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标题: 【求助】这几个抗体相关产品的研发是否有前景 [打印本页]

作者: baidukk 时间: 2015-7-8 17:44 标题: 【求助】这几个抗体相关产品的研发是否有前景

相关疾病：
1. 全人源化抗破伤风毒素的中和性单克隆抗体：scFV抗体，哺乳动物细胞表达体系表达后纯化，已在实验室完成小鼠实验，保护能力很强，同等剂量毒素注入小鼠腹腔，两小时注入单抗或其他对照产品，对照组4天内全死，实验组一周后仍然存活。国内外其他同类产品是免疫马提取血清或者从人身上提取血清而得，本产品为全人源化基因序列，体外哺乳动物细胞系中表达，实验室产量5-10g/L培养体系。
2. 去岩藻糖的抗CD20 scFV-hIgG1Fc单抗：虽然市场上美罗华一枝独秀，国内也有2-3家在做，部分已完成IV期临床试验，但是这些产品都不是去岩藻糖的单克隆抗体。去岩藻糖的单克隆抗体优势在于同等剂量情况下，EC50可以提升100-500倍，因此可以大大降低生产成本，为抗体类药物研究的新方向，因此Roche公司目前正全球推美罗华的升级产品，部分去岩藻糖的人源化CD20单抗，GA101。本室制备的去岩藻糖的抗CD20 scFV-hIgG1Fc单抗同样是在哺乳动物表达体系中进行的，实验室产量5-10g/L培养体系。
3. CAR-T细胞：在众多CAR-T细胞系列中，针对B细胞的抗CD19 CAR-T细胞在对应疾病的使用上疗效最佳，且安全性相比其他几种为最好的。目前国内细胞免疫治疗市场基本由背后几个跨界的风投所掌握，医生只是赚钱的工具和枪，疗效在此不做评价。CAR-T是目前免疫治疗领域最火热的产品之一，本室已经制备出相关细胞，功能明确。曾与做免疫治疗的风投谈过，人家的意见是只要不死人，就可以上，疗效不在考虑范围中，但CAR-T应用中国外已有报道，会有少量部分患者死亡，但是请看清前提，目前CAR-T治疗是新方法，国外也在摸索中，另外所选肿瘤病例都是复发难治，几乎也是死路一条的患者。
以上三个产品，欢迎大家讨论，给点意见，看看有没有发展前途，如果有，是自己去走申报注册的路子还是找风投或者药企合作。屌丝做点科研不容易，没有平台，没有较多经费，全靠自己的一点小课题经费在硬撑，每年还自掏腰包2-4万元，不为别的，一是因为自己喜欢，二是因为作为肿瘤内科医师，领导常念叨，要搞点可以治疗肿瘤的东西出来，在以后自己得肿瘤的时候，可以自己把自己搞定就好了。
园子里面高人多，欢迎合作，欢迎交流，欢迎指导！

作者: quiqui008 时间: 2015-7-8 17:44

给楼主赞一个，单抗药肯定有前景，不过任重而道远，不是一家小公司或者研究所能独立完成的，需要大量的资源，从上游到下游浩浩荡荡，建议楼主广泛寻找制药公司和研究所合作伙伴，发挥自己的优势，让专业的人做专业的事。

作者: bananapeople 时间: 2015-7-8 17:45

相关疾病：
第一个：国内其他企业可能更关注癌症免疫抑制的抗体，长期用药才能赚钱。
第二个：国内仿制的CD20抗体中有ADCC增强的。但是现在刚出来的小分子药物依鲁替尼已经完胜CD20抗体了，只要定价合理，未来CD20抗体一定会受到很大冲击。
第三个：很有前途但是太难，美国基本上都是几个科学大牛在做的，应用起来也不是很方便。
以上我个人的拙见。LZ作为临床医生做这么多很不容易了，实验室转化任重道远啊

