分析测试百科

标题: 【讨论帖】种好你的96孔板 [打印本页]

作者: NBA 时间: 2015-6-9 17:46 标题: 【讨论帖】种好你的96孔板

做实验将近一年，从论坛上学到了很多东西，感谢很多战友给予的帮助，现将我在实验过程中的一点儿小小的经验拿出来和大家分享，希望对种96孔板子的战友有帮助。
刚开始用96孔板种细胞时细胞总是分布不均匀，第二天就会发现有些地方出现堆积性生长，而还有不少地方细胞则很稀疏，细胞密集的地方因细胞与细胞之间的接触抑制影响细胞的生长，这样就很难评价干预因素对细胞的作用，因此将96孔板种均匀也是进行后续实验的前提，现将我以前用的老办法和最后用的新方法比较一下，以让大家看看各自优缺。
1、老方法：这个是从论坛学的，就是种过板子后，用手将96孔板平拿起，左右晃动几下，然后再前后晃动几下，不过这种方法5个复孔中总有2-3个孔中细胞分布不均匀，多数情况下是孔的中间出现成堆分布，为此苦恼了一阵子。还又一次见一师姐将种好的板子放在摇床上摇了几分钟，结果更惨了，细胞全部跑到中间了。
2、新方法：这种方法简直是太好了，种的很均匀。先用抢将吹打均匀的细胞吸起来，让后将枪头紧贴着孔的一侧壁（注意枪头的尖不要接触孔底），然后将枪头中的细胞缓缓的打下去，种好之后千万不要摇晃板子，直接放到显微镜下看就可以了，此方法可以说是100%的有效吧。
希望对大家有帮助。

作者: purrr 时间: 2015-6-9 17:46

嗯
后来我也慢慢摸索了，用这种方法种的细胞很均匀

作者: JK.jon 时间: 2015-6-9 17:47

我有一个问题想请教LZ啊，你说的这种方法种96孔板很好的话，那24孔板和6孔板之类的大一些的呢？怎么样做才能做到较均一呢！这种方法适合吗？O(∩_∩)O谢谢

作者: @花开花落@ 时间: 2015-6-9 17:47

QUOTE:

原帖由 JK.jon 于 2015-6-9 17:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我有一个问题想请教LZ啊，你说的这种方法种96孔板很好的话，那24孔板和6孔板之类的大一些的呢？怎么样做才能做到较均一呢！这种方法适合吗？O(∩_∩)O谢谢 ...

新方法要不要再孔里先加些培养基？

作者: JK.jon 时间: 2015-6-9 17:48

还有一个问题就是LZ说的这种新方法用排枪做还行啊？还是需要一个一个孔的加啊！谢谢

作者: tudou85 时间: 2015-6-9 17:48

有个问题楼上也有人问了，这种方法培养基是怎么处理？先放还是最后放？加的时候又有什么要求吗？
多谢指点~

作者: remenb 时间: 2015-6-9 17:49

同学习，不知道对于种6孔板是否同样适用。找机会实验一下。

作者: queen 时间: 2015-6-9 17:49

楼主说得很好，我补充一点，从6孔板到96空板要细胞分散均匀，先用培养基把细胞稀释好，再把培养板放在适当的位置，加入细胞时和加入细胞后不移动培养板；如果空中有的地方没有培养基可吹打，但不要移动培养板，加入细胞后静置20－30分钟再移入培养箱。这样细胞一般都能长的很均匀。当然，前提是细胞消化的很好。

作者: purrr 时间: 2015-6-9 17:49

之前的经验是一定要先把需要的浓度调整好细胞，然后再种入板中。如果是96孔在中途要再次混匀，不然细胞又会沉淀一点的。至于楼主建议的沿一侧壁加还没有试过，过几天试试。

作者: mickeylin 时间: 2015-6-9 17:50

谢谢LZ的经验，我以前也是摇啊摇的，下次试试这个方法。

作者: abc816 时间: 2015-6-9 17:50

种板时用培养液调细胞浓度，然后再种啊，最后补齐培养液就可以了。
我比较过，其实用排枪和单独加，排枪效果好一点，把细胞悬液放在培养皿里，每次吸引时都要好好吹打一番。

作者: bs4665 时间: 2015-6-9 17:50

种六孔板要在内测边缘缓慢加入，加完后20分钟内尽量避免移动，如果细胞不均匀的话可水平震动培养液是细胞重新分散，再静置20分钟，后移入培养箱。

作者: 米西11米西 时间: 2015-6-9 17:51

谢谢了！刚好准备在96孔板上种细胞，可以试一下。

作者: yizhi 时间: 2015-6-9 17:51

谢谢分享，也要注意加入每孔前都要吹打均匀

作者: 芙蓉宫主 时间: 2015-6-9 17:51

种六孔板要在内测边缘缓慢加入，加完后20分钟内尽量避免移动，如果细胞不均匀的话可水平震动培养液是细胞重新分散，再静置20分钟，后移入培养箱。
请问在室温静止20min 会不会影响细胞生长啊？

