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标题: 【求助】工作细胞库变更 [打印本页]

作者: yhz1973 时间: 2015-8-8 16:12 标题: 【求助】工作细胞库变更

请教一下，原有工作细胞库快用完了，准备启用新的工作细胞库，是否需要按照《生物制品生产工艺过程变更管理技术指导原则》进行CFDA备案，备案的流程是怎样的？

作者: ladyhuahua 时间: 2015-8-8 16:13

同关注，求解答。
如果主种子批/库用完了，怎么办，流程是什么

作者: tianmei001 时间: 2015-8-8 16:14

至少内部的评估和可比性研究方案/报告该有吧。

作者: ladyhuahua 时间: 2015-8-8 16:14

QUOTE:

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至少内部的评估和可比性研究方案/报告该有吧。

是的，这个是内部的事情，我们关心的是国家监管方面要求的流程。

作者: 生物迷 时间: 2015-8-8 16:18

至少需要备案。

作者: yhz1973 时间: 2015-8-8 16:18

QUOTE:

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至少需要备案。

关键是不知道备案的流程是怎样的

作者: avi317 时间: 2015-8-8 16:19

生产过程变更：根据其对终产品质量的影响，一般分为以下3种情况。 1、变更引起产品内在质量发生改变的，需要按新药申报程序进行申报为I类，请参考《药品注册管理办法》附件4药品补充申请注册事项及申报资料要求； 2、变更可能对产品的安全和有效性有影响的为II 类，需报SFDA审批； 3、一般不影响产品安全性和有效性的为III 类，需报SFDA备案。详见下表。

有做过工艺变更申报的朋友介绍下吧，就是不知道具体怎么个走流程，比如II类如何进行审批，III如何备案，按照道理应该有很多会变工作种子库的啊。

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=36019

作者: 生物迷 时间: 2015-8-8 16:32

QUOTE:

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生产过程变更：根据其对终产品质量的影响，一般分为以下3种情况。 1、变更引起产品内在质量发生改变的，需要按新药申报程序进行申报为I类，请参考《药品注册管理办法》附件4药品补充申请注册事项及申报资料要求； 2、变更可能 ...

这个表格来自哪里？谢谢！

作者: 生物迷 时间: 2015-8-8 16:33

哪位可以介绍国外法规或者操作经验？？？

作者: 生物迷 时间: 2015-8-8 16:34

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申报资料要求解读之二 ——哺乳动物传代细胞鉴别试验方法简介
[摘要]：随着对基因工程蛋白药物的深入研究和应用需求，哺乳动物传代细胞越来越多的应用于生物制药领域。由于我们对基因工程蛋白表达体系的认识还有许多未知的因素，仅仅在终点控制蛋白质量是远远不够的，过程控制非常重要。这就要求在研发之初就要了解所选择的哺乳动物传代细胞的背景、来源，并对其进行充分的鉴别试验，以确认该细胞。包括验明细胞的种属来源，分析细胞的同一性，检测与其它细胞的交叉污染情况。此外，在生产细胞传代过程中，还应对细胞本身的特性进行监测，注意培养过程中生产细胞本身的变化，以控制生产工艺步骤和确定细胞最高传代次数。目前，常用的细胞鉴别试验方法包括细胞形态学检查、种属特异性抗原的检测、染色体核型分析、同功酶分析、限制性内切酶分析等等。本文就此进行简要介绍。
随着对基因工程蛋白药物的深入研究和应用需求，哺乳动物传代细胞越来越多的应用于生物制药领域。哺乳动物细胞作为生产基因重组蛋白药物的表达工具，仅仅满足目的蛋白的产量和活性要求是远远不够的。由于我们对基因工程蛋白表达体系的认识还有许多未知的因素，仅仅在终点控制蛋白质量是不可行的（实际上，目前的研究水平，也不能象化药一样完全控制），因此过程控制非常重要。这就要求在研发之初就要了解所选择的哺乳动物传代细胞的背景、来源，并对其进行充分的鉴别试验。
据Hukku B的研究报道，该实验室使用多种方法对275个细胞株进行鉴定（如，特异性种属抗原、同功酶表型、染色体 complement和HLA haplotype），结果有35％发现了交叉污染，包括种属内和种属间的污染；2003年的一篇文献报道，采用细胞特定基因的PCR方法，检测了82个细胞株，交叉污染现象占到了5％－10％。因此，对细胞的鉴别应引起足够的重视。
根据GLP原则和生产实践的要求，用于建立MCB和WCB的哺乳动物细胞基质，也就是宿主细胞应全面进行鉴别，以确认该细胞。包括验明细胞的种属来源，分析细胞的同一性，检测与其它细胞的交叉污染情况。此外，在生产细胞传代过程中，还应对细胞本身的特性进行监测，注意培养过程中生产细胞本身的变化，以控制生产工艺步骤和确定细胞最高传代次数。
细胞鉴别试验的方法有多种，根据检测目标分类包括细胞水平（形态、分类特征）、染色体水平、分子水平（生化、酶学、分子生物学特征）；根据方法学分类，包括细胞遗传学检测，免疫学检测，生物化学检测和分子生物学检测等。根据目前的文献报道，常用的方法包括细胞形态学检查、种属特异性抗原的检测、染色体核型分析、同功酶分析、限制性内切酶分析等等。
细胞形态学检查：
通常在细胞接种24小时和48小时后，用100倍显微镜检查，观察细胞在低密度和高密度生长时的形态。这种方法比较直观，但只是一个比较粗略的鉴别方法，并且与检测人员的经验密切相关。
种属特异性抗原检测：
也就是用种属特异性抗血清来检测种属特异性抗原，比如间接免疫荧光抗体染色。这种方法操作起来比较简单，但是试验敏感性较差，也就是如果存在少量的细胞污染不能分辨出来。
染色体核型分析：
多数情况下，不同细胞的染色体结构是有明显差别的，因此可以利用这些差别进行细胞种属的鉴别。但是需要提醒的是，亲缘关系接近的灵长类动物细胞的染色特征就比较接近，因此要注意仔细辨别每一谱带的特点。试验时，应从同一世代不同细胞培养瓶中取细胞混合再培养，制备染色体标本片。染色体标本应长期保存（直至褪色不能用为止），以备复查。药典三部中详细描述了人二倍体细胞染色分析的方法和标准，可以参考，这里就不再赘述。染色体核型分析是一个比较精确的检测方法，但试验操作比较复杂，需要对试验人员进行培训。
同功酶分析（Isoenzyme Analysis）：
通常，不同种属的细胞所表达的同功酶是不同的，因此可以利用同功酶分析来进行细胞的鉴别。该方法通常检测以下四种同功酶：葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PD）、乳酸脱氢酶（LDH）、苹果酸脱氢酶（MDH）和核苷磷酸化酶（NP）。检测试剂盒和装置可以向Authentikit生产商购买，当然也可自建方法检测。试验时，通常要设一个小鼠源细胞（如L929细胞系）标准品和人源细胞（如Hela S3细胞系）的对照品。该方法是目前国外对重组制品哺乳动物细胞基质的主要鉴别方法，由于其有商品化的检测试剂和仪器，因此检测性能比较可靠，但是价格比较昂贵。下表1是Authentikit试剂四种同功酶的电泳迁移距离，可以参考：

