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标题: 【转帖】如何杀灭所谓的”黑胶虫“ [打印本页]

作者: wu11998866 时间: 2015-7-11 15:28 标题: 【转帖】如何杀灭所谓的”黑胶虫“

尊敬的版主，各位战友：
你们好。在我发这份帖子的时候我还在犹豫，是否应该将我的经验如实地告诉给大家，因为所谓的黑胶虫污染十分普遍，难以消除，很多人谈黑色变，我究竟有怎样的方法消灭黑胶虫，我的观点和方法是否能得到大家的认可，无论怎样，我相信我的经验绝对值得大家借鉴，会对那些困扰于所谓的黑胶虫污染的战友们有所帮助。
首先，世界上根本就没有什么黑胶虫，没有人知道黑胶虫的英文名字是什么，没有哪个权威地方能够查到它的来源，没人知道是谁给它命的名。在微生物学上也没听说过有这么一类微生物。那么是谁给它起了个这么一个恐怖的名字呢？答案是一个什么都不懂或者是一个别有用心的人起的名字。
其次，黑胶虫是什么？黑胶虫其实就是一种耐药的细菌！！这在细胞培养中是常遇到的问题，常用的双抗抗菌谱窄，特别是青霉素对一些耐药菌抗菌效力很差，如培养的各种用液被这种耐药菌污染，自然就会在培养液中大量繁殖，这没什么奇怪的。
第三，如何杀灭所谓黑胶虫，根据我的经验换两种抗生素就可以了，用广谱的氨苄或头孢和庆大配合完全可以杀灭这种细菌，在不行就用四环一定可以杀灭的，这是我亲身体验！！听说有的地方还专门卖杀灭黑胶虫的培养基，真是生财有道啊。有些人还说什么国内所有的实验室都被什么黑胶虫污染了，真是别有用心，同志们，当我的细胞被这种菌污染后，我查了很多资料，最后我判断它就是一种细菌，因为它能够被抗生素抑制，我换了抗生素解决了问题，现在我的细胞长得很好。
听说有人把杀灭”黑胶虫“的培养基申请专利了，那我也可以申请了，这可是发明阿，哈哈，可这有什么用呢，为了挣钱，却给国内的科研界带来多大的困惑！
总之，黑胶虫是一种细菌，我们完全可以抑制或杀灭它。

作者: eor 时间: 2015-7-11 15:29

太及时了！正被这个问题困扰，我很同意你的观点，值得一试，多谢！！希望更多的人看到这个帖子！斑竹可以转一下.听说很多养细胞的多有类似的污染。楼主的方法值得借鉴。

作者: 2541 时间: 2015-7-11 15:29

所谓的”黑胶虫“其实是多种，因为没有明确的定义，所以都把看到的“颗粒”称作”黑胶虫“。
目前已知的有：
1、硅颗粒，80年代全球都有报道，后经检测其成分99%为硅，怀疑是液体长期存放在玻璃瓶，导致硅颗粒的产生，所以把血清和培养液的瓶子都改为塑料的。
2、焦虫，寄生在牛的血细胞的寄生虫。
如果是细菌，那就不能称为”黑胶虫“。

作者: jude 时间: 2015-7-11 15:29

比较认同楼主的观点，只是不知道这种“焦虫”会在那些细胞系中寄生的。

作者: wu11998866 时间: 2015-7-11 15:30

尊敬的版主：你好。可否给出几篇文献，我们彻底把这个问题搞清楚，奉献给大家。如果是牛血细胞的寄生虫它的繁殖效率高不，大概几天一代？另外请您把焦虫的英文名字展示一下，我想我们一定能找到克制它的方法。

作者: okhaha 时间: 2015-7-11 15:30

如果是一种细菌，微生物专家应该会认识，除非是目前还没有被发现的新品种（这可能性大吗？）。所以我建议：现在正受该问题困扰的朋友，找找微生物专家给看看，即使是新种，专家应该可以给一个答案。

