分析测试百科

标题: 【求助】高极性多肽纯化 [打印本页]

作者: 明天的明天 时间: 2015-6-24 09:56 标题: 【求助】高极性多肽纯化

高极性多肽纯化
由于目前我们一般都是采用RP-HPLC来进行多肽分离纯化，包括分析，但是对于某些小肽，因为极性太高，在RP上没有保留，因此纯化也是很大的问题，如果采用其他方法，象离子交换，凝胶，效率差，纯度难以达到要求，如果采用CN-NH2柱，价格太贵，大家有什么好办法可以工我们参考吗？
有没有效率很高的凝胶柱，带正相吸附的那种？

作者: cj_mondy 时间: 2015-6-24 09:57

不知是哪种小肽. 一般强极性的肽用C18反相色谱是很合适的. 希望和你交流

作者: xue258 时间: 2015-6-24 09:57

小肽呀，不是大分子，凝胶应该不大合适呀。你用硅胶或者细粒度离子交换树脂看看，也许有特效。

作者: 明天的明天 时间: 2015-6-24 09:58

我用凝胶是用来脱盐的，其实也可以不用他的主要功能，而收集他的杂质成分。
我也打算用阴离子交换树脂试试看的。
至于反相的柱子，填料比较贵，而且应该不适合以后工业化生产，所以在其他方法没有确认行不通的时候还是不准备用制备液相做反相的。

作者: youyou99 时间: 2015-6-24 09:58

CN 和NH2 不应该贵很多呀.

作者: 3N4G 时间: 2015-6-24 10:07

我也是做小肽的，分子量在1100左右，我也是用RPC做的，效果不错。
希望能跟您互相学习。

作者: whitesheep 时间: 2015-6-24 10:08

我做过小肽,问题差不多,但小肽合成后的纯度相对比较高,如做凝胶比较好些图片点击可在新窗口打开查看

作者: langlang 时间: 2015-6-24 10:08

我也是做小肽纯化的，我们一般使用C18的反相填料，效果很好，你可以试试。

作者: langlang 时间: 2015-6-24 10:09

哥哥，你是做生长抑素的吧？呵呵呵？要除盐？是不是TFA？

作者: any333 时间: 2015-6-24 10:12

生长抑素不就是14肽么?
用RPC纯化很好啊,我做过,效果很好啊!
楼主你做的什么小肽啊,五肽都可以用RPC啊.

作者: woshi 时间: 2015-6-24 10:12

看看资料是什么做的，如果没有制备色谱就是最好的选择，因为成本是自己定的，而且一个公司的产品不是一个产品，有制备色谱的话可以做很多的产品，特别是对于原料加工的产品，生产效率提高很多，成本也不一定比一般的烦琐提取高。

作者: KGZ564 时间: 2015-6-24 10:12

你可以使用C8或者C4的填料,对于强极性的物质保留会好一些.另外孔径的选择也很重要.

作者: woshi 时间: 2015-6-24 10:14

我一直都用Ｃ１８做，效果很好呀，每次能上样１．５～２．０Ｇ，呵呵呵，楼主不知道是做那个肽？五肽那就太简单不过了，要是１４或２８肽的话还有点儿难，而且，２８肽不是每个人都能做出来的，样品用什么来溶就够你想的了

作者: am10 时间: 2015-6-24 10:15

QUOTE:

原帖由 woshi 于 2015-6-24 10:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我一直都用Ｃ１８做，效果很好呀，每次能上样１．５～２．０Ｇ，呵呵呵，楼主不知道是做那个肽？五肽那就太简单不过了，要是１４或２８肽的话还有点儿难，而且，２８肽不是每个人都能做出来的，样品用什么来溶就够你想的了
...

28肽要做到99%是有点难度,不过如果只要求95%的话,应该不难.至于怎么溶解,我想做过多肽纯化的人都知道.

作者: woshi 时间: 2015-6-24 10:19 标题: 回复 #14 am10 的帖子

呵呵呵,那也许是别人想好了你来做的吧?

作者: whitesheep 时间: 2015-6-24 10:20

哦,有很多人做28肽吗?13楼的建议很好;样品用什么来溶对大家应该不是个大问题,只是后处理的设备有时让人烦心,稳定的条件(不侵权处方)不是太好找.