作者: 生物迷 时间: 2015-8-8 16:35

表1 使用Authentikit系统检测不同种属同功酶
G6PD、LDH、MDH和NP的迁移距离

限制性酶切图谱分析（restriction digest analysis）：
首先，使用商品化试剂盒或其它方法提取细胞基质的基因组DNA，一般要求细胞数在2～5×106细胞，并进行核酸定量，然后进行限制性内切酶的消化，再进行琼脂糖电泳观察电泳条带的特点。这种方法可操作性较好，灵敏度较高，不仅可以鉴别细胞种属，对于细胞间交叉污染的检测也是相当灵敏的，但是公认具有种属特异性的内切酶的选择是本方法的关键。
下表2是文献报道的不同种属的细胞系经内切酶ECoRⅠ、HinfⅠ和HaeⅢ 进行消化反应后的电泳片段特征：
表2 不同种属动物细胞基因组限制性酶切分析结果

*, 来自同种属的至少5个细胞系的平均值
?, 与灵长类细胞系的0.7Kb片段分子量有微小区别
FB, 只有模糊的条带
NBD, 没有检测到条带
D, 在大致相同的分子量有两条带.
粗体数字表示该条带显色最深
随着分子生物学技术的发展，许多新的技术方法也开始应用，如种属特异性的β－球蛋白或其它特征性基因片段的PCR方法、DNA指纹分析、HLA表面抗原鉴定试验等。这些方法的检测灵敏度和特异性均较前有所改进，但其可操作性如何，还需要进行不断地实践。
由于不同的细胞鉴别试验方法具有不同的检测特性和灵敏度，因此应结合具体细胞的固有特性进行适宜的组合和选择，但最终应以实现正确鉴别为目的。
参考文献：
1．GN Stacey, H Hoelzl, etal. Authentication of animal cell cultures by direct visualization of repetitive DNA, aldolase gene PCR and isoenzyme analysis. Biologicals,1997,25:75-85
2．Klaus G, Corinna Meyer, etal. A simple method using β-globin polymerase chain reaction for the species identification of animal cell lines-a progress report. In Vitro Cell. Dev. Biol.-Animal,39:468-475
3．国家药典委员会编，中华人民共和国药典三部，化学工业出版社，2005，14-18
4．Hukku B, Halton DM, Mally M, etal. Cell characterization by use of multiple genetic markers. Adv Exp Med Biol. 1984,172:13-31
5．Steube KG，Steube KG, Meyer C, Uphoff CC, Drexler HG. A simple method using beta-globin polymerase chain reaction for the species identification of animal cell lines--a progress report. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2003, 39(10):468-75

作者: 生物迷 时间: 2015-8-8 16:37

上面是cde的一篇电子期刊，供参考。

作者: shanzhapia696 时间: 2015-8-8 16:38

这个表格来自哪里？谢谢。

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CDE的指南文件
网站发布日期 20080904
起草日期 2005
状态颁布
分类生物制品
标题生物制品生产工艺过程变更管理技术指导原则

