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标题: 【讨论帖】MTT法和CCK－8法，哪个好？ [打印本页]

作者: 嗅嗅 时间: 2015-9-12 15:46 标题: 【讨论帖】MTT法和CCK－8法，哪个好？

测定细胞毒性一直都使用经典的MTT法，近来同仁公司生产CCK－8试剂用于细胞毒性和增值测定，试剂介绍中比较了MTT法和CCK－8之间的优劣，不知道有没有人用过这两种方法，两个方法之间到底有什么不同，那个的精密度和准确度更高一些？

作者: ero11 时间: 2015-9-12 16:01

请教：CCK-8是什么玩意儿？

作者: youyou99 时间: 2015-9-12 16:02

最近在做这方面的实验，查了一些资料，希望可以对楼主有所帮助。
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
Ø WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
Ø WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高。
该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。
总之，CCK-8的原理跟MTT其实是相同的，不同之处在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤，因此可以减少一定的误差。其他优点就是重复性优于MTT；对细胞毒性小；为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
但是CCK-8比MTT的价格要贵不少，所以一般来说，还是MTT法用的多。

作者: vcve 时间: 2015-9-12 16:02

同仁化学有CCK-8 不过还是MTT便宜啊

作者: zzzz 时间: 2015-9-12 16:02

CCK-8做细胞毒性实验，就很方便，加了CCK-8之后，过1-4小时后就可以直接读数，MTT加了之后，继续培养4小时，还要加DMSO溶解。CCK-8是MTT的优化版，都可以用。所测的结果是一致的。

作者: txwuyan 时间: 2015-9-12 16:32

提供公司的网页给大家参考：cuturl('http://www.dojindo.cn/productd.asp?pd=82')
我也是做MTT屡受挫折，准备改用其他方法，也关注过CCK-8，不过后来定了罗氏的LDH试剂盒，晶美代理的，3800多啊，心疼中！

作者: 8s5g 时间: 2015-9-12 16:35

定过PROMEGA的LDH，现在可能要1800，也比较贵，不过可以做10块板，稳定性稍稍比MTT好一些。罗氏的是不是比较好，价格这么贵？

作者: pou 时间: 2015-9-12 16:37

cck-8比mtt操作起来更方面，对于毒性测试，cck-8比mtt好很多，因为cck-8不破坏细胞，所以不影响实验。
悬浮细胞，操作时不需要离心，也就不会带走细胞

作者: xevin 时间: 2015-9-12 16:38

不知道cck-8 有没有便宜一些，看到上海的一个公司，一个板需要300多，有点太奢侈

作者: xevin 时间: 2015-9-12 16:39

这个以前讨论过的。
MTT：步骤有点烦琐，中间有吸液的步骤会造成不可避免发误差，特别是加DMOS前的一步，会吸走不少的结晶，后来改进了方法，用2%SDS-HCL溶结晶，不需要去培养基，但是必须37度过夜，耗时比较长。另外MTT反应，这一步，至少需要3小时，如果要做某个药物的急性作用，用这个方法就不太好了。
CCK-8：是MTT的改进，步骤简单，中间不需要吸出孔内的培养基，这样就减小了误差，另外CCK-8反应时间也短，最短1个小时就够了，特别适合做急性作用。还有CCK-8对细胞生长没有影响，测完细胞活性后，去掉含CCK-8的培养基，用新鲜培养基可以继续培养，并且还可以继续做其它指标的检测。MTT就不能。

作者: S6044 时间: 2015-9-12 16:40

我也用的是上海同人的,确实有点贵.但效果很好,每次检测标准曲线都比较一致.但上周课题讨论,一个师兄建议要优化我培养细胞的显色时间.所以用的更多.不知道有人做过没有.我培养的是小胶质细胞.

作者: 水母 时间: 2015-9-12 16:40

你说的那个1块板300多的有没有搞错啊，我用同仁的10块板才1200啊，还比你说的LDH便宜。

作者: dior 时间: 2015-9-12 16:41

个人认为MTT做贴壁细胞还勉强可以,CCK-8比较适合于做悬浮细胞,不需要离心机了

作者: 49888 时间: 2015-9-12 16:45

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药疹

cck-8觉得做药物毒性比mtt要好，毕竟对细胞没有杀伤。cck-8虽然贵，但是能得到好的结果，也值得了，毕竟我们研究生时间而是有限啊。呵呵

作者: nn255 时间: 2015-9-12 16:46

说实在的.我一直在寻找细胞增殖实验的新方法,因为有的方法,虽然被国际上认可,但毕竟要考虑到仪器设备及技术能力而不能行,最经典的MTT实验虽然价廉当然效果也可以,但毕竟太老了,我们实验室有个人用MTT方法发IF5分的杂志,其中被拒稿的原因之一就是方法太老.
上海同仁的cck-8方法简便有效,比mtt操作起来更方面，比mtt好很多，不破坏细胞，不影响其他实验,而且被国际上认可,贴一个近年来用此方法发的IF大于10的文献目录,希望对大家有帮助.

