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标题: 【讨论帖】即将实施的维C银翘片新标准中维生素C... [打印本页]

作者: 丁香@@ 时间: 2015-7-18 16:50 标题: 【讨论帖】即将实施的维C银翘片新标准中维生素C...

此维C银翘片新标准方法，从八月征求意见开始，我们单位就做了一些测定实验，测定的结果就是维生素C的降解很快，方法不稳定，高效液相方法测定的结果也比滴定法的测定结果高出12--15%以上，对照品的使用也是每次须新鲜配制。

在稳定性的考察中，同一个样品，每隔2小时进样一次，测定结果要降底1%，甚至超过1%，放置过夜后（24小时），降低17--18个百分点。

维生素C的易分解，这是大家都知道的，但是这种方法的稳定性实在是太差了，如果同时测定很多检品的话，处理好的样品要及时进样，那后面的样品测定结果肯定是比实际的要低了，这样的结果能有说服力吗？

借此宝地与各位大侠探讨，欢迎跟帖。

作者: ALALA 时间: 2015-7-18 16:50

看来，Vc测定，样品配制后，最好在很短时间内进样。
每次只做一个。

是个问题。

作者: nn255 时间: 2015-7-18 16:50

这个方法怎么样我不好说，没做过研究，是否有更好的方法不得而知。

象楼主说的这样，那么只能现配先进，也是可以的，我们有一个样品就是要求在10分钟内进样的（EP的方法）。

至于高效液相方法测定的结果也比滴定法的测定结果高出12--15%以上，肯定有问题，我觉得最大的问题可能是对照品的问题，也许对照品的含量本上就很低，中检索的对照品质量？

楼主能吧具体结果贴出来我们好讨论。

作者: txwuyan 时间: 2015-7-18 16:51

没做过，随便说说。
大致看了一下，标准中0.5％亚硫酸氢钠溶液应该是防止VC降解的，此试剂是否失效？
参考别的测定VC的方法，是否考虑可以用草酸、偏磷酸、乙酸溶液等等来溶解？

作者: JK.jon 时间: 2015-7-18 16:51

这方法的对照和样品溶液只能现配现测.
没有什么办法能避免VC在一般条件下的氧化，加0.5％亚硫酸氢钠溶液主要起调pH的作用。溶剂最好用新沸过的。

作者: 丁香@@ 时间: 2015-7-18 16:51

谢谢楼上各位。

实验的结果我会找时间贴上来的。

这个方法中对照品应该是没有问题的，对照品是中检所的，我们配制了两个浓度的对照液，线性是很好的。

这个方法在测定的过程中还有这样一个现象，就是柱子的平衡时间很长，否则进样的时候，峰的保留时间会不断的提前，时间跨度有5--6分钟，我们设检的停止时间是15分钟，除了前面40分钟的流动相平衡时间外，要再进样12--13针以后，出峰时间才会稳定下来，这就要了3个多小时近4个小时了，那么样品的处理时间就要掌握好，在样品提取出来以后，马上上机进样，还得是已经进了对照并且出峰时间稳定后，这样以减少误差，但是如果检品量大的话，也不可能安排人成天不停的按规定时间处理样品，这是很不现实的，这是从工作的角度来讲，那么从检测方法的稳定性来讲，这种方法能成为国家药典收载的标准方法吗？专家们在对方法的审核上也不可能不做稳定性实验吧？

我们也做过这样的实验，就是样品出来后在短时间内就上机，这样的测定结果就是145%以上了

总之问题多多，请大家赐教，谢谢。

作者: 丁香@@ 时间: 2015-7-18 16:52

QUOTE:

原帖由 txwuyan 于 2015-7-18 16:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
没做过，随便说说。
大致看了一下，标准中0.5％亚硫酸氢钠溶液应该是防止VC降解的，此试剂是否失效？
参考别的测定VC的方法，是否考虑可以用草酸、偏磷酸、乙酸溶液等等来溶解？
...

因为是国家即将实施的标准，我们只能按这个标准来进行各方面的实验，不便改动其规定的条件，如果是单纯的摸索方法或者是做其他的测试可以考虑您提出的建议，谢谢。

所用试剂没有问题。

作者: caihong 时间: 2015-7-18 16:52

其实很多样品都做好现做现配~~

作者: cj_mondy 时间: 2015-7-18 16:53

可以先进溶剂，等时间差不多了，再进样品
宁可仪器等，也不能让样品等

作者: 555444 时间: 2015-7-18 16:53

贴上数据，跟大家探讨。

使用仪器：Agilent 1200 VWDA 检测器 Agilent 1200 DAD 检测器  两个机子
使用柱子：SMA NH2 5u 250mm 和Thermo NH2 5u 250mm 两根柱子

