适了，呵呵

作者: 狗尾巴花儿 时间: 2011-5-27 22:38 标题: 回复 #3 考研吧的帖子

现在觉得应该不是溶剂的问题，谢谢您的建议

作者: 狗尾巴花儿 时间: 2011-5-27 22:40 标题: 回复 #4 NVIDIA 的帖子

可能是对照品的问题，我进空白了，两个峰都没有，谢谢您的建议

作者: 狗尾巴花儿 时间: 2011-5-27 22:44 标题: 回复 #5 猴子的帖子

好的，现在已经有梯度了谢谢咯

作者: 狗尾巴花儿 时间: 2011-5-27 22:46 标题: 回复 #6 ttkl533 的帖子

现在用梯度四种磺胺类的分离开了，你们测得是什么啊？具体实验条件可以说下吗？谢咯

作者: 狗尾巴花儿 时间: 2011-5-27 22:50 标题: 7楼

现在梯度问题基本解决了。就是甲氧苄啶还是两个峰，跟测磺胺的条件一样，梯度洗脱，检测波长268，响应也不太好，出的峰很小，还是两峰，不晓得怎么回事

[ 本帖最后由狗尾巴花儿于 2011-5-27 22:53 编辑 ]

作者: 狗尾巴花儿 时间: 2011-5-27 22:51 标题: 回复 #8 358uwcj 的帖子

现在梯度问题解决了，谢谢您的建议

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