作者: gogo 时间: 2015-6-9 17:51

我听过两个在国外有多年试验经验的人分别介绍这种方法，老方法会使皿中间的细胞少，摇的时候，前后摇过，等液体不动了，再左右摇。新方法一定要慢加，细胞要稀释的匀，种了几孔后要再次混匀。

作者: BUK 时间: 2015-6-9 17:52

不错，我要试一下。我做淋巴细胞，以前总是很不均匀的。

作者: jude 时间: 2015-6-9 17:52

越是摇晃，细胞越容易堆积。

作者: greenbee 时间: 2015-6-9 17:52

谢谢分享，如果要用单个的培养皿养细胞，这种方法也适应吗？以前用培养皿养细胞，接种后分布总是不均匀。

作者: #甜# 时间: 2015-6-9 17:53

用力摇几下就匀了，够用力就行

作者: mimili_901 时间: 2015-6-9 17:53

我有一个问题想请教LZ啊，你说的这种方法种96孔板很好的话，那24孔板和6孔板之类的大一些的呢？怎么样做才能做到较均一呢！这种方法适合吗？O(∩_∩)O谢谢
24孔板和6孔板我也种过，不过对细胞均匀要求不是太高，也就没怎么要求，发现种的时候细胞总是中间堆积，可能是孔比较大，孔内的液体很容易晃动，即使种的时候均匀了，取放板子的时候也难免会晃动板子，大家如果有这方面经验的话拿出来分享一下啊！

作者: mimili_901 时间: 2015-6-9 17:54

新方法要不要再孔里先加些培养基？
不用加培养基，只用把稀释好的细胞直接加进96孔板就可以了。

作者: mimili_901 时间: 2015-6-9 17:54

还有一个问题就是LZ说的这种新方法用排枪做还行啊？还是需要一个一个孔的加啊！谢谢
排枪没有试过，我用的就是普通的抢，你可以试试！

作者: NBA 时间: 2015-6-9 17:55

24孔板和6孔板我也种过，不过对细胞均匀要求不是太高，也就没怎么要求，发现种的时候细胞总是中间堆积，可能是孔比较大，孔内的液体很容易晃动，即使种的时候均匀了，取放板子的时候也难免会晃动板子，大家如果有这方面经验的话拿出来分享一下啊！

===============================================================================================================

关于这个问题上面回帖中有个站友写的:种六孔板要在内测边缘缓慢加入，加完后20分钟内尽量避免移动，如果细胞不均匀的话可水平震动培养液是细胞重新分散，再静置20分钟，后移入培养箱。

作者: ldh 时间: 2015-6-9 17:55

是呀，请问ＬＺ，如何避免取放板子时，细胞的晃动呢，如果如某战友提到加完后，放置20分钟，再移动，会不会影响细胞正常生长，我个人的小经验是从侧壁缓慢匀速加入细胞，只要细胞悬浮分散的好，基本很少出现扎堆现象。移动板子对细胞的影响比较小（正常的取放，当然了，动作要轻柔）

作者: veiwu 时间: 2015-6-9 17:55

谢谢，先学习了。到用到96孔板时再应用下。谢谢楼主了！！！

作者: 冰儿0109 时间: 2015-6-9 17:56

还是用力摇几下比较好。是一侧加入的，但是一般是50ul，不晃的话培养基就会不均匀，等过一段时间才能盖住底部。最关键还是之前的细胞要均匀，这样一般加进去都是比较均匀了。
另外，24和6孔板，可以前后左右晃，晃得频率要一致，就是试下晃几下，左右晃几下，交替着并且频率一致。还有一种方法可以试一下，就是可以平着画8字。效果都不错。

作者: ns5fan 时间: 2015-6-9 17:56

做实验将近一年，从丁香园上学到了很多东西，感谢很多战友给予的帮助，现将我在实验过程中的一点儿小小的经验拿出来和大家分享，希望对种96孔板子的战友有帮助。
刚开始用96孔板种细胞时细胞总是分布不均匀，第二天就会发现有些地方出现堆积性生长，而还有不少地方细胞则很稀疏，细胞密集的地方因细胞与细胞之间的接触抑制影响细胞的生长，这样就很难评价干预因素对细胞的作用，因此将96孔板种均匀也是进行后续实验的前提，现将我以前用的老办法和最后用的新方法比较一下，以让大家看看各自优缺。
1、老方法：这个是从丁香园上学的，就是种过板子后，用手将96孔板平拿起，左右晃动几下，然后再前后晃动几下，不过这种方法5个复孔中总有2-3个孔中细胞分布不均匀，多数情况下是孔的中间出现成堆分布，为此苦恼了一阵子。还又一次见一师姐将种好的板子放在摇床上摇了几分钟，结果更惨了，细胞全部跑到中间了。
2、新方法：这种方法简直是太好了，种的很均匀。先用抢将吹打均匀的细胞吸起来，让后将枪头紧贴着孔的一侧壁（注意枪头的尖不要接触孔底），然后将枪头中的细胞缓缓的打下去，种好之后千万不要摇晃板子，直接放到显微镜下看就可以了，此方法可以说是100%的有效吧。
希望对大家有帮助。
......

