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标题: 关于液相色谱柱反冲的问题（已咨询售后） [打印本页]

作者: a50044758 时间: 2011-6-14 13:39 标题: 关于液相色谱柱反冲的问题（已咨询售后）

关于色谱柱能不能反冲的问题争议很大，一直困扰了我很久，我新定的安捷伦TC-C18（2），粒径是5um，色谱柱在一次使用后压力上升了50bar，以前用纯甲醇冲的时候压力只有68bar，现在用纯甲醇冲，压力达到了128bar，而用95%水+5%甲醇冲是压力更达到了170bar。
于是我电话咨询了安捷伦的售后，别人给我的建议是将色谱柱用纯甲醇，乙腈，异丙醇依次低流速反冲，我问她反冲对柱子的影响会不会很大，她保证说反冲是没有任何影响的。
对于色谱柱反冲的问题，大家有什么看法啊？

作者: zxlyid 时间: 2011-6-14 14:15

低流速反冲没有问题，我们经常这样处理。

作者: aasle 时间: 2011-6-14 14:16

反冲不是万万不能，实在没办法时反冲一下有可能会有意想不到的结果。
换句话说反冲柱子是死马当活马医。

作者: a50044758 时间: 2011-6-14 14:27 标题: 回复 #3 aasle 的帖子

死马当活马医？我的柱子还没到死的地步吧，跑流动相的时候压力是168bar左右，我就是不想它的压力一直升高才考虑是否反冲的。你的意思是不要反冲，等柱子压力升高到不能用的时候再反冲吗？

作者: aasle 时间: 2011-6-14 15:02 标题: 回复 #4 a50044758 的帖子

是，这种情况你可以考虑梯度冲洗。柱压升高有可能是里面有东西没有冲出来。先用大比例水90%~95%，冲一会在过渡80%20%过渡一下最后再用纯乙腈冲1~2个小时看不看有没有效果。

还是不行可以低流速反冲一下（流速一定要低最好不超过0.3）。反冲的效果也不一定明显。最好就是做好预防，装个保护柱。
不能反冲的原因是反冲有可能造成色谱柱内填充物料发生移动，对柱子产生损害。所以一定要低流速冲。

作者: 英语你我他 时间: 2011-6-14 15:02

看看能不能拆下柱头，里面如果有过滤片最好了，拿下来用异丙醇超声清洗

作者: entd_jps 时间: 2011-6-14 15:02

柱子小流速反冲是没有问题的。但是对你的降压有没有效果，还要看你选的流动相。既然只用一次，那就对症下药，用对那个阳平溶解度大的溶剂冲洗。。

作者: wzw3392008 时间: 2011-6-14 17:16

说的不能反冲是指不能反复经常变换着方向冲，偶尔一次应该没事

作者: sacred 时间: 2011-6-14 17:16

可以先以甲醇，乙腈或30%异丙醇-水来正向冲洗，将柱子中的填料彻底清洗活化。反冲色谱柱不建议你使用，因为会把柱子中的填料冲散，填料断面也会不平整，造成你日后使用柱效降低或峰型异常。
可以尝试梯度洗脱一下，看看能否将柱子中的一些杂质冲出来。

作者: ttkl533 时间: 2011-6-14 17:17

QUOTE:

原帖由 a50044758 于 2011-6-14 13:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
关于色谱柱能不能反冲的问题争议很大，一直困扰了我很久，我新定的安捷伦TC-C18（2），粒径是5um，色谱柱在一次使用后压力上升了50bar，以前用纯甲醇冲的时候压力只有68bar，现在用纯甲醇冲，压力达到了128bar，而用95%水+5%甲醇冲是压力 ...

据我所知，安捷伦XDB SB等系列的液相色谱柱可以反冲，而且可以反向使用，柱效和正向用没有什么区别的，安捷伦耗材应用工程师也证实过反向使用是可以的。

作者: fence-straddler 时间: 2011-6-14 18:03 标题: 回复 #1 a50044758 的帖子

既然厂商都说可以反冲那就可以，以前的柱子是禁忌反冲的，但现在新技术层出不穷，连耐纯水甚至酸水的反相柱都有，何况区区反冲！

究竟需不需反冲，我认为还得看可能是什么东西污染了柱，如果是固体颗粒（比如说进样前没过滤），那么反冲就是非常有效的措施。如果是进入了强保留的非极性组分，用强的洗脱溶剂正着冲一样可以洗脱。
还有一点非常重要，就是一定要先排查好压力升高确实是由柱引起的哦！如果是泵的在线滤器、管路等引起的你却冲半天柱，那就~

作者: ruyue811211 时间: 2011-6-15 09:21

前一次实验用的是什么流动相？比例情况。

作者: fjdlgldg 时间: 2011-6-15 09:21

　　最好能确认污染物是什么，来自哪里。

　　反向使用色谱柱，可能会扰动硅胶颗粒在色谱柱中的分布，造成性能下降。

　　但是可能觉察不到区别。

作者: LUMGR 时间: 2011-6-15 09:22

反冲对柱子有没有影响与柱子有关系，据我所知菲罗门的柱子可以反冲。

作者: gamewang 时间: 2011-6-15 09:22

应该不能反冲吧！

作者: thereyoube 时间: 2011-6-16 10:39

据安捷伦的讲座上的表述，安捷伦的色谱柱两头筛板的孔径做的是一样大小的，所以反冲是没有问题的。但是国内很多厂家的色谱柱柱头筛板做的比柱尾孔径大，反冲的话就会把杂质带进系统。。。以上是从安捷伦的讲座上听来的~~希望对你有帮助