作者: glass 时间: 2015-7-8 17:45

关注第二个品种，有没有做药效试验啊？国内表达量做到5-10g/L还真不错

作者: avi317 时间: 2015-7-8 17:46

楼主是医生吗？在临床之余还能做出这么多工作啊，让药企研发部动辄几十人的团队汗颜啊。

作者: taoshengyijiu 时间: 2015-7-8 17:46

前面两个的产品应该会有人有兴趣，不过有点需要确认，这个表达量是如何检测的，你确定是5-10g/L？我很怀疑！

作者: lagua123 时间: 2015-7-8 17:46

实验室产量是怎么达到5-10g的？

作者: baidukk 时间: 2015-7-8 17:47

前面两个的产品应该会有人有兴趣，不过有点需要确认，这个表达量是如何检测的，你确定是5-10g/L？我很怀疑！

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没有问题，尽情怀疑，我们根据PCD测算过，经单克隆筛选稳定表达后也做过测量的。

作者: baidukk 时间: 2015-7-8 17:48

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原帖由 lagua123 于 2015-7-8 17:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

实验室产量是怎么达到5-10g的？

这个，呵呵，算是核心秘密吧，毕竟历经三年摸索出来的。

作者: baidukk 时间: 2015-7-8 17:48

QUOTE:

原帖由 avi317 于 2015-7-8 17:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼主是医生吗？在临床之余还能做出这么多工作啊，让药企研发部动辄几十人的团队汗颜啊。

呵呵，药企团队里面有既精通临床某一个专业和基础研究的，年读文献过千篇（中文不算），同时耐得住寂寞，禁得住诱惑，默默奉献，视患者生命为第一、做老百姓用得起的放心药、做有效果的药物、不以做出首仿为骄傲、努力做原创，而不是全靠医药代表天天围着医生转来推销的么？当然，这个不怪药企研发团队，因为我所接触过的药企里面，研发大多数就不是受到重视的一个地方，投入也少，产出少也是自然。
所提及的的药物研发只是我工作的一部分，还有临床，每天还有上百只转基因老鼠养在动物房，还有基础研究，还有课题申请......再说一遍，不是炫耀，只是兴趣使然。

作者: baidukk 时间: 2015-7-8 17:49

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原帖由 bananapeople 于 2015-7-8 17:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

相关疾病：
第一个：国内其他企业可能更关注癌症免疫抑制的抗体，长期用药才能赚钱。
第二个：国内仿制的CD20抗体中有ADCC增强的。但是现在刚出来的小分子药物依鲁替尼已经完胜CD20抗体了，只要定价合理，未来CD20抗体一定会受 ...

华药做的也是全人源单抗、哺乳动物表达体系生产的？

作者: baidukk 时间: 2015-7-8 17:49

相关疾病：
淋巴瘤

Ibrutinib这个药物，是否能够完胜CD20，尚有待考证，因为一家做的MCL，一家做的CLL，但是是否在DLBCL、FL、BL以及HL等上面发挥功效，还需要更多的临床试验，当然可以预测疗效不会太长。但有一点需要注意，Btk的阻断，不是都是好事情，其副作用有待考证，再有，Btk+/-表型的小鼠，与其他小鼠如Blnk+/-杂交产生的子代小鼠会发生淋巴瘤的。因此，其疗效虽然好，但是副作用等等看才知道。
CAR-T虽然有不方便的地方，但是其疗效超乎目前几乎所有的细胞免疫治疗。值得做。起码病人用了，是可以看到疗效，如果使用得当，一大部分是可以完全治愈的。

作者: ladyhuahua 时间: 2015-7-8 17:49

楼主前面两个产品用的哺乳动物细胞系是CHO细胞吗？实验室能达到这个水平确实不简单。
国内的免疫治疗市场太混乱了，正如楼主所说，基本不死人就可以，疗效都是靠吹的，没有监管。
现在异体移植的细胞治疗才归CFDA管，这个是需要审批的，未批准前也不能收费；像DC-CIK,CAR-T这种技术都是自体细胞改造的，仅作为第三类医疗技术管理，能收钱，疗效又得不到保障。除非这个市场的准入机制规范化起来，否则CAR-T这种虽然疗效好的方法在患者和不靠疗效靠忽悠的医疗市场面前不会有太大优势。

作者: bangqi_k 时间: 2015-7-8 17:50

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相关疾病：
淋巴瘤

Ibrutinib这个药物，是否能够完胜CD20，尚有待考证，因为一家做的MCL，一家做的CLL，但是是否在DLBCL、FL、BL以及HL等上面发挥功效，还需要更多的临床试验，当然可以预测疗效不会太长。但有一点需要注意，Btk的阻断 ...

