分析测试百科

标题: 【分享】细胞计数法 [打印本页]

作者: NBA 时间: 2015-8-10 11:18 标题: 【分享】细胞计数法

细胞计数法
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。
1、制备细胞悬液
对于悬液培养的细胞，可直接进行下面的步骤2（计数与计算过程）。如果计数对象为贴壁生长的细胞，首先需将培养物制备成细胞悬液。
1）、终止培养，将培养液吸出，用PBS洗培养物一次。
2）、给培养瓶内加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液，于37℃消化3～5min 。期间不断在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时，弃消化液。
3）、加入一定量的培养液（如果这些培养细胞不再有用，可加PBS），用吸管吹打，使细胞脱壁而制成细胞悬液。
2、计数与计算过程
1）、在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。
2）、用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。
3）、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。
4）、按下式计数细胞悬液的密度：
细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×104个/ml

上图示计数的规则：表示可计数：表示不计数：
注意事项：
1）、务必使分散成单个细胞，取样计数前，充分混匀细胞悬液。
2）、显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个/10mm2或>500个/10 mm2 时，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。

[ 本帖最后由 NBA 于 2015-8-10 11:20 编辑 ]

作者: yhn 时间: 2015-8-10 11:19

顶一下！请问细胞培养时的浓度一般多少？2*10 7会不会太大了？我培养的是脾淋巴细胞，就培养3天

作者: DCS 时间: 2015-8-10 11:20

细胞的计数不是有很多种吗，如红细胞计数，白细胞计数，网织红细胞计数。。。你的公式是哪种细胞计数啊？

作者: NBA 时间: 2015-8-10 11:20

细胞计数，虽然是入门计数，还是要认真的操作

作者: panda王 时间: 2015-8-10 11:21

初次做细胞原代培养，文献提到“原代培养24 h的××细胞以
106／mL加入96孔培养板中”，请问我如何调整细胞浓度为106／mL。
谢谢。

作者: remonte 时间: 2015-8-10 11:21

吹打之后不要离心吗？难道把吹打之后的液体直接加到计数板中？

作者: ldh 时间: 2015-8-10 11:22

我还以为是104呢原来是10^4

作者: gmjghh 时间: 2015-8-10 11:22

细胞计数法
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。
1、制备细胞悬液
对于悬液培养的细胞，可直接进行下面的步骤2（计数与计算过程）。如果计数对象为贴壁生长的细胞，首先需将培养物制备成细胞悬液。
1）、终止培养，将培养液吸出，用PBS洗培养物一次。
2）、给培养瓶内加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液，于37℃消化3～5min 。期间不断在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时，弃消化液。
3）、加入一定量的培养液（如果这些培养细胞不再有用，可加PBS），用吸管吹打，使细胞脱壁而制成细胞悬液。
2、计数与计算过程
1）、在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。
2）、用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。
3）、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。
4）、按下式计数细胞悬液的密度：
细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×104个/ml
上图示计数的规则：表示可计数：表示不计数：
注意事项：
1）、务必使分散成单个细胞，取样计数前，充分混匀细胞悬液。
2）、显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个/10mm2或>500个/10 mm2 时，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。
......

==============================================================================

请问四个大格是什么意思，那个计数板上有5*5也就是25个4*4的格子，您所说的大格是4*4格吗

作者: junhun 时间: 2015-8-10 11:22

请问您一下，怎样配置细胞计数液啊？

作者: ALALA 时间: 2015-8-10 11:23

如果计数计的是中间的小格子是不是就不用再除以4了？

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)