分析测试百科

标题: RNA,CDNA,DNA的保存方式和时间？？ [打印本页]

作者: 幸福无罪 时间: 2011-8-23 17:04 标题: RNA,CDNA,DNA的保存方式和时间？？

RNA,CDNA,DNA的保存方式和时间？？ [转自丁香园论坛]

关于RNA,CDNA,DNA的保存方法和时间的帖子为数不少，但好像有的不太一样，，我想问问有过丰富经验的园友，具体的关于提取出的RNA，逆转录的CDNA，还有已经PCR后的DNA的具体的保存方法（如：溶剂，温度等）和保存时间，谢谢!!

作者: HOT兔 时间: 2011-8-23 17:05

RNA：可以放在1.5的eppendorf管中加1ml75%乙醇，-80度保存。大约可保存一年。

CDNA,DNA：这俩者的保存方法一样，逆转录出来的cDNA可以直接放在4度保存，若长期不用，可分装，然后-20度保存。DNA应该溶于TE中，4度保存，若长期不用，可分装，然后-20度保存。

PCR产物的保存：可以直接放在4度保存，若长期不用，可分装，然后-20度保存。

不知道有没有说清楚。

作者: 不懂 时间: 2011-8-23 17:06

谢谢！
我也正好有这样的问题．

作者: 不懂 时间: 2011-8-23 17:06

问一下：ＲＮＡ在－２０度下能保存多久？
我们没有－８０度冰箱啦．

作者: 菠萝菠萝蜜 时间: 2011-8-23 17:07

没有在-20保存过，不知道你提取的RNA是做什么样的实验，如果接下来的步骤是逆转录成cDNA，然后再进一步实验，那你不妨辛苦一下，提出RNA并检样后做逆转录，变成cDNA后就容易保存了。

作者: 阿拉蕾 时间: 2011-8-23 17:07

ＲＮＡ在－２０度下能保存多久？

我试过在－２０度放了一星期，还能跑出3条带的。具体有多久，不是太清楚了。

作者: 假小子 时间: 2011-8-23 17:08

DNA的保存是要看浓度的，例如把ＤＮＡ稀释为２５ng/ul，-８0保存了半年普通ＰＣＲ就重复不出原来的结果了（只有smear）,所以还是要当心

作者: 幸福无罪 时间: 2011-8-23 17:08

请问用组织做RT-PCR时，为什么要先提取RNA再超低温保存？能不能先低温冷冻组织再室温解冻后做RT-PCR，对反应结果有何影响？请各位大虾多多指教！

作者: 阿拉蕾 时间: 2011-8-23 17:09

可以在低温下保存,但是必须是取出后迅速用液氮速冻,而后置于-80冻存,如果需要提RNA时,将组织取出,但必须在冰浴情况下剪切匀浆,这样不至于RNA降解.反复冻溶不好,最好是取出组织后尽快做.这是我的一点体会.

作者: 果冻也酸 时间: 2011-8-23 17:09

补充
RNA：可以放在1.5的eppendorf管中加1ml75%乙醇，-80度保存。大约可保存一年。
　　一般未纯化的RNA直接在－80度放置二周会有明显的降解

CDNA,DNA：这俩者的保存方法一样，逆转录出来的cDNA可以直接放在4度保存，若长期不用，可分装，然后-20度保存。DNA应该溶于TE中，4度保存，若长期不用，可分装，然后-20度保存。
　　cDNA,DNA均不宜放置4度，cDNA大概两天PCR效果会有明显降低，毕竟cDNA要先取材料－－提RNA－－反转录，谁也不希望自己辛苦得到的cDNA一周后基本不能用了吧。两者均应用TE稀释后－20度保存。

PCR产物的保存：可以直接放在4度保存，若长期不用，可分装，然后-20度保存。
同样就用TE稀释后－20度保存。

作者: 幸福无罪 时间: 2011-8-23 17:10

多谢大虾指教。请问为何组织取出后必须要用液氮保存，不用有什么后果？我直接取出组织后浸泡于含DEPC（RNA酶抑制剂）的EP管中-40度超低温保存可以吗？因为我们实验室无-80度冰箱，而且我保存时间不许太长。需要提取RNA时，在室温下解冻会有什么后果？

作者: 麻瓜 时间: 2011-8-23 17:11

请教一下，cDNA放在-80℃保存可以吗？

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)