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标题: 【求助】内参actin、GAPDH你用哪个？ [打印本页]

作者: xue258 时间: 2015-8-5 11:14 标题: 【求助】内参actin、GAPDH你用哪个？

实验室内参一直用Actin，但看见园子里有人说GAPDH更稳定。今天试了一下GAPDH，感觉同样的模板量，actin要亮很多。不知道战友们RT-PCR内参怎么选择的，

作者: H2O 时间: 2015-8-5 11:14

Actin和GAPDH没有太大区别，actin mRNA 在各种细胞都比较丰富，如果你觉得actin模板要量很多，我建议你优化一下条件，并确定你扩出的是不是真的 actin片段。

作者: bs4665 时间: 2015-8-5 11:14

最常用的就是β-actin呀

作者: dog002 时间: 2015-8-5 11:15

内参基因的选择已经争论了很久，但一直没有什么定论。但如果只是要做定性分析，倒是无所谓。都可以用，个人习惯问题罢了。但是如果做到关于促进细胞增殖等基因，尤其是半定量分析时，其实各种内参基因都有各自的问题，只能根据文献选择在特定细胞内、特定状态下较稳定的内参基因用了。

作者: 49888 时间: 2015-8-5 11:15

植物我一般用tubulin
植物最常用的actin在烟草中对基因组也能扩增

作者: am10 时间: 2015-8-5 11:15

主要考虑的是内参与你目的条带大小的关系，其他没啥特别的。

作者: remenb 时间: 2015-8-5 11:16

在细胞处于应激、缺氧、糖代谢紊乱时最好使用actin，实验室有人做缺氧时用了GAPDH做内参，结果编辑社以此为理由给拒了，理由很简单，GAPDH是三梭酸循环途径中的一个酶.因此上述的状态可能会改变此酶的表达和活性。

作者: 8964357 时间: 2015-8-5 11:16

在细胞处于应激、缺氧、糖代谢紊乱时最好使用actin，实验室有人做缺氧时用了GAPDH做内参，结果编辑社以此为理由给拒了，理由很简单，GAPDH是三梭酸循环途径中的一个酶.因此上述的状态可能会改变此酶的表达和活性。

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那心脏组织蛋白也可以用actin吗？有坛友认为心肌不是骨架蛋白，不能用actin。好像是这样说的。不知道测心脏和脑组织中的HIF-1α的内参到底用actin还是GAPDH，还请前辈多多指教，谢谢前辈~

作者: junhun 时间: 2015-8-5 11:17

在细胞处于应激、缺氧、糖代谢紊乱时最好使用actin，实验室有人做缺氧时用了GAPDH做内参，结果编辑社以此为理由给拒了，理由很简单，GAPDH是三梭酸循环途径中的一个酶.因此上述的状态可能会改变此酶的表达和活性。

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第二次见到，一直记得

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