相关疾病：
淋巴瘤

6月的NEJM上登出的Ibrutinib和Ofatumumab在CLL上头对头( cuturl('http://d.dxy.cn/preview/6429130') ) ，Ibrutinib OS和PFS优于抗体比较明显。Ibrutinib在MCL上也不会差，毕竟在这个适应症上拿的FDA breakthrough。
是否会导致淋巴瘤还得看在人身上长期的结果吧。

作者: 9900 时间: 2015-7-8 17:50

没有问题，尽情怀疑，我们根据PCD测算过，经单克隆筛选稳定表达后也做过测量的。

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PCD是根据总蛋白表达量和细胞IVCD算出来的，LZ怎么能由PCD反推蛋白产量呢？
您是在多大的发酵罐里做的细胞培养？还是摇瓶？这个总可以分享下吧

作者: baidukk 时间: 2015-7-8 17:51

华药的全人源狂犬抗体的现在做到二期了，表达系统可能是CHO。他们这个和Crucell的很像，Crucell二期临床做的是和疫苗联用，所以抗体能否单用效果未知啊

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相关疾病：
破伤风

我这个是做的抗破伤风的，呵呵。

作者: baidukk 时间: 2015-7-8 17:51

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相关疾病：
淋巴瘤

6月的NEJM上登出的Ibrutinib和Ofatumumab在CLL上头对头( cuturl('http://d.dxy.cn/preview/6429130') ) ，Ibrutinib OS和PFS优于抗体比较明显。Ibrutinib在MCL上也不会差，毕竟在这个适应症上拿的FDA breakthrou ...

副作用真的值得期待，毕竟是新药。

作者: baidukk 时间: 2015-7-8 17:52

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原帖由 9900 于 2015-7-8 17:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
没有问题，尽情怀疑，我们根据PCD测算过，经单克隆筛选稳定表达后也做过测量的。

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PCD是根据总蛋白表达量和细胞IVCD算出来的，LZ怎么能由PCD反推蛋白产量 ...

药瓶，批量生产肯定会降低不少。
说了，没钱，只能在实验室搞，有个发酵罐，也没敢上。再搞，就是求包养也挣不出养细胞的钱来。何况，人已老成书呆子了，除了看点专病，做点小实验，无可取之处了。

作者: baidukk 时间: 2015-7-8 17:52

还有个抗眼镜蛇毒素的单抗和PLA2的单抗，预计需要一个月左右做出来。

作者: baidukk 时间: 2015-7-8 17:53

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原帖由 ladyhuahua 于 2015-7-8 17:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼主前面两个产品用的哺乳动物细胞系是CHO细胞吗？实验室能达到这个水平确实不简单。
国内的免疫治疗市场太混乱了，正如楼主所说，基本不死人就可以，疗效都是靠吹的，没有监管。
现在异体移植的细胞治疗才归CFDA管，这个是需要 ...

是的。
DC-CIK和CAR-T不在一个层面，不要放在一起评价，呵呵，当然有例外是Heslop小组做的DC-CIK，也是人家20年以上做出来的，疗效与传统DC-CIK也不在一个层面上。

作者: tianmei001 时间: 2015-7-8 17:56

GA101不仅是ADCC好，而且它是type2 CD20抗体可以有特殊的PCD。
CAR-T 效果很好，但毒性也大。我有些想法调控的更好些。

作者: tianmei001 时间: 2015-7-8 17:57

scFV-Fc 理化性质要确认好。一般比天然形式难预料。全人抗体是临床优势的很小部分。人源化就很好了。

作者: uaubc 时间: 2015-7-8 17:58

求扫盲如何算出蛋白产量。。。

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药瓶，批量生产肯定会降低不少。说了，没钱，只能在实验室搞，有个发酵罐，也没敢上。再搞，就是求包养也挣不出养细胞的钱来。何况，人已老成书呆子了，除了看点专病，做点小实验，无可取之处了。