作者: redbutterfly 时间: 2015-9-12 16:47

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头痛

我的实验涉及淋巴细胞增殖和细胞毒性杀伤部分用的是CCK-8，我感觉CCK-8显色稳定，重复性好，检测数值在做统计学处理时不会让人头痛。

作者: dior 时间: 2015-9-12 16:47

我最近做了MTT也做了CCK8，感觉cck8虽然是贵了点，但是操作起来要方便的多，而且数据看起来比MTT的要好些，但是有种比CCK8性价比更好的alarm blue价格比CCK8便宜的多，国外用的比较普遍，操作起来也比较方便，发文章也不像MTT受限制,说明书上说要继续培养4－6小时，但是我们实验室有做的加试剂1－2小时也可以测，具体时间自己可以摸索一下，效果比CCK-8还要好，强烈推荐！！

作者: 3.14 时间: 2015-9-12 16:48

楼上的说得不敢苟同，alarm blue价格你可以问一下比CCk-8贵的多,
同样我最近也做了MTT及同仁的CCK-8，由于后者的性价比高，操作简便，不损伤细胞，其细胞可用于其他实验如用培养液冲洗后，可消化下来做免疫组化，没有影响，我对比过，而且价格也不算太贵，所以我推荐CCK-8

作者: dog002 时间: 2015-9-12 16:49

MTT分析发的步骤比较多也比较繁琐，比如MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好。
MTT形成的结晶用普通的DMSO溶解，我们做的过程中遇到了麻烦：
1：去上清后加入100ul的DMSO, 感觉不能很好的完全溶解
2：每次做的结果有很大差异，不稳定，和镜下观察的结果也不一致。不知道该相信哪一次的结果。
3：我的师妹做三氧化二砷诱导HEPG2和7721细胞凋亡的实验，用MTT听说没有得到理想的结果，后来又听她说用那个CCK-8试剂合做了，结果还是比较好的。后来老板就让我们淘汰了MTT,改用CCK-8了。
其实大家也可以亲自做个比较就知道那个好了。

作者: bs4665 时间: 2015-9-12 16:50

CCK-8试剂使用较简便，实验结果较稳定；MTT太繁琐，结果不太稳定。CCK-8价格稍贵，不过对一般实验室还可承受。

作者: vvmmoy 时间: 2015-9-12 16:50

有没有人用过碧云天的cck－8试剂盒，从网上看到他们的比同仁的便宜点，但不知道效果一样吗？？有经验的战友说一下
cuturl('http://www.beyotime.com/c0038.htm#introduction')

作者: 莲花白 时间: 2015-9-12 16:50

CCK-8是同仁化学研究所发明的。目前能搜索到的CCK-8的相关论文都是同仁（dojindo）的。而且cck-8问世后的10多年来，同仁搜集了大量相关的实验数据，能够提供非常全面的技术支持。至于碧云天的CCK-8的效果没有用过，无法评价。
所以该产品属于同仁化学研究所的专利产品。

作者: ero11 时间: 2015-9-12 16:52

我们实验室现在一直用的是cck-8,比MTT方便，而且重复性还是很好的。我感觉最好的就是cck-8染色以后不会伤害细胞，把染色的培养基吸出来以后还可以继续培养细胞。

作者: luoliqiong 时间: 2015-9-12 16:53

我看到说明书上说cck－8在－4度可以保存一年，应该没有问题的吧
而MTT配好后只能保存一周，差别挺大

作者: dhpbj 时间: 2015-9-12 16:54

我们实验室最初用的也是MTT,后来看到同仁有免费试用装,用了后觉得还不错,又连续买了3000次的.总的来说,CCK-8使用方便简单,重复性好,对细胞毒性小.实验中根据不同细胞类型,加CCK-8后,培养时间要控制好,一般OD值在1-2之间比较好.

作者: dior 时间: 2015-9-12 16:55

澳玛蓝（almarbule)更好
在细胞培养液中稳定，可以长时间监测细胞活性；对细胞无毒；无放射性；对使用者无毒。最关键的是价格也不贵哦

作者: JK.jon 时间: 2015-9-12 16:55

前段时间用MTT,每次出来的结果老有似是而非之嫌,还浪费了很多细胞,后来用了同仁的cck-8,出来的结果总算有了定论,而且做cck-8的细胞,用PBS洗两遍,再加入血清培养液细胞无损伤(我做的是干细胞),继续做其他实验,如免疫组化,流式等,总算没让我辛苦养的细胞浪费.那可不是钱能买到的,一寸光阴一寸金呦,呵呵

作者: chengjie79 时间: 2015-9-12 16:58

请问CCK-8到底多少钱呢？

作者: cbou876 时间: 2015-9-12 16:58

谢谢各位高手的指教。
我现在也开始做MTT，我是用细菌作用细胞后，取不同的时间观察细胞的活力和增殖，发现加过细菌的蓝紫色比不加的细菌培养孔还蓝，难道是细菌促进细胞生长，还是细菌体内的线粒体也能产生蓝紫色结晶？