作者: wu11998866 时间: 2015-7-11 15:31

实践是检验真理的唯一标准，如果大家碰到类似的问题，不妨一试，反正抗生素也不贵，我用的都是进口的，也就100多块钱，够用好一阵子啦！试好了，别忘了回来说一声，如果没效大家再共同想办法，真理总是越辩越明。

作者: 3N4G 时间: 2015-7-11 15:31

那么到底是细菌还是硅颗粒呢??我也被这种东西困扰

作者: baidukk 时间: 2015-7-11 15:31

细菌看得到么？

作者: duchy 时间: 2015-7-11 15:32

QUOTE:

原帖由 baidukk 于 2015-7-11 15:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

细菌看得到么？

细菌是可以看到的,放大400倍就可以看到了.如果那个细菌有鞭毛的话还可以看到在运动,我的细胞污染时我都看见的,而且一般数量较少时就能看到了

作者: duchy 时间: 2015-7-11 15:32

我也同意楼主的意见,因为我的细胞从来都没有被黑胶虫污染,都是细菌或者真菌,所以我也一直不明白为什么老有人说被黑胶虫污染,今天才恍然大悟

作者: any333 时间: 2015-7-11 15:32

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舌癌
我养的舌癌SAS细胞好像也是这种状况，我现在每次操作前都用生理盐水冲洗4遍，当时干净了，但是第二天马上又长满了。能麻烦doctorwyz告诉我具体广谱的氨苄或头孢和庆大或者四环的具体用法吗？比如什么时候加，加多少剂量吗？谢谢！

作者: vivian4123 时间: 2015-7-11 15:33

赞！
请问到底怎么判断是不是黑胶虫？有人告诉我他们是会动的，但是我的细胞里都是一个个的小黑点，不动的。按你的描述，细菌的话应该也是不动的，对吗？

作者: wawa 时间: 2015-7-11 15:33

楼主您好！您所说的黑胶虫到底是什么样的？我的细胞好像也污染了，不知道是不是所谓的黑胶虫，您能把消灭它的具体配方说一下吗？万分感谢！

作者: wu11998866 时间: 2015-7-11 15:33

我用的这个配方：头孢和庆大各50微克/ml，应该会有效果的。四环的毒性较大，量要再减少，具体用多少根据你的实验情况定。祝大家实验顺利。

作者: ssonglikihi 时间: 2015-7-11 15:34

楼主说的那个黑东西是不是很小的黑色的点点啊？放大100倍的时候会看到有黑点点，很小很小，400倍下虽然也看不清，但是能看到那些东西在动，好像在游泳的样子。非常小。

作者: youyou99 时间: 2015-7-11 15:35

我养的293细胞在剧烈操作后（胰酶彻底消化掉瓶内细胞，再从其他瓶的293传入293细胞）出现过比较明显和严重的“小黑点”现象，但我持续培养和观察了一周，发现对细胞生长确实影响不大，我甚至还冻存了一些这种293细胞。如果真是细菌污染，为什么培养基始终较透明，没见到浑浊呢？且细胞的生长状态较好又如何解释？到底是不是细菌，恐怕我们还是要心存一些疑问。

作者: greenbee 时间: 2015-7-11 15:36

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先天性卵巢发育不全综合征
不知道我这个是不是黑胶虫：第一，是黑色的；第二，是会游动的扭动的小虫子样生物！第三，血清过滤后这种污染率降低很多，但偶尔还会污染，比如，今天。呜呜呜~~~~我的细胞啊！

图片附件: 43599445.jpg (2015-7-11 15:36, 55.24 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=34772

作者: bs4665 时间: 2015-7-11 15:36

不知道我这个是不是黑胶虫：第一，是黑色的；第二，是会游动的扭动的小虫子样生物！第三，血清过滤后这种污染率降低很多，但偶尔还会污染，比如，今天。呜呜呜~~~~我的细胞啊！

