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标题: PCR电泳结果初步定量分析 [打印本页]

作者: 麻瓜 时间: 2011-8-22 16:22 标题: PCR电泳结果初步定量分析

PCR电泳结果初步定量分析

前几天一直想找一个好的pcr条带定量分析软件，但是结果不是不好用就是软件分析的结果感觉差别大，其中试过bandscan5，但是出来的结果不是很好。
于是想到了ipp，ipp可以定量分析组化的照片，而且结果比较可靠，但是pcr的电泳图片是黑白的，如果用ipp分析，结果是与实际相反的，条带亮的数值小，而条带暗的数值大，（因为它是分析的目标区域的吸光度值，当然条带暗吸光度值就会大，这些数值本身是正确的）。但我想得到这样一个结果：电泳条带亮的得出的数值大，条带暗的得出的数值小，如果用常规的ipp分析，结果只能是适得其反。本人通过几天摸索，联合应用photoshop和ipp初步得出的一个期待的结果，分享给大家。
步骤：
1.选择要处理的电泳照片。
2.在photoshop里打开，然后在图像里选择反相，将照片的黑白反过来并保存。
3.在ipp里打开反相后的照片，选择IOD为分析手段分析各条带累计光密度值：这是由于背景是白条带是黑，得出的数值就会是条带“亮”数值大，条带“暗”数值小。
如果想分析目标分子处理前后表达的变化，就可以连同内参的条带一起分析，得出数据后送入excel,用相应的条带除以各自对应的内参数值，最后比较两个比值就可以知道表达是增高还是降低。

以上是本人初步摸索的，仅供各位参考，也希望大伙提供更好的建议和方法。

谢谢！

[ 本帖最后由 miracle 于 2011-9-5 15:14 编辑 ]

作者: 天蓝蓝 时间: 2011-8-22 16:22

听起来还不错啊，呵呵，一般的PCR我还没有定量过

作者: 如影随形 时间: 2011-8-22 16:23

楼主在吗，我要做了定量PCR，做转基因的表达量。

作者: 蓝蜗牛 时间: 2011-8-22 16:23

good
！！！！！！！！！

作者: 阿拉蕾 时间: 2011-8-22 16:24

看上去不错啊```````````````

作者: 阿拉蕾 时间: 2011-8-22 16:25

我们以前就是肉眼定量，不过楼主的想法很不错，我觉得也可以应用在WB的DAB显色相片中

作者: 阿福 时间: 2011-8-22 16:25

LZ，ipp自身就可作反相处理的，点击一下反相即可完成。可以仔细研究下园子hbchendl大师的相关帖子

作者: 小荷尖尖 时间: 2011-8-22 16:26

我今天用了下Quantity One 感觉比band scan好用 band scan我一加新的band 软件就死掉了。。。

作者: 大猫 时间: 2011-8-22 16:26

我马上也做这个，我也试一下这个定量的方法

作者: 王六六 时间: 2011-8-22 16:27

想法是好的，但是目前WB国外杂志一般只认化学发光，DAB染色一般不接受的，所以最好用化学发光。

作者: 飞天小鹿 时间: 2011-8-22 16:27

不错哈楼主确实花了心思与功夫我一般也只是和Marker比较亮度估计浓度请教楼主你说的这个定量主要可以用于哪些实验的结果分析？谢谢了！

作者: 小困 时间: 2011-8-22 16:28

我马上就要做了，也试试楼主的好办法！

作者: 明天的明天 时间: 2011-8-22 16:28

听起来不错啊

作者: 丸子妹 时间: 2011-8-22 16:29

学到不少，谢谢

作者: 细水长流 时间: 2011-8-22 16:30

谢谢楼主分，辛苦 ==========

作者: 竹蜻蜓 时间: 2011-8-22 16:30

谢谢楼主，赞一个！

作者: 饭团团 时间: 2011-8-22 16:31

谢谢楼主，赞一个！

作者: 七彩星星 时间: 2011-8-22 16:32

同意，我也觉得反向比较容易分析。

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