作者: 大尾巴 时间: 2015-7-8 17:58

再进来叹一下5-10g/L的表达量。一般来讲摇瓶的表达量都会比后期的生产工艺低的，毕竟后期的工艺开发一般都会采用fed培养，细胞的生长周期也会更长，细胞密度也会更大。但是之前的经验是，如果细胞的表达量过高的话，细胞的生长速度会比较慢，产生的蛋白翻译后修饰会不完全。所以筛细细胞株并不是要越高越好，盲目追求表达量的，要综合产品的质量和细胞的生长特性。
其次，细胞株的表达量即使很高对于产品的成本也不会降低太多，后期的蛋白纯化仍然会花费很高。相比较于培养基和培养体系，蛋白纯化的填料更加昂贵。
仍然希望大家来继续讨论，给自主创新项目加油！

作者: ending 时间: 2015-7-8 17:59

单抗目前很多药企都在做，关键是看速度和质量。

作者: tewank 时间: 2015-7-8 18:10

再进来叹一下5-10g/L的表达量。一般来讲摇瓶的表达量都会比后期的生产工艺低的，毕竟后期的工艺开发一般都会采用fed培养，细胞的生长周期也会更长，细胞密度也会更大。但是之前的经验是，如果细胞的表达量过高的话，细胞的生长速度会比较慢，产生的蛋白翻译后修饰会不完全。所以筛细细胞株并不是要越高越好，盲目追求表达量的，要综合产品的质量和细胞的生长特性。
其次，细胞株的表达量即使很高对于产品的成本也不会降低太多，后期的蛋白纯化仍然会花费很高。相比较于培养基和培养体系，蛋白纯化的填料更加昂贵。
仍然希望大家来继续讨论，给自主创新项目加油！
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除去浓缩补料外，摇瓶培养很大的瓶颈是中后期溶氧跟不上，导致了细胞状态肯定不好。楼主的5-10g/L定量肯定是比较粗略的，精确测表达应该是用HPLC
我特别认同您说的关于“蛋白翻译后修饰”的观点，如果一个细胞蛋白翻译量很大，但内质网、高尔基体的修饰能力有限，会导致胞内聚集未折叠蛋白，太多的话会导致细胞凋亡，而且对下游纯化的压力也很大

作者: wawa 时间: 2015-7-8 18:11

是的。
DC-CIK和CAR-T不在一个层面，不要放在一起评价，呵呵，当然有例外是Heslop小组做的DC-CIK，也是人家20年以上做出来的，疗效与传统DC-CIK也不在一个层面上。

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求heslop的经典文献名称，想学习学习，谢谢

作者: memory 时间: 2015-7-8 18:11

除去浓缩补料外，摇瓶培养很大的瓶颈是中后期溶氧跟不上，导致了细胞状态肯定不好。楼主的5-10g/L定量肯定是比较粗略的，精确测表达应该是用HPLC
我特别认同您说的关于“蛋白翻译后修饰”的观点，如果一个细胞蛋白翻译量很大，但内质网、高尔基体的修饰能力有限，会导致胞内聚集未折叠蛋白，太多的话会导致细胞凋亡，而且对下游纯化的压力也很大

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这个观点不是很赞同的，首先我们不知道细胞内的内质网、高尔基体的修饰能力到底有多高（细胞株能承受5g/L，10g/L还是20g/L表达？）。具体项目需要具体分析的，质量是第一的前提下能做得更高是一种挑战。
我相信下游纯化压力也许是暂时的，当他以后面临的市场都是10g/L以上我想下游纯化工艺耗材也会做出相应改进的否则可能要被淘汰了。总之我们也需要不断超越

作者: kewanqi2011 时间: 2015-7-8 18:12

可以考虑合作，这些项目我们都有进行

作者: zhenxin 时间: 2015-7-8 18:12

这个观点不是很赞同的，首先我们不知道细胞内的内质网、高尔基体的修饰能力到底有多高（细胞株能承受5g/L，10g/L还是20g/L表达？）。具体项目需要具体分析的，质量是第一的前提下能做得更高是一种挑战。
我相信下游纯化压力也许是暂时的，当他以后面临的市场都是10g/L以上我想下游纯化工艺耗材也会做出相应改进的否则可能要被淘汰了。总之我们也需要不断超越