=====================================

嗯，94传说中的形成涡流，让细胞自然沉降。

作者: 11_hjx 时间: 2015-6-9 17:57

原来是这样啊，以前总种不匀，谢谢了！

作者: bring 时间: 2015-6-9 17:57

最近的确遇到铺板不均匀的问题。下次要试试这个方法了。多谢了Smile

作者: luoliqiong 时间: 2015-6-9 17:57

谢谢~，种96孔时好好实验一下~

作者: tudou85 时间: 2015-6-9 17:58

我昨天也试了第二种方法就是将细胞缓缓的打下去，可是却很容易产生了气泡，楼主您做的时候出现过这个问题吗，是怎么解决的呢？

作者: kulee 时间: 2015-6-9 17:58

这个得学习一下了，看来只有个人去把握了。我种的6孔板也是中间有堆积的现象，真得好好学习学习，摸索摸索。

作者: 吉吉0120 时间: 2015-6-9 17:58

新方法不错，加板时，手里拿着板影响吗？平方时不太好加

作者: langlang 时间: 2015-6-9 17:58

还是关心，在外面静止时间长了会不会对细胞有影响~特别是冬天

作者: vvmmoy 时间: 2015-6-9 17:59

去试试，看看效果怎么样

作者: zbboom 时间: 2015-6-9 17:59

过几天要铺板，试一下。
我以前是从中间加细胞，铺完再前后左右晃动，结果细胞都聚在边缘了。

作者: jude 时间: 2015-6-9 17:59

各位同仁，关于养细胞这一块的实验发SCI的话，有哪些杂志可以投啊！非常感谢啊

作者: one 时间: 2015-6-9 18:00

种了几次12孔板都不均匀，中间有一堆很密，正好试试这个方法，而且也很关心在外面静置20min对细胞生长有影响吗？

作者: wu11998866 时间: 2015-6-9 18:00

初次接触细胞~~什么都不懂~~~
在做MTT，如果测试时仪器可以多点检测求均值，是不是就不用太在乎细胞的均匀度？

作者: remonte 时间: 2015-6-9 18:00

本人也种96孔板比较有经验。和楼主的方法类似，但是前提是在加入混匀的细胞悬液前用少量的培养液铺好板，减少表面张力，那样加入细胞悬液后细胞就会均匀流向板的每一个部分，稍微静置就可以放入培养箱。绝对均匀！

作者: dodoit 时间: 2015-6-9 18:01

谢谢楼主了，刚要开始做96孔板，这个经验相信有非常大的用处。

作者: xue258 时间: 2015-6-9 18:02

本人也种96孔板比较有经验。和楼主的方法类似，但是前提是在加入混匀的细胞悬液前用少量的培养液铺好板，减少表面张力，那样加入细胞悬液后细胞就会均匀流向板的每一个部分，稍微静置就可以放入培养箱。绝对均匀！

=============================================================================================================

在加入混匀的细胞悬液用多少培养液铺板呀我做了好长时间实验了铺96孔板太让人头疼了总是中间特别稀你一般每孔铺多少细胞呀？谢谢了

作者: chengjie79 时间: 2015-6-9 18:03

24孔板都没种好，总是周围多，中间少

作者: chengjie79 时间: 2015-6-9 18:03

用振荡器一震不就都哦了吗，很均匀哦

作者: tewank 时间: 2015-6-9 18:04

QUOTE:

原帖由 chengjie79 于 2015-6-9 18:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

用振荡器一震不就都哦了吗，很均匀哦

你试过震荡96孔板吗？100ul会不会洒出来？

作者: tewank 时间: 2015-6-9 18:04

还有个人认为，解决边缘效应和铺板不匀的方法就是增加培养基的量，96孔板正准备尝试，以前做24孔板，6孔板都是，增加培养基后，比如6孔板加1.5-2ml培养基，左右来回摇两下就匀了，就好像你把一把沙子放在盘子里怎么都摇不匀，放在锅里多加点水两下就匀了。
因为以前为了省培养基出现过这种问题，后来解决了。不知道和大家讨论的问题是否一样。
另外不知道96孔板是否也可以用此方法提高铺板成功率，准备试一下。

作者: lorri 时间: 2015-6-9 18:04

学习了。疑问也是，把细胞放置20分钟再送回孵箱，不会影响细胞生长状态吗？

作者: ztonyc 时间: 2015-6-9 18:04

我用普通的排枪，先在50mlEP管里不停地吹打，打到20~30次左右，然后用移液枪加到皿里，再从皿里六个六个地用排枪铺板，铺板的时候用200u的液体去铺，貌似还行，不过我就做MTT，对细胞均匀性要求不是太高。。。

作者: sistis 时间: 2015-6-9 18:05

我听过两个在国外有多年试验经验的人分别介绍这种方法，老方法会使皿中间的细胞少，摇的时候，前后摇过，等液体不动了，再左右摇。新方法一定要慢加，细胞要稀释的匀，种了几孔后要再次混匀。

====================================================

请问如果种完就需要马上加药该怎么办？我的是悬浮细胞……

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)