作者: qiuyf-2007 时间: 2011-6-16 10:39

反冲是没有问题的。只要不是极端的流动相。

作者: iwfi325iwc 时间: 2011-6-16 10:40

我用资生堂的柱子压力每天增高一点反冲就好了

作者: utek 时间: 2011-6-16 10:40

反冲会造成柱头塌陷，冲后柱压甚至可能比新柱子还低，柱效也可能会降低，不是什么好事

作者: zhaohaimi 时间: 2011-6-16 10:41

可以反冲，我是有试过反冲，先低流速低浓度冲半个小时再用高浓度的冲半个小时，基本上压力会降下来，柱效有稍微提高的。

作者: sseia42 时间: 2011-6-16 10:41 标题: 回复 #1 a50044758 的帖子

　　反冲是没有什么问题的。

　　实际上HPLC色谱柱的填装压力比最大使用压力高很多(通常会高2倍)。如果装柱时使用了恰当的匀浆剂，并且分配一定的时间使柱床稳定，一支填装良好的色谱柱是完全可以双向使用的。需要反向使用色谱柱的情况包括：柱转换时的反冲、柱头被强保留物质吸附污染的色谱柱清洗(反冲的冲洗路径更短更合理)、冲洗残留在筛板上的颗粒物以降低柱压或防止柱压升高。

　　反向使用色谱柱有一个例外，就是生产商在色谱柱的进样端使用了孔径更大筛板的情况，反向使用可能会将填料从柱床冲出。色谱柱在工厂填装时，出口端的筛板孔径必须比色谱柱中最小颗粒的粒径还要小。譬如，色谱填料平均粒径是5μm，粒径分布范围是3–7 μm, 出口端筛板孔径必须小于3μm ，使填料没有可能从柱床跑到色谱柱筛板外面。大多数生产厂家选择的筛板孔径是2-μm。至于某些厂家两端的柱筛板孔径不一样，一般是进样端大些，出样端小些。

　　进样端大的原因：色谱柱被污染都是进样端首先被污染，尤其是进样端的柱筛板被固体颗粒堵牢了，一个 0.5-μm的筛板会比一个 2-μm的筛板被堵得快，导致柱压极高，色谱柱就没有办法用下去了，如果进样端的柱筛板孔径越大，固体颗粒就越不容易堵在这里。通常色谱柱上就会标一个箭头表示只能在一个方向使用。

　　出样端的柱筛板孔径小些，原因是：怕填料流失。

　　但现在不一样了，绝大多数厂家都采用了对称的筛板。

　　至于现在为什么有人认为不能反冲，是因为色谱柱经过一段时间的使用，里面的填料已经得到了很好的平衡，越接近柱尾端填料相对越密实。一旦反冲或反接，填料的分布状态又会被打乱，会影响到分离。但是在实际试验过程中，分离常规物质时候影响并不是很大。

作者: a50044758 时间: 2011-6-16 12:46 标题: 回复 #6 英语你我他的帖子

不是吧你……新柱子你要我拆开啊！……

作者: a50044758 时间: 2011-6-16 12:49

问下你用的什么流动相反冲的啊？

作者: crz555 时间: 2011-6-16 14:41 标题: 色谱柱最好不反冲

色谱柱压力大了一般是色谱柱脏了将柱前垫片堵塞了，这时最好是将柱头打开将垫片取下在甲醇溶剂中超声清洗十几分钟再接到色谱柱上，若还是不行，可将垫片放在硝酸中超声清洗后用水冲洗至中性在接到色谱柱上

作者: utek 时间: 2011-6-18 10:25

我师兄反冲过一次，不过当时是犯了迷糊不小心装反了冲的，3ml/min，属于高速了吧，好像也没什么感觉

作者: BridgetJones 时间: 2011-6-18 10:25

反冲不能用高流速的，否则柱中填料会松动。
有条件的话，最好了解下色谱柱填装工艺。

作者: 实验技术 时间: 2011-6-18 10:26

可不可以反冲得看你的柱子两头的孔径是否一致，若不一致肯定不行。
若一致，一般来说，低流速反冲是没有任何问题的。因为柱子在制备的时候，是在40MPa左右（也可能更高）条件下进行填充的，1.0ml/min的流速的柱压顶多十几MPa，怎么可能对柱床造成明显的影响呢？
有人说：“反冲可能使键合相碳链一边倒，与原来的方向相反，会影响柱子的分离效果。” 众所周知，只有碳链在完全自由舒展的条件下，柱效是最好的，照上面的说法，反冲不刚好把碳链恢复到自由舒展的状态，这样不更好吗？其实，实验早已证明：在至少5%的有机相中，碳链是可以完全自由舒展的。
再者，强保留物质基本都是保留在柱子头部，因此反冲可以事半功倍。正冲则可能污染整个柱子。

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