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标题: 这个超大的峰难道是传说中的溶剂峰或鬼峰吗！？？ [打印本页]

作者: a50044758 时间: 2011-5-26 16:10 标题: 这个超大的峰难道是传说中的溶剂峰或鬼峰吗！？？

小弟做的实验主要是测酶活和抑制剂对酶的抑制效果，流动相：0.8%乙腈，20mM三乙胺，用醋酸调PH到6.0，波长259nm。
第一天测的样品很正常，几个峰都能分开，产物出峰时间在6.3min左右。

但是第二天，在酶反应体系中加入了极少量的DMSO后，就在3.3min左右出现了一个非常大的峰，很怪异！我测过，DMSO在259nm波长处基本上是无吸收的，我重复了很多次，这个峰一直都出现。

这个突然出现的大峰是溶剂峰吗，为什么会这么的大，这个峰的出现导致我的检测的结果很不准确，产物出的峰都成山丘一样凸起来的了，根本就不是尖的，大伙帮我看看是怎么回事吧。

作者: PURPOSE人生 时间: 2011-5-26 16:10 标题: 回复 #1 a50044758 的帖子

绝对不是溶剂峰，溶剂峰有一个特点，峰顶像“扫把"一样一样不规则！按照你的描述，结合图，我来解释你的反应的现象。图一中峰1、2是酶反应底物，1+2---->峰3，经过一天之后，底物越来越少，都转化为图一中的峰3，峰3在反应体系中，又不断转化为图峰2的峰1产物（产物的量不断增多）。从你以上图片可以分析得到，反应体系中各个产物的母核结构变化不大（尤其图一的峰3和图二的峰1之间），只不过图二的峰1产物的极性变大了！恭喜lZ，你这个发现可能就是一篇很好的paper。一个新的实验发现！当然不排除你实验设计有不合理的地方，比如反应体系不稳定，导致反应持续进行，希望LZ好好研究！

作者: a50044758 时间: 2011-5-26 17:56

怎么没人来啊，出现个高手吧～嘿嘿

作者: aasle 时间: 2011-5-26 18:11

先这个峰肯定不是溶剂峰,估计是以前残留的杂质没冲洗干净,建议多冲洗点时间,然后再进样

作者: ztjnanning 时间: 2011-5-26 18:12

单独进稀释后的DMSO出峰吗？

位置是否和第二张图的大峰一致？

作者: 猴子 时间: 2011-5-26 20:26 标题: 回复 #1 a50044758 的帖子

“在酶反应体系中加入了极少量的DMSO后”，可能发生其他反应生成其他副产物了！

作者: a50044758 时间: 2011-5-26 21:47 标题: 回复 #4 ztjnanning 的帖子

这个实验师兄以前做过了的，DMSO加入后不会出现那个奇怪的峰，而且DMSO也不会参与这个反应啊，我是重复师兄以前做过的实验，流动相和体系都是按照师兄的来的，我在想这个会不会因为我的流动相里面的有机相含量太低，水分含量太高，结果把柱子里面的填料给冲出来了啊？
C18的柱子流动相里面的水的含量最低能是多少啊？

作者: chongwenmen 时间: 2011-5-26 22:56 标题: 回复 #1 a50044758 的帖子

系统提前一定要平衡好
会不会是DMSO和样品反应了之后产生的杂质？！
样品是不是新配的？有没有发现你第一张那几个峰在第二张图上都变小了！！
别加DMSO第二天，再进一下酶反应体系，看看有没有那个峰。

作者: maomi530 时间: 2011-5-26 22:57

液相条件呢？
DMSO有时候基线不太好，但不会出现这样的溶剂峰。俺270nm液相DMSO无问题。

3.3min左右出现了一个非常大的峰

DMSO对保留时间有影响，3.3m可能为某主峰。。

作者: woaifou 时间: 2011-5-26 22:57

你确定DMSO在259没有吸收，你可以进一针被稀释的DMSO，我以前用210nm时DMSO峰很大

作者: Bevis2004 时间: 2011-5-26 22:58

你的DMSO是在反应过程中加的吗？为什么加DMSO呢？

作者: njyyyil 时间: 2011-5-26 22:58

直线上去缓慢下来可能是气泡峰或者你加的DMSO的影响

作者: Bevis2004 时间: 2011-5-27 09:32

我以前做过其他的产品中加入DMSO后影响比较大而且基线不是很稳定

作者: 饮食男女 时间: 2011-5-27 09:33

反应终止了么？如果是溶剂峰的不好解释峰3在减小啊

可能是产物的一个变化体

作者: DragonsABC 时间: 2011-5-27 09:33

楼主加入DMSO的目的是什么啊？

作者: rjzhang0110 时间: 2011-5-27 13:57

你用多大的浓度扫的dmso ，这个应该是dmso ，如果你不信，按这个条件，打一针dnso就知道了

作者: a50044758 时间: 2011-5-27 16:53 标题: 回复 #2 PURPOSE人生的帖子

这位兄台说的有道理，我这个反应体系确实是图一中峰1、2是酶反应底物，1+2---->峰3，但是反应10分钟后，我用沸水煮了10分钟，使酶失活终止反应了，所以按道理，这个反应不能继续进行了。
关于图2，为什么加DMSO,是因为我要加入酶抑制剂，看抑制剂的抑制效果，而那些小分子抑制剂都是溶解在DMSO里面的，加入DMSO或者抑制剂后，这个大峰就出现了。
这个问题我一直不知道是为什么，因为我换柱子后，这个大峰就消失了，我只能认为是柱子的原因，因为我用的是伊力特C18的柱子，这个柱子的流动相里面有机相含量最好是不能少于10%的，而我的流动相里面的有机相几乎为0，因为加入有机相后几个峰会连在一起而分不开，所以只能减少有机相的含量，现在用的是安捷伦TC-C18(2)的柱子，流动相里面加入了5%的甲醇，虽然能做出来，但是重复性不是很好，我这个星期实验了再和大家交流下啊。

作者: a50044758 时间: 2011-5-27 16:55 标题: 回复 #10 woaifou 的帖子

是没吸收的，我单独进过DMSO。

作者: PURPOSE人生 时间: 2011-5-28 10:13 标题: 回复 #17 a50044758 的帖子

你能够把图一中峰3的化学式贴出来吗？虽然你的酶反应体系终止了，不能保证体系氧化进行呀？我按照你的理解，你是加热灭活之后，再加抑制剂！这个有意思吗？难道图2是抑制剂的峰？但是解释不通图一中峰3为什么减少？我怀疑是峰3氧化变成了图二中的峰一。如果是柱子的问题，那我建议你冲洗一下柱子，再做一下，如果还是这个结果！那肯定是反应体系的问题！

作者: a50044758 时间: 2011-6-8 21:59 标题: 回复 #18 a50044758 的帖子

液相用水污染了，我换成哇哈哈的水配体系，这个大峰就消失了。

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