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个人觉得该图片上黑点就是所谓的'黑焦虫',但本人亦同意前面战友所说,细胞培养中根本没有什么黑焦虫,常见的黑点少数为血清中沉淀颗粒，显得培养基不干净。多数为细菌，就象上面图片中的。我曾在试验中对出现的“黑焦虫”进行培养，接种到LB培炎基上，结果发现有细菌生长。本拟对之进行详细的细菌种属鉴定，但因事放弃了。凭经验推测，主要为革兰氏阳性细菌，所以一般抗生素效果不好，难以清除。由于污染实验室的阳性菌通常致病力弱，所以见到细胞未受较大影响，但“黑点”繁殖太多时，因为竞争营养及产生代谢产物的缘故，细胞状态还是会变差。建议：
1.如果遇到这个东西，细胞能够重新复舒，强烈建议及早弃去污染了的细胞，以免同一培养箱中其他细胞被污染。我在作稳定表达细胞株快成功时遇到过这种情况，恨不忍心前功尽弃，结果加入3倍双抗以及庆大，还是没彻底搞掉，最终结果还是放弃，全部重头再来。
2.如果细胞很快要收集用于检测试验（比如转染后），而黑点不多，细胞状态尚好，可以每日用PBS多洗数次，加入高剂量双抗（不一定有效，因为污染细胞的弱毒性细菌还是很多种）
3.如果需要作转染，还是不宜用这种细胞，影响细胞状态较大，转染效果不好。

作者: xevin 时间: 2015-7-11 15:37

图中箭头所示的黑点是死细胞吧？

图片附件: 60435862.snap.jpg (2015-7-11 15:37, 66.01 KB) / 该附件被下载次数 9
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=34773

作者: xevin 时间: 2015-7-11 15:37

这些黑点是什么？（10倍物镜）

图片附件: 16539320.snap.jpg (2015-7-11 15:37, 79.31 KB) / 该附件被下载次数 5
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作者: xevin 时间: 2015-7-11 15:37

同上图所示的黑点（20倍物镜）：

图片附件: 60387255.snap.jpg (2015-7-11 15:37, 49.79 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=34775

作者: wu11998866 时间: 2015-7-11 15:38

图中箭头所示的黑点是死细胞吧？

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我觉得是死细胞。肯定不是微生物污染。

作者: wu11998866 时间: 2015-7-11 15:38

同上图所示的黑点（20倍物镜）：

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兄弟，你做的是克隆化培养吗，稀释得这么厉害，细胞好少啊，我看像是污染了。

作者: wu11998866 时间: 2015-7-11 15:38

个人觉得该图片上黑点就是所谓的'黑焦虫',但本人亦同意前面战友所说,细胞培养中根本没有什么黑焦虫,常见的黑点少数为血清中沉淀颗粒，显得培养基不干净。多数为细菌，就象上面图片中的。我曾在试验中对出现的“黑焦虫”进行培养，接种到LB培炎基上，结果发现有细菌生长。本拟对之进行详细的细菌种属鉴定，但因事放弃了。凭经验推测，主要为革兰氏阳性细菌，所以一般抗生素效果不好，难以清除。由于污染实验室的阳性菌通常致病力弱，所以见到细胞未受较大影响，但“黑点”繁殖太多时，因为竞争营养及产生代谢产物的缘故，细胞状态还是会变差。建议：
1.如果遇到这个东西，细胞能够重新复舒，强烈建议及早弃去污染了的细胞，以免同一培养箱中其他细胞被污染。我在作稳定表达细胞株快成功时遇到过这种情况，恨不忍心前功尽弃，结果加入3倍双抗以及庆大，还是没彻底搞掉，最终结果还是放弃，全部重头再来。
2.如果细胞很快要收集用于检测试验（比如转染后），而黑点不多，细胞状态尚好，可以每日用PBS多洗数次，加入高剂量双抗（不一定有效，因为污染细胞的弱毒性细菌还是很多种）
3.如果需要作转染，还是不宜用这种细胞，影响细胞状态较大，转染效果不好。
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我觉得楼上的分析比较有道理，你的细胞应该是被污染了，如果反复复苏总有这样的情况，建议你用一下我的那个配方，或许有帮助。另外补充一下，建议大家以后少用“黑胶（焦）虫”这个称呼，听起来挺恐怖的，哈哈。