对照液新鲜配制两个浓度，样品的制备和对照液的配制均用新煮沸冷却后的纯净水配制0.5%亚硫酸氢钠溶液（用磷酸调节PH值至2.4）。

对照液的稳定性试验一：
浓度1#：
浓溶液：峰面积A ：6195.60  、  6172.57    8小时后进样峰面积A： 5975.35
稀溶液：峰面积A ：617.53 、 615.22       8小时后进样峰面积A： 567.7 570.5

浓度2#：
浓溶液：峰面积A ：6571.03、 6560.29    8小时后进样峰面积A： 6306.3
稀溶液：峰面积A ：654.20、    652.14       8小时后进样峰面积A： 607.6  、609.0

对照液的稳定性试验二：
浓度1#：
浓溶液：峰面积A ：0小时 5165.3、  2小时  5114.2 、6小时  5000.4 、8小时  4948.9  、12小时  4873.3
稀溶液：峰面积A ：0小时 512.2、 2小时  503.3 、  6小时  488.0 、  8小时  478.7  、 12小时  465.9
浓度2#：
稀溶液：峰面积A ：0小时 546.0、 2小时  530.7 、 6小时  523.2 、  8小时  505.5  、  12小时  490.8

样品检测情况：同一个样品分不同时间段进样
0小时结果： 103.47%
5小时结果： 96.96%
7小时结果： 93.61%
9小时结果： 90.61%
11小时结果：  87.61%

其他试验数据以后贴上来，就现在的检测情况，请大家发表意见看法。

这种检测方法存在的问题很多啊。

作者: 555444 时间: 2015-7-18 16:53

QUOTE:

原帖由 cj_mondy 于 2015-7-18 16:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

可以先进溶剂，等时间差不多了，再进样品
宁可仪器等，也不能让样品等

是的，我们现在检测样品都是先平衡好柱子，在进对照液的时候，才提取样品，而且是整个过程尽可能避光操作，样品过滤后，在最短时间内进样。

可是作为企业来讲，生产批次是很多的，半成品、成品的，不可能分时间段来做吧，何况还有那么多的试验~~~

作者: cj_mondy 时间: 2015-7-18 16:54

2个小时以内还算稳定，有没有做1个小时的？
温度考察了没有？冰箱保存的话，讲解有多大？
要是这样，对照品要现配现用，很浪费啊

作者: 丁香@@ 时间: 2015-7-18 16:54

其实2小时以内就已经不稳定了，1小时的也做过，每小时降解1%，甚至超过1%。

温度方面还是做了些控制，但是不行。

对照品一定是得现配现用，很浪费的也很费时的，而且速度还得快点，这不是麻烦吗？如果真是这样，怎么能审核通过，成为国家标准？而且收载在2010版的药典？

希望各位色友能将你们的试验情况说一说，借此宝地探讨探讨。

谢谢！

作者: 丁香@@ 时间: 2015-7-18 16:55

我到希望是我们自己的问题，通过探讨交流后，能帮助我们找到问题所在，解决问题。

同时也通过讨论发现问题及时反馈给药典委员会。

作者: cj_mondy 时间: 2015-7-18 16:57

没有做过这个
你跟你们那边的检验单位交流一下，看他们是怎么做的
如果VC这么容易氧化，能不能用别的办法测定其氧化产物，像衍生类的办法。。。

作者: 丁香@@ 时间: 2015-7-18 16:57

请省药检所的帮助做过，但是他们只做了一个批号，没做对照的稳定性和样品的稳定性考察，只有再请其他单位的做了。

版主有熟悉或者是认识生产维C银翘片的厂家或者做过这个试验的人吗？请您介绍一下，以便交流，谢谢！

另外，还有哪位大侠做过，探讨探讨啊，谢谢!

作者: cj_mondy 时间: 2015-7-18 16:57

QUOTE:

原帖由 丁香@@ 于 2015-7-18 16:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请省药检所的帮助做过，但是他们只做了一个批号，没做对照的稳定性和样品的稳定性考察，只有再请其他单位的做了。

版主有熟悉或者是认识生产维C银翘片的厂家或者做过这个试验的人吗？请您介绍一下，以便交流，谢谢！

另外，还 ...

