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标题: 【求助】离子交换的再生 [打印本页]

作者: yhz1973    时间: 2015-8-7 10:11     标题: 【求助】离子交换的再生


各位战友,问一下大家离子交换层析柱用高盐再生后还用NaOH再生吗?因为看到说明书上写是“再生用NaCl,消毒用NaOH”。

作者: youyou99    时间: 2015-8-7 10:11


看填料的耐受性,一般,大厂家的填料,都会有再生的方法的
像GE的琼脂糖离子层析填料,可以用0.5NaOH和0.1M的HCl轮流洗涤再生

作者: whitesheep    时间: 2015-8-7 10:19



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看填料的耐受性,一般,大厂家的填料,都会有再生的方法的
像GE的琼脂糖离子层析填料,可以用0.5NaOH和0.1M的HCl轮流洗涤再生

说明书丢掉了,楼主能发一下详细再生方法吗?
作者: yizhi    时间: 2015-8-7 10:21


说明书请找你的供应商

作者: veiwu    时间: 2015-8-7 10:31

对于可耐碱的填料,一般是采用高盐清洗或再生,然后用NaOH作为消毒或去热源(内毒素)
作者: yhz1973    时间: 2015-8-7 10:32



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对于可耐碱的填料,一般是采用高盐清洗或再生,然后用NaOH作为消毒或去热源(内毒素)

看来都是只能先用高盐清洗之后再用NaOH清洗了,想偷懒一步都不行。
作者: 园丁##    时间: 2015-8-7 10:32



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看来都是只能先用高盐清洗之后再用NaOH清洗了,想偷懒一步都不行。

要严格遵循规程。
作者: jude    时间: 2015-8-7 10:34


再生后的效果还是挺好的

作者: yhz1973    时间: 2015-8-7 10:34



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再生后的效果还是挺好的

再生效果怎么评判?
作者: ujne    时间: 2015-8-7 10:35


我用的是2MNaCl,接着用20%乙醇把电导率降下来,用过一次1MNaOH-2MNaCl-20%乙醇,短时间用1MNaOH是可以的

作者: yhn    时间: 2015-8-7 10:36


你不用NaOH,效果可以吗?一般都会用NaOH,而且用乙醇很容易会有气泡,用低流速的话就要很久。

作者: baidukk    时间: 2015-8-7 10:36



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你不用NaOH,效果可以吗?一般都会用NaOH,而且用乙醇很容易会有气泡,用低流速的话就要很久。

后来就没用NaOH了,一直用NaCl,流速是2ml/min,没见用乙醇有气泡
作者: am10    时间: 2015-8-7 10:38


1M NaCl和0.5或1MNaOH的再生和消毒,可以一起实施

作者: bring    时间: 2015-8-7 10:38


一般用高盐再生,在用0.2M或0.5M NaOH清洗柱子。

作者: yhz1973    时间: 2015-8-7 10:38



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一般用高盐再生,在用0.2M或0.5M NaOH清洗柱子。

能分别说一说这两步的确切作用吗?
作者: gogo    时间: 2015-8-7 10:38


高盐再生作用主要是介质恢复更好结合效果,NaOH清洗可已去除残留或者难以清洗下来的一些蛋白。

作者: bs4665    时间: 2015-8-7 10:39


高盐一般只是清洗介质上结合比较牢固的蛋白质,NaOH 被广泛用于清洗、消毒和保存层析介质及层析系统。  
使用NaOH 的最大好处在于有效、低成本、并能容易检测、  
清除和处理。NaOH 一直被认为能有效去除蛋白和核酸。同  
时,它还能灭活大多数的病毒、细菌、酵母、真菌以及内毒  
素。在实际的工业生产中为了节约时间,在NaOH 中加入氯  
化钠等盐物质,从而可将清洗和消毒两者进行结合。

作者: yhz1973    时间: 2015-8-7 10:39



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高盐一般只是清洗介质上结合比较牢固的蛋白质,NaOH 被广泛用于清洗、消毒和保存层析介质及层析系统。  
使用NaOH 的最大好处在于有效、低成本、并能容易检测、  
清除和处理。NaOH 一直被认为能有效去除蛋白和核酸。 ...

我们之前也是1M NaCl+1M NaOH一块再生的,后来有次看到填料有结块,问供应商,说是1M NaCl+1M NaOH效力太强,使杂蛋白在柱子里面变性,而引起填料结块(不知道是否真是这个原因)。后来再生就先用1M NaCl后用1M NaOH,分两步再生我又嫌时间长,所以看能不能缩减一步或优化一下。跟据我们的情况,看来还是先用1M NaCl后用1M NaOH的再生条件好了。
作者: shenkunjie    时间: 2015-8-7 10:39



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我们之前也是1M NaCl+1M NaOH一块再生的,后来有次看到填料有结块,问供应商,说是1M NaCl+1M NaOH效力太强,使杂蛋白在柱子里面变性,而引起填料结块(不知道是否真是这个原因)。后来再生就先用1M NaCl后用1M NaOH,分两步再生我 ...