作者: wu11998866 时间: 2015-7-11 15:39

我养的293细胞在剧烈操作后（胰酶彻底消化掉瓶内细胞，再从其他瓶的293传入293细胞）出现过比较明显和严重的“小黑点”现象，但我持续培养和观察了一周，发现对细胞生长确实影响不大，我甚至还冻存了一些这种293细胞。如果真是细菌污染，为什么培养基始终较透明，没见到浑浊呢？且细胞的生长状态较好又如何解释？到底是不是细菌，恐怕我们还是要心存一些疑问。

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很可能胰酶不能完全消化去除的死细胞碎片沉积。

作者: xyw5 时间: 2015-7-11 15:40

我在细胞培养中也见过这种东西，细胞室老师说是黑胶虫，去不掉
如果没有明显污染的话，建议继续培养
所以我想问楼主
如果是细菌的话，为什么这种“虫子”对细胞生长影响不大，甚至没什么影响

作者: wu11998866 时间: 2015-7-11 15:40

我在细胞培养中也见过这种东西，细胞室老师说是黑胶虫，去不掉
如果没有明显污染的话，建议继续培养
所以我想问楼主
如果是细菌的话，为什么这种“虫子”对细胞生长影响不大，甚至没什么影响
......

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你说的很对，任何微生物如果不是明显污染，对细胞生长的影响都不大，有些细菌在双抗的作用下繁殖能力降低，长得很慢，有些抗药性强的长得很快，这还和你的细胞养多久及换液或传代的间期有关。

作者: www.1 时间: 2015-7-11 15:40

不是我将细胞稀释这么厉害，而是放置了比较长时间，细胞差不多没了，只剩下哪些圆圈中那样的黑点了。

作者: greenbee 时间: 2015-7-11 15:41

我的细胞也有这种扭动的小虫子，随着细胞状态的变化而增加，细胞好时看不到，细胞状态下来它疯长，现在又有不动的小黑点，我的细胞都停下不敢养了，怀疑为血清问题，怎么解决阿？

作者: dior 时间: 2015-7-11 15:41

本人在进行细胞培养时发现细胞中污染了黑色的虫子（体积很小，在10x10的倍数下可见），该虫子能在细胞内寄生，而且能以极快速的速度有方向性的运动，氨苄青霉素和链霉素对之无效，更可怕的是本人在对自己痰检时，在痰液中也发现此快速移动的小黑虫子，求各位给予帮助Dead

作者: october7 时间: 2015-7-11 15:41

楼主说的那个黑东西是不是很小的黑色的点点啊？放大100倍的时候会看到有黑点点，很小很小，400倍下虽然也看不清，但是能看到那些东西在动，好像在游泳的样子。非常小。
本人在进行细胞培养时也发现细胞中污染了黑色的虫子（体积很小，在10x10的倍数下可见），该虫子能在细胞内寄生，而且能以极快速的速度有方向性的运动，氨苄青霉素和链霉素对之无效，更可怕的是本人在对自己痰检时，在痰液中也发现此快速移动的小黑虫子，害怕死了！

作者: finger 时间: 2015-7-11 15:42

人新手，培养HaCaT（人永生化表皮细胞）。刚开始长的很好，但前几天传代后，第三天培养瓶出现黑色小点，象沙子一样铺在瓶底。40X倍下观察，似乎有有活动。PBS冲洗后换液，但依然存在，估计是贴壁生长的。很奇怪，我两瓶细胞分别两次传代后，第二天培养基很清澈，但第三天出现大量黑色小点。跟黑胶虫污染不一样，实验室老师也说不是黑胶虫污染。我把细胞照片发上来，大家来鉴定一下。

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作者: finger 时间: 2015-7-11 15:42

继续发细胞照片

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作者: finger 时间: 2015-7-11 17:12

低倍镜观察

图片附件: 91839919.jpg (2015-7-11 17:12, 88.51 KB) / 该附件被下载次数 7
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作者: veiwu 时间: 2015-7-11 17:12

杀杀支原体，也许这些黑点就没有了

作者: dior 时间: 2015-7-11 17:12

楼主，你是将50ug/ml的头孢和庆大加到培养基来培养细胞的吗？谢谢！

作者: mimili_901 时间: 2015-7-11 17:13

hello, I am so glad to see your post here. Recently, my cells suffered serious contamination by bacteria, I think that was what you mentioned. It had delayed my experiment and I will be crazy.
I want to try your suggestion, and use the antibotics. Can you tell me the concentration you used? Thank you very much.

