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标题: 【求助】了解一下各种扫描电镜的样品前处理方法 [打印本页]

作者: danzi 时间: 2015-8-16 10:37 标题: 【求助】了解一下各种扫描电镜的样品前处理方法

我的课题是做弧菌的一种状态，想去做一个扫描电镜，对样品先处理方法很不了解，想在这里求助各位前辈，了解一下各种扫描电镜的样品前处理方法，看看能不能用在我这个课题上，谢谢前辈们了！

作者: malong 时间: 2015-8-16 10:37 标题: 【回复】

太简单了。
1.最好是用那种无固体的水溶性培养基，例如LB，来培养。
这方便分离菌体。
2.离心，收集菌体，弃掉培养基，这个一定要的。
否则等液体蒸发了，会在基底上留上一层培养基的薄膜。
3.再用0.9% NaCl 或无菌水悬浮菌体，最终OD600=1-2吧，
不能太浓了，否则会一大堆，看不到单个菌体。
你可以做一系列浓度的，最后选择最好的那个图片就行。
4.加10-20uL 在载玻片上，充分铺开并室温风干或酒精灯烘干。
不要温度过高。
注意正反面。
（玻璃载玻片要干净，上面不要留有灰尘等。并提前切成10mm* 10mm，这个要放在扫描电镜提供的那个小架子上的，尺寸不能再大了。）
5.扫描当天做完上面的工作，就可以直接拿去了。
其他的工作人员会告诉你如何做。

作者: malong 时间: 2015-8-16 10:38 标题: 【回复】

前辈，还想咨询下，这样处理会不会对细菌有伤害？我是做细菌状态的，希望找一个最小伤害的方法进行样品前处理，看到很多人运用的是冷冻干燥法，但是冷冻干燥对我的细菌就是有伤害了，所以这个方面很困惑~~~
谢谢啦

作者: danzi 时间: 2015-8-16 10:38 标题: 【回复】

都是死。
你想用电镜看活的？

作者: rrra6 时间: 2015-8-16 10:39 标题: 【回复】

细菌在扫描电镜下必死无疑，看不到活的。

作者: xgy412 时间: 2015-8-16 10:39 标题: 【回复】

是不是还应该用锇酸固定一下？

作者: rrra6 时间: 2015-8-16 10:40 标题: 【回复】

那也是死的。SEM 找不出活的的。

作者: n111 时间: 2015-8-16 10:41 标题: 【回复】

怎样处理可以确保细菌的鞭毛等结构不受损伤

作者: xgy412 时间: 2015-8-16 10:41 标题: 【回复】

文献中不是有很多细菌做TEM的吗，一般都是用PBS+戊二醛固定，然后梯度乙醇脱水去做的啊，TEM 要求用水作溶剂的，如果不固定的话细菌脱水会变形，TEM的样品室是会抽真空的，所以要先固定再脱水。也可以做冷冻电镜啊，不用固定脱水，没做过，不知道具体的操作。可以查查文献。

作者: aaby 时间: 2015-8-16 10:42 标题: 【回复】

请问菌不是要直接放在样品台上的吗？可以把载玻片放在样品台上测？载玻片不是不导电吗。

作者: malong 时间: 2015-8-16 10:42 标题: 【回复】

环境扫描电镜可以看活的。环扫可以低真空度，具体我不是很了解，但是从“看活菌”这个角度讲环扫比一般的扫描电镜会好很多。

作者: 双子座 时间: 2015-8-16 10:43 标题: 【回复】

您好，通过看您回复的处理过程，想请问下做大肠杆菌的SEM前处理不需要固定吗？

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