作者: 莲花白 时间: 2015-9-12 16:59

可能是细菌体内的线粒体也和MTT反应,产生蓝紫色结晶

作者: abc816 时间: 2015-9-12 16:59

我用cck-8和Brdu同时检测过脾细胞，发现对悬浮细胞，Brdu效果很好。当然价钱相差也大，不过在检测MSC增值时用两者检测效果都不错。

作者: luoliqiong 时间: 2015-9-12 17:00

tetracolor one 也不错。非常简便

作者: yayya 时间: 2015-9-12 17:00

cck-8哪里的比较快，如果订购的话。。大概多久？？？价格？？？谢谢！

作者: 莲花白 时间: 2015-9-12 17:00

CCK8可以从同仁化学研究所（dojindo）购得，到货一般2-3天，价格根据包装而异。你到网上一搜就搜到了。

作者: kewanqi2011 时间: 2015-9-12 17:01

具体价格请直接查询公司网页：cuturl('http://www.dojindo.cn/productd.asp?pd=82')
我订货后，EMS两天到货，不用负担运费，还是相当快捷的！

作者: kewanqi2011 时间: 2015-9-12 17:03

CCK-8我也用过，正如大家所说的，很方便，到货速度也很快（第一天订货，第二天就到了，真是快的惊人啊，呵呵）。
我是05年底定的，1000孔的，分两瓶装的，当时只用了一瓶，另一瓶放在－20度，最近拿出来用，效果还很好。
确实不错，推荐大家用！

作者: qianqin1977 时间: 2015-9-12 17:04

我是直接购买同仁化学研究所的CCK8,作出的标准曲线还是很好的。重复性可以达到小数点后2位。而且不需要离心96孔板，减少了数据的人为误差。值得推荐。

作者: txwuyan 时间: 2015-9-12 17:04

我是做中药化学成分分离的，最近老板要求我筛选手头化合物的神经细胞保护作用，只给2个月的时间。
可怜我从完全不懂细胞培养开始做，开始非常没有底，一是因为怕实验做不好（细胞难养活，MTT也繁琐的听说），二是不知道辛辛苦苦作出来的数据有没有杂志感兴趣。上次有个师兄把新化合物的结构和活性投了PLANTA MEDICA，结果说MTT方法结果不可靠（好像某些类型的化合物比如黄酮能影响MTT的显色反应）给拒稿了，SCI我的命啊～要是这样不如不做。
当时买CCK-8的时候也犹豫，我看了原理和操作，确实不错，但刁钻的杂志老编不认的东西我可不敢用。于是向同仁要了它们产品发表的文章光盘，仔细看了，才感觉踏实了：发到10分以上杂志的文章不少呢（这可是咱做梦都想的美事），巧的是里面就有类似我设计的实验方案的文章！于是，毫不犹豫，买了个3000次的试剂盒（幸好多买，两个礼拜我就已用了1000多次了）。虽然贵点，但老板买单让他心疼去吧；再说回来，我用MTT做了发不出文章，钱也照花老板更心疼。
总之，如果你是个细胞实验的门外汉，时间紧、操作不熟、想发好一点的文章、囊中不是那么羞涩的话～我建议：您还是赶紧买CCK-8吧！

作者: seagate 时间: 2015-9-12 17:04

我是做 DC 细胞的，因为每次做实验时细胞量偏少，所以用 MTT 很难做出漂亮的结果。后来老板推荐我用 cck-8 做，结果很有改观，重复性好，CV值也低，就是偏贵一点儿，呵呵。

作者: gmt 时间: 2015-9-12 17:05

个人感觉这CCK-8在这短短的两年的时间里，从人们不知道到几乎成为一种经典方法，确实很惊人阿。
新手总是有的，最近很多人向我询问CCK-8的事情。还是把这帖子顶一下省事。呵呵！

作者: zhezhe 时间: 2015-9-12 17:05

回复 MTT和CCK-8的比较：
（上海同仁）的原理基本是一致的，但也存在如下的区别：
（1）：常规操作的MTT法受药物本身的颜色、培养基的颜色、血清的浓度使结果的变异较大。如采用潘兴瑜的MTT改进法将有效的降低试验的飘变率，本人硕士期间就采用潘的MTT改进法，试验重复一两次就的到理想的结果！受益非浅！
（2）：CCK-8是最近新出现的方法，它操作简便、结果变异率小。对悬浮细胞的测定有它独到的地方！CCK-8为黄色的，要采用无酚红的培养基进行测量！
本人博士期间采用的CCK-8法，自我认为两种方法各有千秋，有时不可能互相替代。当你测量药物的药效时，如果药物本身有颜色，那么采用潘的MTT改进法可以通过离心去除颜色的干扰！多次的离心和吸取上清要求操作者要小心和仔细，否则有降低试验的准确率，而这却是CCK-8法的长处所在！

作者: 2541 时间: 2015-9-12 17:05

真羡慕阿!!1 我们买个MTT都会争取N次,才批准

作者: chengjie79 时间: 2015-9-12 17:06

我的细胞用的是RPMI1640培养基，有人说CCK-8实验时必须用不含酚红的培养基，请问是这样的吗？

作者: eric930 时间: 2015-9-12 17:06

最近也想换方法啊，MTT有时会一加就变深黑，实在无语了，想问问CCK-8会出现这种情况么

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