他们做的那个批号的含量，和你们的差多少？
我不认识这方面的，你们可以就相同批号的，请第三方检测，大家一起做个比较
再把稳定性的问题，和药检所做个交流

作者: 简森si 时间: 2015-7-18 16:58

原来也有同行跟我们遇到同样的问题啊，无语！样品我们用包衣的维生素C，降解没有那么快，可时对照品就跟你说的情况一样。现在考虑的是，10药典的方法所用的试剂都要现配，对照品也一样，那怎么可行？可以考虑添加其他的抗氧化剂来防止对照品降解吗，有试过吗，比如酒石酸或其他的？不知道你们现在有什么解决的办法？大家交流一下啊

作者: yes4 时间: 2015-7-18 16:59

我们也遇到这样的问题，用NH2柱子平衡时间是相对要长一些，而且在主峰后面还会出现一个小峰，无论是对照品还是样品都一样，我们进了一针空白的0.5%亚硫酸氢钠试液，发现后面的那个小峰是0.5%亚硫酸氢钠试液的，不知道你们有没有这种情况，也可能是我们的0.5%亚硫酸氢钠试液是前一天配的原因。
另外，在测定维C银翘片样品时，几次复检的结果相差很大，也正在分析其原因，不知道你们的问题解决了没有，很想向你们学习学习。

作者: 丁香@@ 时间: 2015-7-18 16:59

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原帖由 简森si 于 2015-7-18 16:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
原来也有同行跟我们遇到同样的问题啊，无语！样品我们用包衣的维生素C，降解没有那么快，可时对照品就跟你说的情况一样。现在考虑的是，10药典的方法所用的试剂都要现配，对照品也一样，那怎么可行？可以考虑添加其他的抗氧化剂来防 ...

我们没有做这样的试验，但我们做了各种条件试验，目的是为样品的提取和上机找一个合适的条件，对照品的配制可以配一次用2天，而稀溶液是要现配制了，是很麻烦。

作者: 丁香@@ 时间: 2015-7-18 16:59

QUOTE:

原帖由 yes4 于 2015-7-18 16:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我们也遇到这样的问题，用NH2柱子平衡时间是相对要长一些，而且在主峰后面还会出现一个小峰，无论是对照品还是样品都一样，我们进了一针空白的0.5%亚硫酸氢钠试液，发现后面的那个小峰是0.5%亚硫酸氢钠试液的，不知道你们有没有 ...

氨基拄经常使用的话，就用不了这么长的平衡时间了。主峰后面是一直会有这样一个小峰的，因为不影响你的结果计算，这个就不必管它了，有就有了。

在测样品时每次的结果相差大的话，你首先要考虑几个因素：
1、提取时间，你的提取是否快速，提取过程是否耗时不一样？
2、提取环境的光照条件怎么样？是否尽量避光操作？容器是否用棕色的？
3、超声的水是否干净，特别是超声的水温是否测量过温度，注意过超声的水温，一般情况下，水温最好不要超过25~30℃，因为超声水温对结果是有影响的。
4、试验的容器是否干净，因为微量金属元素会对维生素C的稳定有影响，所以要保证容器干净。
5、提取样品后是否及时上级进行检测，如果不及时进行检测的话，样品的摆放时间越长，降解就会越多，结果肯定会受影响，你把这些条件都考虑进去以后，才能保证你的结果的准确可靠。

就维C银翘片的检测验证，我们做了很多详细的条件对比试验，也得出了相应的结论和解决的办法，这个，我可以上传我们的总结供同行们参考。

作者: 丁香@@ 时间: 2015-7-18 17:00

先贴上我们总结的检测维生素C的注意事项供同行们参考：

2010版药典检测维生素C须知

1、维生素C在空气中容易氧化，对光、热敏感，对照品的保存对结果有较大影响，因此，对照品应用黑纸包裹，并用封口袋密封保存于冰箱中5℃左右储存。
2、对照液配制要用棕色容量瓶，过程尽量避免强光照射，配制用0.5%亚硫酸氢钠溶液要注意溶液温度，尽量采用新煮沸冷却后的水来配制溶液，配好的对照液要注意避光并及时放置在冰箱中保存。
3、浓对照液在保证避光并储存在冰箱中的情况下，可以使用2天，稀溶液需新鲜配制。
4、在柱子用流动相基本平衡好后，再倒出对照液，及时进样，减少误差
5、供试品的提取要注意提取过程中的提取时间，提取环境、光照情况、提取滤好的样品要迅速测定。维生素C见光容易分解，所以容器应选择棕色的，在夏天光照强的情况下，提取时尽量避光操作，超声时用黑袋包裹；微量金属离子会加速维生素C分解，一定要保证所用的玻璃容器的清洁。超声时一定要注意超声水温，平时可用循环水，用水的水温最好不要超过25℃，夏天可以考虑用冰块。
6、样品的提取应跟仪器分析室的实验员沟通，合理安排供试品的提取上机时间，样品批次多的情况下，应该分上午下午提取上机，以保证试验结果的准确、可靠。

作者: summerxx 时间: 2015-7-18 17:00

我也遇到了同样的问题，而且发现亚硫酸氢钠溶液一定要密封放置，不能够敞口放置，否则就会有SO2气体挥发出来，溶液的pH值就升高了，用这个溶液配制的对照品溶液和供试品溶液就更加不稳定了。

作者: 丁香@@ 时间: 2015-7-18 17:01

也在做这个含量，不过做出来的结果还是不理想啊，吸取一下各位的经验再说！

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