作者: newway 时间: 2015-7-11 17:13

楼主很给力，能不能帮我看看我的细胞是不是也是被“黑胶虫”污染了，加青霉素，氨苄，庆大都不管用。400倍镜下是聚集在一起的小圆亮点，低倍镜下黑黑的整瓶中很多很多

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作者: tudou85 时间: 2015-7-11 17:14

你的肯定是被细菌污染了，不是什么黑胶虫。出现这种情况时赶紧把细胞丢出细胞间，换培养基重新培养新的细胞。

作者: caihong 时间: 2015-7-11 17:17

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第一次开始养细胞的时候，就遇到了这种棘手的黑胶虫。开始并没有注意这种东西的存在，知道培养基开始变浑浊了才发现问题所在，扔掉了全部细胞。第二次发现黑胶虫的时候，黑胶虫还不是很多，采取的措施是反复PBS清洗并加入抗生素左氧氟沙星，几天后黑胶虫大大减少，细胞状态渐佳。有人说是因为血清的原因，我们用的一直是Hyclone的胎牛血清，后来都是先过滤再使用。近日又发现了少量黑胶虫出现在细胞中，崩溃呀心碎啊。黑胶虫形态大小不一，究竟怎样才能根除啊

作者: nn255 时间: 2015-7-11 17:17

黑胶虫把细胞都吃出洞来了

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作者: bs4665 时间: 2015-7-11 17:24

楼主说的那个黑东西是不是很小的黑色的点点啊？放大100倍的时候会看到有黑点点 ...

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呃……我有必要去查查痰了……我在400倍镜下，看到过有大量的黑点在细胞中运动，细胞逐渐减少，液体澄清，但100倍下感觉有模糊不确定的黑色模糊影，我也看了很多报道，有人说那是血清里的物质在做布朗运动，就我细胞而言我表示我不同意在中看法，楼主的话让人有种危机感，我是不是要去查查~zZ

作者: tudou85 时间: 2015-7-11 17:24

请问氨苄加的浓度应该是多大？

作者: langlang 时间: 2015-7-11 17:25

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头痛
请问你用氨苄或头孢和庆大杀黑胶虫有效没有啊，小弟细胞出现了这种黑胶虫，完全不能进行实验。冻存前都没有这种黑胶虫，冻存复苏后就有，再复苏出来也是这样的状态，头痛。

作者: hyuu 时间: 2015-7-11 17:26

换抗生素能解决问题么，还有其他的方法么？
然后我描述下我所看到的是不是“黑胶虫”
首先我养的是原代肝细胞，在配置培养基中用的是国产（excel）的血清，在4°溶解时发现沉淀，离心后加入培养基！
培养6h时候发现，在细胞空隙处有黑色小点（400倍视野下），小黑点会晃动，但是没有运动轨迹，大多在原地晃动，而在细胞密集处，这种情况明显抑制。
开始我不知道是什么情况，以为就是细菌污染，替换无血清培养基含2%双抗进行清洗1-2遍，第二天观察还是有这个情况，只是情况有所好转，但细胞还是有大量脱落。。。
你有什么好的建议么？？

作者: am10 时间: 2015-7-11 17:26

有所好转就有希望，建议换好点的血清，应该更有效果。

作者: JK.jon 时间: 2015-7-11 17:26

请问楼主使用抗生素的用量是多少啊？

作者: JK.jon 时间: 2015-7-11 17:29

我养的细胞中培养基浑浊，在400x倍下看有很多颗粒样的东西。

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