作者: rxcc33 时间: 2015-8-8 16:38

观点有所不同。
原有库用完，按既定的工艺重新制备新的工作细胞库，不应该是变更，而只是生产工艺的一部分。
工作细胞库即物料，不同的工作种子批类似化药生产的同一厂家不同批次的物料。因此，应该是：
既定工艺重新制备——既定方法检验——放行无需备案。
（相关国外法规没找到）

作者: gogo 时间: 2015-8-8 16:40

备案应该是到省局安监处？

作者: duoduo 时间: 2015-8-8 16:41

观点有所不同。
原有库用完，按既定的工艺重新制备新的工作细胞库，不应该是变更，而只是生产工艺的一部分。
工作细胞库即物料，不同的工作种子批类似化药生产的同一厂家不同批次的物料。因此，应该是：
既定工艺重新制备——既定方法检验——放行无需备案。
（相关国外法规没找到）
......

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貌似你说的也有道理，但貌似不能延伸理解。
那主库也是同样的道理啊，就是主库用完了，原方法制备-检验放行。工作库用完了，原方法制备-检验放行。
但原始库如果也这么理解也可以啊，我按照原来的方法构建重组菌，同样的方法建立原始库，检验放行。这是原始库这样的风险大而已。理论上都可理解，但我感觉不能延伸啊。
按照既定工艺制备是否就能保证种子一致，如果这样理解工作细胞库，就可以同样理解主库及原始库。
还是只有工作种子库这样理解，主细胞库或原始库不这么理解？

作者: yhz1973 时间: 2015-8-8 16:44

QUOTE:

原帖由 duoduo 于 2015-8-8 16:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
观点有所不同。
原有库用完，按既定的工艺重新制备新的工作细胞库，不应该是变更，而只是生产工艺的一部分。
工作细胞库即物料，不同的工作种子批类似化药生产的同一厂家不同批次的物料。因此，应该是：
既定工艺重新制备——既 ...

若法规有规定，不能变通。
我的观点，工作细胞库可以。因为我已经按既定工艺进行过。
原始细胞库，重新构建，那就重新申报。菌种的变化你不能控制，你只能做到鉴定基因序列，及最后成品鉴定，不能做到菌种的全部的对比。拷贝数、插入位点、重组过程中的变化你难以控制，不能知晓对宿主的潜在影响。

作者: quiqui008 时间: 2015-8-8 16:44

QUOTE:

原帖由 yhz1973 于 2015-8-8 16:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

若法规有规定，不能变通。
我的观点，工作细胞库可以。因为我已经按既定工艺进行过。
原始细胞库，重新构建，那就重新申报。菌种的变化你不能控制，你只能做到鉴定基因序列，及最后成品鉴定，不能做到菌种的全部的对比。拷贝数 ...

最近和几个检查组专家探讨过这个事，包括他们看国外的观点。
工作细胞库按照既定的工艺制备，带来的隐患比较小，是按照既定工艺制备，所以一般不认为是变更，但是启用新的一批的工作细胞库后需要对变化前后的产品进行加速和长期稳定性的比较，3个批次。
主细胞库如果全部用光，从原始细胞库制备，即使也类似是工作细胞库的新制备，但是带来的隐患非常大，一般不认为是简单按照既定工艺制备，也可以理解为不算变更，但要严肃对待，基本上就是按照工艺变更对待的，对产品进行全面的结构确证、3个批次对加速或长期稳定性进行全面对比研究。
原始细胞库如果没有了，那只能是重新申报，这个好理解。
关于申报或者备案通路，国内法规不完善，但是企业要做好对比研究。
国外Amgen公司的一个貌似是EPO主种子库发生过变更，主要是贴壁细胞变为悬浮细胞，这个肯定是变更，最后都要求重新做一个III期临床。

作者: quiqui008 时间: 2015-8-8 16:45

工作细胞库说的有道理，一般是多长时间建一次工作库（是否有有效期）还是用完了建的？
有没有重新建立过主细胞库？是怎么对待的。
原始库如果没有了，必须重新构建，那就是重新申报。

作者: eric930 时间: 2015-8-8 16:45

QUOTE:

原帖由 quiqui008 于 2015-8-8 16:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
工作细胞库说的有道理，一般是多长时间建一次工作库（是否有有效期）还是用完了建的？
有没有重新建立过主细胞库？是怎么对待的。
原始库如果没有了，必须重新构建，那就是重新申报。 ...

有专家说，工作细胞库一般不规定有效期，一般用完了再建新库。置于新库制备的间隔时间，感觉和实际生产挂钩吧。菜鸟个人看法。

作者: quiqui008 时间: 2015-8-8 16:46

QUOTE:

原帖由 eric930 于 2015-8-8 16:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有专家说，工作细胞库一般不规定有效期，一般用完了再建新库。置于新库制备的间隔时间，感觉和实际生产挂钩吧。菜鸟个人看法。

是的，有专家这么说的，没有有效期，只要能用一直用。

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