分析测试百科

标题: 【求助】流式细胞仪检测细胞凋亡结果分析 [打印本页]

作者: 雪原 时间: 2015-6-9 16:39 标题: 【求助】流式细胞仪检测细胞凋亡结果分析

请教各位老师，我做的是药物诱导细胞凋亡的实验，不同浓度药物作用细胞24小时候用Annexin-V PI双染，流式细胞仪检测，得到结果如下，请问：
1、怎么根据散点图及其中的数据算得凋亡率？2、怎样用SPSS对凋亡率进行比较分析？3、我只进行了一次实验，能否用SPSS进行分析？是不是必须至少进行两次实验才行？
0mmol/L:

图片附件: 36895328.jpg (2015-6-9 16:39, 51.51 KB) / 该附件被下载次数 20
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=33392

作者: 雪原 时间: 2015-6-9 16:40

0.01mmol/L:

图片附件: 23874205.jpg (2015-6-9 16:40, 64 KB) / 该附件被下载次数 17
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=33393

作者: 雪原 时间: 2015-6-9 16:42

0.1mmol/L:

图片附件: 40537262.jpg (2015-6-9 16:42, 51.85 KB) / 该附件被下载次数 16
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=33394

作者: 雪原 时间: 2015-6-9 16:42

0.2mmol/L:

图片附件: 20506650.jpg (2015-6-9 16:42, 64.07 KB) / 该附件被下载次数 13
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=33395

作者: zzzz 时间: 2015-6-9 16:43

LR的GATE%是凋亡的，UR的是坏死的

作者: 雪原 时间: 2015-6-9 16:43

QUOTE:

原帖由 zzzz 于 2015-6-9 16:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

LR的GATE%是凋亡的，UR的是坏死的

谢谢你的回答，请问怎样用统计软件进行分析呢？可不可以用这个帖子提到的方法？

作者: ns5fan 时间: 2015-6-9 16:44

感觉你的图有些奇怪，是否有做过补偿。
总的感觉，你的细胞凋亡细胞很少，凋亡诱导可以说是失败的，这样的结果不分析也罢。

作者: 雪原 时间: 2015-6-9 16:44

QUOTE:

原帖由 ns5fan 于 2015-6-9 16:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

感觉你的图有些奇怪，是否有做过补偿。
总的感觉，你的细胞凋亡细胞很少，凋亡诱导可以说是失败的，这样的结果不分析也罢。

请您详细指点一下呗？我是新手，谢谢了！

作者: toy 时间: 2015-6-9 16:44

细胞好像都没死，药物作用没有体现出来。

作者: 雪原 时间: 2015-6-9 16:45

QUOTE:

原帖由 toy 于 2015-6-9 16:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

细胞好像都没死，药物作用没有体现出来。

请问是从LR的GATE%看出来的吗？

作者: toy 时间: 2015-6-9 16:45

QUOTE:

原帖由雪原于 2015-6-9 16:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问是从LR的GATE%看出来的吗？

我来解释一下Annexin-V PI双染的实验原理，你就明白了
Annexin-V可以再钙离子存在的情况下，和细胞表面外翻的磷脂酰丝氨酸结合，而磷脂酰丝氨酸的外翻是细胞凋亡的早期事件。
PI是一种DNA染料，当细胞凋亡的晚期，细胞的细胞膜通透性增加，PI从而进入细胞核与DNA结合。
所以
Annexin-V阴性-PI阴性代表正常细胞
Annexin-V阳性-PI阴性代表凋亡早期的细胞
Annexin-V阳性-PI阳性代表凋亡晚期的细胞或坏死的细胞
Annexin-V阴性-PI阳性一般不存在这一群细胞，如果出现这一团细胞可能是PI标记时间过长，或者操作过于剧烈而伤害到原本正常的细胞。（当然，我还听到过一种说法，说这是凋亡最后阶段的细胞，细胞已经没有细胞膜了说以不结合Annexin-V而只结合PI，列出来供参考吧，不过我自己是不同意这种解释的）

作者: 雪原 时间: 2015-6-9 16:47

QUOTE:

原帖由 toy 于 2015-6-9 16:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我来解释一下Annexin-V PI双染的实验原理，你就明白了
Annexin-V可以再钙离子存在的情况下，和细胞表面外翻的磷脂酰丝氨酸结合，而磷脂酰丝氨酸的外翻是细胞凋亡的早期事件。
PI是一种DNA染料，当细胞凋亡的晚期，细胞的细胞 ...

谢谢您的解释！
请问出现这样的情况有没有一种明显的原因呢，比如出现这样的图像大概就是某个原因引起的？

作者: toy 时间: 2015-6-9 16:48

QUOTE:

原帖由雪原于 2015-6-9 16:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

谢谢您的解释！
请问出现这样的情况有没有一种明显的原因呢，比如出现这样的图像大概就是某个原因引起的？

假设补偿什么的没有出错的话。
你的流式结果明显就是细胞没有凋亡，可能是你用于处理细胞的药物浓度或者活性不够，总之就是没有引起细胞凋亡。
如果是流式本身测量出错的话，
下次试验可以加入一组阳性对照来看看是不是你流式除了问题。在培养基里加终浓度是1%的双氧水培养过夜，收细胞测流式，应该能测到非常明显的凋亡。

作者: xevin 时间: 2015-6-9 16:49

同楼主，只做了一次的细胞凋亡，得到数据后应该怎么用SPSS软件进行统计分析？各位战友给支个招吧。不知楼主解决完这个问题没，有什么经验可以分享的？

作者: 雪原 时间: 2015-6-9 16:49

QUOTE:

原帖由 xevin 于 2015-6-9 16:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

同楼主，只做了一次的细胞凋亡，得到数据后应该怎么用SPSS软件进行统计分析？各位战友给支个招吧。不知楼主解决完这个问题没，有什么经验可以分享的？ ...

做一次是不能用SPSS分析的，我看文献上最少都是做3次的；另外，我之前用的干预药物是国产的，后来换成进口的就好了，希望对你有些帮助，我也是一知半解，有问题可以请教论坛里的高手。

作者: feiya 时间: 2015-6-9 16:51

楼主，你的UL的百分率很小，你离细胞的时候的离心力和时间是多少？我用的1000r/min（600g），5min，然后测得UL在9%左右。感觉好大啊。不知道哪里出的原因

作者: remenb 时间: 2015-6-9 16:54

同楼主，只做了一次的细胞凋亡，得到数据后应该怎么用SPSS软件进行统计分析？各位战友给支个招吧。不知 ...

======================================================

如果你一组设计了三个1以上的样品可以统计的，做多组间方差分析。

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)