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对CHO 细胞翻译后修饰的认识的确不是很清楚，近来也有不少文章开始关注这一方面，Applied Microbiology and Biotechnology今年登了一篇文章，作者通过在CHO内异位表达若干分子伴侣后，抗体产量有了明显的提升；另外未折叠蛋白反应（unfolded protein response）也成为了CHO研究的一个方向，这在CHO蛋白组学及miRNA研究的文章里面都有些许提示

作者: ##蒙奇奇 时间: 2015-7-8 18:13

楼主的转基因鼠抗体分子筛选平台筛出的全人抗体分子还是要交专利费的吧。另外现在细胞抗体滴度达到5-10g/L也不算太罕见，质量怎样，结构全面确证了没有?

作者: ##蒙奇奇 时间: 2015-7-8 18:14

项目II中抗体分子与CD20结合部位是否与美罗华相同？美罗华作为一个早期人鼠嵌合抗体还能存在这么多年，其实还是有道理的，不要认为作为做了人源化，或全人抗体或敲除了岩藻糖就一定是一件好事。

作者: yayya 时间: 2015-7-8 18:15

再进来叹一下5-10g/L的表达量。一般来讲摇瓶的表达量都会比后期的生产工艺低的，毕竟后期的工艺开发一般都会采用fed培养，细胞的生长周期也会更长，细胞密度也会更大。但是之前的经验是，如果细胞的表达量过高的话，细胞的生长速度会比较慢，产生的蛋白翻译后修饰会不完全。所以筛细细胞株并不是要越高越好，盲目追求表达量的，要综合产品的质量和细胞的生长特性。
其次，细胞株的表达量即使很高对于产品的成本也不会降低太多，后期的蛋白纯化仍然会花费很高。相比较于培养基和培养体系，蛋白纯化的填料更加昂贵。
仍然希望大家来继续讨论，给自主创新项目加油！
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的确，抗体的质量才是宗旨，量再高，为了与仿制药一致，多余的酸碱成分在纯化时是被去掉的，同时酸碱成分的增加也会给下游纯化带来负担，我们做的一个项目，放大到50L时，碱性成分变多了，又得摸索除去碱性成分的工艺，纯化填料的确耗钱，1LProtein A十几万；另外，国内能达到5g的应该寥寥无几，还有，5-10g这个范围是不是太大了点。

作者: yayya 时间: 2015-7-8 18:16

除去浓缩补料外，摇瓶培养很大的瓶颈是中后期溶氧跟不上，导致了细胞状态肯定不好。楼主的5-10g/L定量肯定是比较粗略的，精确测表达应该是用HPLC
我特别认同您说的关于“蛋白翻译后修饰”的观点，如果一个细胞蛋白翻译量很大，但内质网、高尔基体的修饰能力有限，会导致胞内聚集未折叠蛋白，太多的话会导致细胞凋亡，而且对下游纯化的压力也很大

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我们做产量分析时HPLC和重力柱都做，然后比较数据。

作者: dreaming 时间: 2015-7-8 18:16

这个观点不是很赞同的，首先我们不知道细胞内的内质网、高尔基体的修饰能力到底有多高（细胞株能承受5g/L，10g/L还是20g/L表达？）。具体项目需要具体分析的，质量是第一的前提下能做得更高是一种挑战。
我相信下游纯化压力也许是暂时的，当他以后面临的市场都是10g/L以上我想下游纯化工艺耗材也会做出相应改进的否则可能要被淘汰了。总之我们也需要不断超越

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嗯，确实目前还不能对细胞的修饰能力做定量。我之前听一个从安进回来的大牛说，他在安进做一个单抗项目，悬浮培养，单抗产量能达到20g/L，质量上没有问题。
国内细胞表达水平，与国际顶尖水平还是有一定的距离，任重道远，同志们！

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