作者: xevin 时间: 2015-6-24 10:20

南京麦科菲公司的亲水型色谱柱适合极性多肽的纯化，类似于正相吸附。
他们的联系方式：025－83532182 info@mkf.cn cuturl('www.mkf.cn')

作者: xevin 时间: 2015-6-24 10:28

忘了问一下，咱们论坛有纯化方面的资料没有？我想学习一下

作者: www.1 时间: 2015-6-24 10:29

我一直都用Ｃ１８做，效果很好呀，每次能上样１．５～２．０Ｇ，呵呵呵，楼主不知道是做那个肽？五肽那就太简单不过了，要是１４或２８肽的话还有点儿难，而且，２８肽不是每个人都能做出来的，样品用什么来溶就够你想的了

=================================================================

28肽是什么啊？14肽又是什么啊？不同的肽纯化方法不一样，溶解方法也不一样

作者: www.1 时间: 2015-6-24 10:40

由于目前我们一般都是采用RP-HPLC来进行多肽分离纯化，包括分析，但是对于某些小肽，因为极性太高，在RP上没有保留，因此纯化也是很大的问题，如果采用其他方法，象离子交换，凝胶，效率差，纯度难以达到要求，如果采用CN-NH2柱，价格太贵，大家有什么好办法可以工我们参考吗？
有没有效率很高的凝胶柱，带正相吸附的那种？

-------------------------------------------------------------------------------------------

你说的是很亲水的短肽吧？我可以告诉你一些简单的方法去试试
1.上样体积要尽量的小，这很关键；
2.可以适当加大TFA的浓度；
3.不知道你有没有YMC的C18，它对这种肽相对来说好一点。

作者: www.1 时间: 2015-6-24 10:41

各位,我是做RGD的,三肽极性太强,在RPHPLC上怎么检测,用什么流动相

作者: TAT 时间: 2015-6-24 10:41

你说的是很亲水的短肽吧？我可以告诉你一些简单的方法去试试
1.上样体积要尽量的小，这很关键；
2.可以适当加大TFA的浓度；
3.不知道你有没有YMC的C18，它对这种肽相对来说好一点。

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

同意第一点，但是第二点小生有点儿意见：如果加大了TFA的量，那么，到最的的除盐难度会加大的，而且，我一直都不用YMC的填料，但是效果也很好

作者: xevin 时间: 2015-6-24 10:42

大肽或小肽的纯化还是要考虑肽的性质，极性强用疏水性能的C18分离就未必合适。

作者: gmjghh 时间: 2015-6-24 10:42

呵呵！thymosin我可以做到100%的纯度，不过收率不高！！

作者: whitesheep 时间: 2015-6-24 10:42

QUOTE:

原帖由 gmjghh 于 2015-6-24 10:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
呵呵！thymosin我可以做到100%的纯度，不过收率不高！！

如果收率不高那还有什么难度和实际意义？

作者: veiwu 时间: 2015-6-24 10:43

请教:固相合成醋酸奥曲肽后,如何从树脂上切割下来还原,氧化,纯化这一系列工艺。我是指正式生产工艺。

作者: whitesheep 时间: 2015-6-24 11:03

28我做多了，技术稳定，不吹牛，但是和公司签了合同技术保密，咱要有职业精神吗
不过要想和我交流请流言，能帮我尽量帮，大家相互学习吗？共同发展

作者: dior 时间: 2015-6-24 11:03

大肽或小肽的纯化很容易

作者: dog002 时间: 2015-6-24 11:04

我是做多肽纯化的，我们一般使用C18的反相填料，效果很好图片点击可在新窗口打开查看

作者: 菠萝菠萝蜜 时间: 2015-6-24 11:04

高速逆流色谱可以分离纯化极性或非极性物质，当然也包括蛋白质

作者: any333 时间: 2015-6-24 11:04

哈哈，看来不光是疏水肽，极性太强的peptide也是很大问题呀！

物极必反这个词果然很有道理。

你做过HH这个二肽或者HHH这个三肽吗？够亲水吧？

其实除了换不同填料的柱子外，解决的办法还有很多种的。

欢迎沟通Email： Kromasil@yahoo.cn

Kromasil 官方网站cuturl('www.kromasil.com')

作者: www.1 时间: 2015-6-24 11:05

尝试使用下二醇基硅胶，二醇基硅胶的吸附性比硅胶弱，因此可以用于大极性化合物分离。

作者: xyw5 时间: 2015-6-24 11:05

需要有具体的内容才能帮你，有很多办法可以来处理这个问题，但还是要具体情况具体分析

多肽纯化是经验性很强的工作

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)