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【求助】293细胞，在做扫描电镜
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作者:
n111
时间:
2015-8-31 11:36
标题:
【求助】293细胞，在做扫描电镜
我做的是293细胞，在做扫描电镜之前，已经用乙醇和叔丁醇脱水干燥处理，但是照出来的扫描电镜照片中，细胞显示干裂的现象，是因为脱水干燥处理不当吗？而且细胞照片发黑，请问哪位专业人士指点一下，万分感谢
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作者:
daomei
时间:
2015-8-31 11:36
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1、溶剂清洗不干净。
2、乙醇和叔丁醇脱水最好要梯度
3、脱水后最好做固定
4、脱水后最好冻干
5、冻干前最好预冻
作者:
malong
时间:
2015-8-31 11:37
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不好意思，预冻后冻干是怎么处理。我原来没接触过细胞类的实验，知道的比较少。麻烦您了
作者:
大花猫bb
时间:
2015-8-31 11:37
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先在冰箱的冷冻舱里冻上，固化后再在冷冻干燥机中冻干，
作者:
xiaoxiaojinglin
时间:
2015-8-31 11:38
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乙醇和叔丁醇是按梯度的，脱水之前用戊二醛固定了，脱水之后是在室温下晾干的。您所说的冻干是怎么处理？
作者:
xiaoxiaoai
时间:
2015-8-31 11:39
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环境扫描电镜或许可以，但一般的电镜室都有要求用那个繁琐的方法，除非你的样品脱水后不变型
作者:
钻石
时间:
2015-8-31 11:39
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不行的，如果步骤太简单细胞会变形。其实整个过程下来也不是非常复杂，我们一般是从早上九点开始处理，两个样品一般到十二点多就差不多可以放冰箱冻了，下午再抽真空镀金，然后就可以看了，一天肯定能搞定的
作者:
886爱
时间:
2015-8-31 11:40
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谢谢指点！那你们这种干燥方法就是冷冻干燥了？
再问一下，固定的时候一定要用锇酸固定吗？
作者:
danzi
时间:
2015-8-31 11:40
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取适量已固定好血样于
1. 5 mL
离心管，低速离心
( 1500 r /min)
去上清，
0. 1
mol /L PBS
缓冲液漂洗
3
次，
每次
5 min;
体积分数
50%
、
70%
、
80%
、
90%
、
100%
酒精
( 2
次
)
脱水
;
加入适量无水乙醇混匀后，滴于洁净盖玻片上，室温自然干燥
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