恩。在处理有大量杂蛋白挂柱而且结合很紧的话,直接进NaOH是比较容易出现板结的情况。以前就遇到过那样的情况,做完直接用NaOH做CIP当碱进去不久后反压剧增,卸下柱头后发现上面的胶板结得用棍子都戳不烂,当场就蒙掉了。。。后来用3M的热碱处理才恢复
作者: yhz1973    时间: 2015-8-7 10:40


每次生产过程中需要用高浓度的NaCl再生,生产结束后需要用NaCl再生,然后再用0.5M NaOH消毒。谢谢

作者: youyou99    时间: 2015-8-7 10:40



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每次生产过程中需要用高浓度的NaCl再生,生产结束后需要用NaCl再生,然后再用0.5M NaOH消毒。谢谢

生产前不使用NaOH去内毒素吗?
作者: 笨鸟321    时间: 2015-8-7 10:41

确实见过很多人这样操作的,高盐再生或者预平衡,平衡液平衡,上样、洗杂、洗脱,高盐再生,0.5M NaOH是消毒(Clean)。
附:
All cation-exchange chromatography runs were conducted as the following
procedures: Columns were equilibrated with 2 column volumes
(CVs) of preequilibration buffer (equilibration buffer with added 1 M
NaCl) and 2 CVs of equilibration buffer in tandem; columns were then
loaded with protein solution and followed by 2 CVs of equilibration buffer
as postload wash; a linear gradient elution was performed from 0 to 100%
elution buffer in 10 CVs; after that, columns were regenerated with preequilibration
buffer and cleaned with 0.5 M NaOH plus 1 M NaCl; and columns
were stored with 0.1 M NaOH at room temperature. All runs were
performed at room temperature and the flow rate was 180cm=hr.
但是我不是太明白3个问题
1,如果消毒后保存在0.1M NaOH中或者乙醇中,下次使用前是不是要先用水冲洗后,才是高盐预平衡或平衡,水冲洗前是否还需在0.5M NaOH先冲一下;
2,使用起始的时候为什么一般都采用高盐再生或者预平衡一下,这样的目的是什么?因为后面不是平衡液还要平衡的么,是为了离子能快速平衡还是其它目的。
3,最后NaOH去除杂质能力很强,那是否还需要高盐再生一下呢。

作者: yhz1973    时间: 2015-8-7 10:42



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生产前不使用NaOH去内毒素吗?

这个肯定要的啊,我现在说的是CIP和SIP的问题 呵呵
作者: yhz1973    时间: 2015-8-7 10:44



QUOTE:
原帖由 笨鸟321 于 2015-8-7 10:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
确实见过很多人这样操作的,高盐再生或者预平衡,平衡液平衡,上样、洗杂、洗脱,高盐再生,0.5M NaOH是消毒(Clean)。
附:
All cation-exchange chromatography runs were conducted as the following
procedures: Columns were e ...

回答1:填料的准备工序就是消毒处理→注射用水冲洗→平衡缓冲液平衡;适合所有的填料
2:用高盐平衡后再用平衡缓冲液,就是为了能快速置换离子
3:如果你的再生峰不需要收集的话,个人觉得没有必要再用高盐再生了,可以直接一步用NaOH消毒
作者: u234    时间: 2015-8-7 10:47



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回答1:填料的准备工序就是消毒处理→注射用水冲洗→平衡缓冲液平衡;适合所有的填料
2:用高盐平衡后再用平衡缓冲液,就是为了能快速置换离子
3:如果你的再生峰不需要收集的话,个人觉得没有必要再用高盐再生了,可以直接一步用 ...

1,每次做都要消毒吗,GMP方面考虑,我如果连续生产,上一个生产周期NaOH消毒后已在低浓度NaOH中保存,如果连续生产,能否不再使用前消毒,是否可行,必定我可以规定个时间长度,当然我觉得时间长的话肯定应该使用前消毒,重新装柱或者每次新装应该做个消毒处理。
2,高盐平衡这个有道理,确实是这样。
3,再生峰不收集,但是我的理解是这样的,因为每个步骤中需要两次上样,我先第一次上样-洗脱后结束,再生,不NaOH处理,直接平衡,下一次上样-洗脱后结束,不再生了,直接用NaOH处理后保存。

作者: yhz1973    时间: 2015-8-7 10:48



QUOTE:
原帖由 u234 于 2015-8-7 10:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

1,每次做都要消毒吗,GMP方面考虑,我如果连续生产,上一个生产周期NaOH消毒后已在低浓度NaOH中保存,如果连续生产,能否不再使用前消毒,是否可行,必定我可以规定个时间长度,当然我觉得时间长的话肯定应该使用前消毒,重新装柱或者 ...

1、消毒应该是每批生产前后都需要的,毕竟要保证杂质的清除;而且就算每次都消毒了,还得看消毒的效果随着时间和使用次数的增加有没有衰减
3、如果一批生产过程中同一个填料需要分两次纯化,这种情况下中间一次可以不做NaOH处理,生产结束后再进行NaOH消毒处理

作者: summerxx    时间: 2015-8-7 10:50

恩。在处理有大量杂蛋白挂柱而且结合很紧的话,直接进NaOH是比较容易出现板结的情况。以前就遇到过那样的情况,做完直接用NaOH做CIP当碱进去不久后反压剧增,卸下柱头后发现上面的胶板结得用棍子都戳不烂,当场就蒙掉了。。。后来用3M的热碱处理才恢复

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板结或者成块的理论道理是什么的?杂蛋白变性后与填料交联还是什么原因,如果板结后如何规范处理,3M热碱处理是否得当。




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